简介:摘要目的探讨乙肝病毒编码X蛋白促进甲胎蛋白表达的分子机制。方法非参数检验-秩和检验评估肝癌患者HBV感染与否与AFP表达水平间的相关性;在PLC/PRF/5肝癌细胞系中转染HBV、HBx及P53真核表达质粒,36 h Western blot和qRT-PCR分别在蛋白质和mRNA水平检测HBV和HBx对P53和AFP表达的影响,以及P53对AFP表达的影响;在PLC/PRF/5细胞中转染包含AFP基因启动子和沉默子的荧光素酶报告质粒,通过检测荧光素酶活性改变明确沉默子区域,再将包含沉默子的报告载体与HBV/HBx质粒共转染PLC/PRF/5细胞,通过检测荧光素酶活性的改变验证HBV/HBx对AFP基因沉默子区域的作用;用ChIP实验验证P53在AFP基因沉默子区域的结合,并证实HBx对P53与作用序列结合能力的影响。结果统计分析发现HBV感染与AFP表达之间存在明显相关性,HBV阳性肝癌患者的血清AFP值总体中位数为296.8 ng/ml,而HBV阴性患者的AFP总体中位数为71.5 ng/ml(P=0.02),HBV阳性肝癌患者的AFP表达水平明显高于HBV阴性肝癌患者;P53可以抑制AFP表达(P<0.001),而HBV和HBx均能抑制P53表达(P=0.0011、P=0.0027),并促进AFP表达(P=0.0014、P<0.001);HBV和HBx可以作用于AFP基因沉默子区域,促进基因转录(P<0.001、P=0.0019;P=0.0046、P=0.0015);P53与AFP基因沉默子的结合作用能够被HBx所够削弱。结论HBx可通过抑制P53表达,并且抑制P53在AFP基因沉默子区域的结合,以此促进AFP基因转录,并进一步促进AFP蛋白表达。
简介:摘要目的讨论甲胎蛋白、铁蛋白、癌胚抗原联合检测诊断原发性肝癌的意义以及在体检中的价值。方法采用电化学发光法检测血清中甲胎蛋白(AFP)、铁蛋白(FERR)、癌胚抗原(CEA)的含量,健康体检人员甲胎蛋白和癌胚抗原先用酶联免疫法(ELISA)检测,阳性的再用电化学发光法检测其含量。结果80例原发性肝癌病人的AFP阳性符合率62.5%,FERR阳性符合率60.0%,CEA阳性符合率30.0%。AFP-FERR联合阳性符合率82.5%,AFP—CEA联合阳性符合率77.5%,AFP-FERR与AFP-FERR-CEA联合对原发性肝癌的阳性符合率由82.5%增至95.0%。结论应加强健康体检,最好定期检查,以便于各类疾病的早发现早预防早治疗,而对于原发性肝癌的辅助诊断,应以联合检测为准。
简介:目的分析甲胎蛋白、瘦素及肌钙蛋白Ⅰ等重要生物标志物的绝对定量方式。方法采用高效液相色谱-同位素稀释串联质谱法对人源甲胎蛋白、人源瘦素以及重组肌钙蛋白予以测量,并对比分析其检测方法的准确性。数据比较采用t检验,P〈0.05为差异有统计学意义。结果对4份平行样品予以酶解,并将酶解后的产物予以高效液相色谱-同位素稀释串联质谱检测,计算出肽段FK和NR浓度,最终AFP结果为5.45μmol/g,与水解法检测的结果相比,显示其相对偏差为6.8%。二者检测结果的一致性检验显示,差异无统计学意义(P〉0.05)。人源瘦素含量为0.59g/g,与水解法测出的0.63g/g相比,相对标准偏差为5.21%~6.07%,处于误差允许范围内(t=0.89,P〉0.05);肌钙蛋白Ⅰ的质量分数为0.24g/g,与水解法测定的0.21g/g比较,可知其相对偏差处于4.75%~8.43%,处于误差允许范围内(t=0.53,P〉0.05)。结论高效液相色谱—同位素稀释串联质谱法检测人源甲胎蛋白、人源瘦素及重组肌钙蛋白Ⅰ的准确性高,灵敏度好,且可重复进行,具备推广应用价值。
简介:摘要目的观察原发性肝癌患者的甲胎蛋白变化,分析对比其结果的意义,并探讨甲胎蛋白检测对原发性肝癌诊治的作用。方法对本院174例原发性肝癌患者、良性肝病患者和同期健康者进行甲胎蛋白检测,其中原发性肝癌患者共63例、良性肝病患者共59例作为实验组,同期健康者共52例作为对照组,同时对各组进行甲胎蛋白检测结果分析,评价甲胎蛋白检测在诊治原发性肝癌的临床价值。结果在63例原发性肝癌患者中,甲胎蛋白检测浓度是(331.7±80.3)ng/ml,良性肝病患者的甲胎蛋白检测浓度是(36.9±12.7)ng/ml,正常健康者的甲胎蛋白检测浓度是(5.3±2.1)ng/ml,差异有统计学意义(P<0.05)。结论在原发性肝癌诊断中,甲胎蛋白检测结果发挥重要作用,甲胎蛋白检测对原发性肝癌诊治具有更重要的临床价值。
简介:摘要目的通过对本实验室内使用的化学发光法和电化学发光法系统对血清中甲胎蛋白(AFP)含量进行测定比对,探讨二者间结果是否具有可比性。方法根据美国国家实验室标准委员(NCCLS)的EP9-A2文件,收集50例本院就诊患者及健康体检人群血清标本,以Rochee602电化学发光免疫分析仪为对比仪器(x),长光华医A1800化学发光测定仪为实验仪器(y),同时检测血清中AFP的含量,分析两种化学发光仪测定结果之间的相关性和2种方法检测结果的一致性。结果2种仪器测定的结果具有良好相关性(r=0.996),一致率为94%。结论在严格按照操作规程进行检测的前提下,2种方法测定结果基本一致,实验仪器能基本满足临床检测需要。
简介:摘要目的探讨研究酶联免疫吸附法(ELISA)和电化学发光分析法(ECLIA)对甲胎蛋白(AFP)检测的效果。方法对65例血清标本同时采用ELISA和ECLIA方法进行AFP检测,并对同一标本连续测定20次进行批内变异的比较,同时对标本每天测定1次,连续测定20天进行批间变异比较。评价两种方法的稳定性、敏感性及重复性。结果ECLIA其检出限为0.50μg/ml,线性范围为0.50μg/ml~3000μg/ml;当AFP<400μg/ml时,ELISA和CL对AFP检测敏感性差别无统计学意义;当AFP>400μg/ml时,ECLIA检测敏感性高于ELISA,P<0.05,有统计学差异;ECLIA低、中、高值批内和批间CV均小于5,较ELISA重复性好、稳定性高。结论ECLIA敏感性高、稳定性、重复性好。