简介:目的建立c-Met慢病毒载体转染人脐带间充质干细胞(hUMSC),为治疗肝衰竭作为种子细胞.方法培养hUMSC,经流式细胞技术检测细胞表面表型,转染c-Met慢病毒载体,在荧光显微镜下观察转染效率,确定最佳多重感染复数(MOI).采用嘌呤霉素抗性筛选稳定表达c-Met的hUMSC细胞系,采用Western-blot法检测细胞c-met蛋白表达量.结果P5代细胞高表达CD44、CD90和CD105抗原,不表达CD31、CD45和CD34相关造血细胞抗原,符合人脐带间充质干细胞的特性;构建成功的c-Met慢病毒载体转染人脐带间充质干细胞最佳MOI=80,经嘌呤霉素筛药,在荧光显微镜下观察发现荧光阳性率为100%,且经Western-blot法检测证实该细胞过表达c-Met蛋白.结论成功构建过表达c-Met基因的脐带间充质干细胞,为进-步实验打下了基础.
简介:【摘要】目的:概括分析人脐带间充质干细胞治疗急性移植物抗宿主病的护理方法。方法:选取接受我院易吉银造血干细胞移植术后出现急性移植物抗宿主病的病患共计10例,时间分布界限2022年1月至2023年1月,运用常规免疫抑制疗法与糖皮质激素治疗的同时,进行人脐带间质充血干细胞治疗,为病患提供心理疏导、输注护理等服务,记录输注后不良反应发生情况,总结护理措施。结果:10例病患均接受人脐带间充质干细胞治疗,输注过程中,没有出现严重的不良反应症状;所有病患住院时间为30日-60日(45.32±5.24)。结论:想要提高人脐带间充质干细胞治疗急性移植物抗宿主病的治疗效果,需做好输注准备工作,合理把控输注的速度,实时观察病患的生命体征。
简介:摘要目的验证过表达小RNA(micro RNA, miR)-23b的骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells, BMSCs)回输对治疗实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis, EAE)小鼠具有更好的协同治疗效果。方法体外实验将EAE小鼠新鲜外周T淋巴细胞与miR23b-BMSCs (miR23b-BMSC-LN组),未处理BMSCs(BMSC-LN组),或未加入BMSCs的空白对照(Control-LN组)共培养48 h,应用酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)检测其中白细胞介素(interleukin, IL)-17、转化生长因子-β(transforming growth factor, TGF-β)的表达水平。用CD4 Percp、CD25 PE、IL-17 APC、Foxp3 APC抗体对细胞进行染色,流式细胞仪分析MOG35-55刺激后的CD4+ IL-17 + Th17细胞和CD4 + CD25 + Foxp3 + Treg细胞的百分比;体内实验应用HE染色分析回输miR23b-BMSCs组(miR23b-BMSC-EAE组),回输未处理BMSCs组(BMSCs-EAE组),假手术组(ctrl-EAE组)的脊髓白质的炎性浸润情况。结果过表达miR-23b可增强BMSCs可抑制Th17细胞的分化能力[(4.34±0.32)%比(8.21±0.16)%,χ2=10.03, P<0.05],并促进调节性T(T regular, Treg)细胞亚群的分化[(1.05±0.27)%比(0.24±0.06)%,χ2=12.67,P<0.05)]。在病理表现上,miR23b-BMSCs移植能够通过降低Th17/Treg细胞比率以及抑制炎症细胞浸润血脑屏障,从而减轻脊髓脱髓鞘,延缓EAE病程的进展。结论过表达miR23b-BMSCs回输治疗具有更高效更持久的治疗效果,为BMSCs治疗自身免疫疾病的应用奠定了基础。
简介:【目的】通过transwell趋化实验,观察经慢病毒转染后过表达CXCR4的人脐带间充质干细胞(humanumbilicalcordmesenchymalstemcells,HUMSCs)是否具有更好的迁移作用。【方法】通过组织贴壁法,分离和培养来源于人脐带华通胶组织中的MSCs。经慢病毒转染,将CXCR4目的基因转染至第3代HUMSCs,并进行免疫荧光、westernblotting检测在HUMSCs中表达CXCR4基因的情况。通过transwell小室进行HUMSCs的趋化迁移试验检测,观察转染CXCR4基因后的HUMSCs迁移能力是否增强。【结果】自脐带分离培养的HUMSCs通过慢病毒转染后,可过表达CXCR4基因。Transwell试验发现,过表达CXCR4的HUMSCs较正常HUMSCs和未转染目的基因的HUMSCs,迁移的细胞数明显增加(P〈0.05)。【结论】通过慢病毒转染过表达CXCR4的HUMSCs,其趋化、迁移能力明显增强。