简介：摘要成骨细胞是主要发挥骨形成功能的细胞，在骨重建中发挥重要作用。细胞骨架广泛存在于真核细胞中，不仅在维持细胞形态及细胞内部结构有序性中至关重要，还可参与机械信号转导，调控细胞分化、增殖、凋亡、迁移和相关基因的表达。研究成骨细胞细胞骨架的功能，可为口腔领域中如引导骨再生技术、正畸牙移动、牵张成骨及术后骨愈合等方面提供新的思路。本文就成骨细胞细胞骨架的相关研究进展进行综述。

简介：摘要目的探讨鸢尾素(Irisin)对成骨细胞炎性反应的保护作用及其机制。方法2018年8月至2019年4月，往小鼠成骨细胞(MC3T3-E1，购自北京北纳生物公司)加入鸢尾素预处理后，再经脂多糖(LPS)刺激。实验分为6组：对照组(Control组)、LPS(5 mg/L)、LPS＋Irisin(25 μg/L)、LPS＋Irisin(50 μg/L)、LPS＋Irisin(100 μg/L)和LPS＋Irisin(200 μg/L)组。用噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖，2’，7’-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)检测细胞内活性氧自由基(ROS)含量，流式细胞术检测线粒体活性与细胞凋亡率，蛋白质印迹法(Western blot)检测单磷酸腺苷酸活化蛋白激酶-α (AMPK-α)、p-AMPK-α与半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白表达。两组比较采用t检验，多组比较采用单因素方差分析(One-way ANOVA)，两两比较采用LSD检验。结果(1)与Control组比较(0.864±0.021)，LPS组细胞增殖明显下降(0.719±0.018)，而100 μg/L(0.760±0.033)与200 μg/L(0.809±0.025) Irisin预处理组细胞增殖的明显增加(F＝23.625，P<0.05)，差异有统计学意义；(2)与Control组比较(286.600±33.448)，LPS组ROS含量显著增加(402.600±42.694)，而Irisin预处理组(25～200 μg/L)(323.400±27.437、322.600±28.325、309.000±42.936、307.800±24.045)明显抑制ROS形成(F＝6.986，P<0.01)，差异有统计学意义；(3)与Control组比较，LPS刺激后明显降低线粒体活力[(31.800±3.242)%、(15.667±1.804)%，t＝7.532，P<0.01]，细胞凋亡率显著增加[(7.610±0.229)%、(14.057±1.631)%，t＝6.777，P<0.01]，差异有统计学意义。p-AMPK-α表达显著降低[(0.546±0.178)、(0.186±0.093)，t＝6.777，P<0.01]，而Caspase-3水平明显升高[(0.212±0.031)、(0.324±0.026)，t＝4.811，P<0.01]，差异有统计学意义；(4)与LPS处理组比较，Irisin＋LPS组中MC3T3-E1线粒体活性明显升高[(10.157±0.774)%、(27.500±1.572)%，t＝17.145，P<0.01]，细胞凋亡率显著减少[(11.927±0.385)%、(7.017±1.080)%，t＝7.417，P<0.01]，p-AMPK-α表达显著升高[(0.356±0.059)、(0.551±0.044)，t＝4.567，P<0.05]，凋亡蛋白Caspase-3显著下降[(0.384±0.071)、(0.202±0.031)，t＝4.051，P<0.05]，差异均有统计学意义。结论Irisin抑制LPS诱导的小鼠成骨细胞凋亡，这一机制可能与激活AMPK信号有关。

简介：摘要目的通过高加速度离心加载装置建立高重力加载模型，探讨不同高重力加载环境对成骨细胞黏附及细胞骨架的影响，并且分析淫羊藿苷对高重力加载后细胞黏附和细胞骨架的影响。方法将MC3T3-E1细胞按2×105个/cm2的密度接种于细胞培养皿中。实验共分为6组：对照组、单纯给药组、10 G加载组、10 G给药组、40 G加载组、40 G给药组。加载组应用高加速度离心加载机对细胞施行加载，连续加载3 d，每天30 min。对照组和单纯给药组暴露于正常重力情况下，其余条件与实验组无差别。给药组淫羊藿苷均采用10-7 mol/L浓度，且按预防给药的方法实验。通过茜素红染色、碱性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP）活性测定、CCK-8细胞增殖实验、细胞骨架鬼笔环肽染色、qPCR和Western Blot等相关分子生物学技术检测淫羊藿苷对高重力环境下成骨细胞integrin α5、integrin β1和F-actin的影响。结果所有模型均成功制备。茜素红染色：淫羊藿苷可促进成骨细胞钙化结节形成，10 G加载可促进成骨细胞矿化，而40 G加载则抑制成骨细胞的矿化。ALP活性检测：单纯给药组、10 G加载组、40 G加载组的检测OD值分别为0.246、0.331、0.163，与对照组的0.207相比，差异均有统计学意义（P<0.05）；10 G给药组和40 G给药组分别为0.373和0.180，与各自加载组的差异有统计学意义（P<0.05）。CCK-8增殖实验：单纯给药组OD值为0.650，与对照组0.551的差异有统计学意义（P=0.031）；10 G加载组和40 G加载组OD值分别为1.193和0.245，与对照组的差异均有统计学意义（P<0.05）；且10 G给药组和40 G给药组1.300和0.310，与各自加载组的差异有统计学意义（P<0.05）。鬼笔环肽染色：10 G加载细胞促进的数量增加，但细胞形态及骨架未见明显变化，40 G加载则抑制，淫羊藿苷对细胞形态无影响，但对加载损伤后的细胞有一定修复作用。QPCR和Western Blot实验结果一致证实，淫羊藿苷作用后，integrin α5、integrin β1和F-actin的mRNA和蛋白表达上调，10 G加载可促进integrin α5、integrin β1和F-actin mRNA和蛋白的表达，40 G加载则明显抑制其mRNA和蛋白的表达。结论10 G条件和淫羊藿苷干预均可促进成骨细胞的生长发育、细胞黏附及细胞骨架的稳定，而40 G则具有明显抑制作用。

简介：摘要目的探讨自体软骨细胞联合Ⅰ型胶原蛋白三维支架治疗膝关节剥脱性骨软骨炎的疗效。方法选取近5年来在青岛市黄岛区中心医院采用自体软骨细胞联合Ⅰ型胶原蛋白三维支架治疗膝关节剥脱性骨软骨炎的患者12例，用单因素方差分析评估术前与术后6个月、12个月国际膝关节文献委员会(IKDC)膝关节评估表、Lysholm膝关节功能评分。术后12个月磁共振成像(MRI)评估软骨修复情况。结果12例患者术后6个月、12个月的IKDC评分分别为(83.7±5.6)、(91.7±3.7)，Lysholm评分分别为(87.5±5.2)、(93.6±2.1)，均较术前IKDC评分(53.9±6.7)(F＝158.877)、Lysholm评分(59.1±7.2)(F＝104.258)明显改善(均为P<0.05)；每2个时间点之间的IKDC评分、Lysholm评分，差异均具有统计学意义(P<0.05)。术后12个月MRI检查显示，所有患者的移植软骨恢复良好，均未出现移植物脱落或局部水肿。术后随访期内，所有患者均未出现膝关节感染。结论自体软骨细胞联合Ⅰ型胶原蛋白三维支架能有效治疗膝关节剥脱性骨软骨炎。

简介：摘要目的探讨miR-204通过Wnt信号通路对骨质疏松症小鼠成骨细胞增殖的影响及机制分析。方法雌性昆明小鼠分为：对照组、假手术组和骨质疏松症组，采用双侧卵巢切除法建立去卵巢骨质疏松小鼠模型并进行鉴定；提取小鼠原代成骨细胞并鉴定；细胞转染并检测miR-204的表达水平；MTT检测各组细胞活力；各组细胞碱性磷酸酶（ALP）活性的检测；Transwell检测各组细胞的侵袭能力；细胞流式术检测各组细胞凋亡情况；细胞流式术检测各组细胞Caspase-3活性；双荧光素酶报告基因检测miR-204和β-catenin、LRP-5间的相互作用；Western blot检测Wnt信号通路相关蛋白表达情况。结果骨质疏松症组小鼠骨密度较对照组和假手术组明显降低（P=0.007，P=0.057），表明骨质疏松症小鼠造模成功。miR-204的表达水平在miR-204模拟物组明显提高（P=0.072），在miR-204抑制剂组下降（P=0.031）；miR-204模拟物组成骨细胞活力和ALP活性提高（P=0.007，P=0.043），miR-204抑制剂组成骨细胞活力和ALP活性下降（P=0.007，P=0.035）；miR-204模拟物组成骨细胞的侵袭能力明显增强（P=0.006），miR-204抑制剂组成骨细胞的侵袭能力下降（P=0.036）；miR-204模拟物组成骨细胞的凋亡能力和Caspase-3活性下降（P=0.041，P=0.045），miR-204抑制剂组成骨细胞的凋亡能力和Caspase-3活性增强（P=0.005，P=0.039）；miR-204与β-catenin、LRP-5之间有靶向关系；miR-204模拟物组成骨细胞中β-catenin和LRP-5蛋白表达均上调（P=0.043，P=0.009），miR-204抑制剂组成骨细胞中β-catenin和LRP-5蛋白表达均下调（P=0.041，P=0.032）。结论miR-204可能促进成骨细胞的增殖，激活Wnt信号通路，对骨质疏松症有一定的保护作用。

简介：摘要目的观察肌球蛋白10(Myo 10)对破骨细胞的分化及功能的影响，并探讨其机制。方法采用核因子-κB(NF-κB)受体活化因子配体(RANKL)和巨噬细胞集落生长因子(M-CSF)诱导RAW264.7细胞(中国科学院上海细胞生物研究所)向破骨细胞分化，随机分为抗Myo 10组和对照组。应用抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色法鉴定并定量TRAP＋破骨样细胞的数量。使用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测破骨细胞分化及功能特异性基因的转录水平变化。将C57BL/6小鼠随机分为Myo 10 KO组和对照组，通过组织学染色苏木精-伊红(HE)和MicroCT评估Myo 10抑制对骨量的影响。两组间比较采用t检验。结果TRAP染色显示Myo 10抑制将促进破骨细胞的分化效率，TRAP＋破骨细胞的数量在抗Myo 10组为(65.6±8.4)个，高于对照组的(41.3±6.2)个，差异有统计学意义(t＝4.013，P<0.05)；RT-PCR结果提示Myo 10抑制反而提高了基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、活化T-细胞核因子1(NFATc1)及组织蛋白酶K(CtsK)的表达，分别为对照组表达值的(2.2±0.3)、(1.9±0.2)和(1.5±0.2)倍，差异有统计学意义(t＝5.410、6.086、3.602，P<0.05)；在体实验则提示Myo 10抑制后将增强骨吸收功能，出现骨质疏松样改变。结论Myo 10的抑制能促进NFATc1的表达，促进破骨细胞分化和骨吸收功能，导致骨量减少。

简介：摘要微丝作为软骨细胞的细胞骨架的组成之一，主要由肌动蛋白组成。在软骨细胞中，微丝参与维持软骨细胞形态和结构、进行胞内信号转导和机械转导，影响软骨细胞发育。微丝的聚集、排列及分布受到多个信号通路调节，其中Rho GTP酶发挥重要作用，内源性或外源性的机械信号通过跨膜蛋白、离子通道等激活Rho GTP酶，调节肌动蛋白。而细胞极性则是指细胞形态、细胞膜、细胞骨架以及细胞器的分布等的不对称性，可调控细胞的分化、迁移和旁分泌，其中细胞骨架的极性是细胞极性最重要的特征，其极性的改变可以影响细胞极性。在软骨细胞发育过程中，伴随着极性的形成，是软骨细胞成熟的标志，对关节稳态的维持十分重要。目前与软骨细胞极性形成有关的研究较少，研究表明，TGF-β相关信号通路参与椎间盘和生长板的软骨细胞极性形成，但在关节软骨细胞中尚无类似报导。本文将对调节Actin的信号通路和调节细胞极性形成的信号通路进行综述，并试图阐明两者在软骨发育中的作用。

简介：摘要破骨细胞是具有骨吸收能力的多核巨细胞。在破骨细胞分化过程中，细胞因子刺激破骨细胞前体细胞表达融合蛋白，如树突状细胞特异性跨膜蛋白（DC-STAMP）、破骨细胞多次跨膜蛋白（OC-STAMP），为破骨细胞融合奠定基础。在疾病状态下，细胞因子的分泌异常，导致破骨细胞融合蛋白表达增加。这促进破骨细胞前体细胞融合形成骨吸收能力更强的破骨细胞。破骨细胞融合蛋白的异常表达是破骨细胞造成病理性骨破坏的前提。阐明破骨细胞融合蛋白的作用机制，对于干预骨破坏性疾病具有一定意义。基于此，本文通过论述破骨细胞融合蛋白的研究现状，为进一步研究破骨细胞造成的骨破坏性疾病提供参考。

简介：摘要目的探讨伴破骨细胞样巨细胞的乳腺癌（COGC）的临床病理特征。方法收集2016年2月江苏省泰州市人民医院和2008年5月上海市普陀区中心医院COGC患者各1例，观察其组织学形态、免疫表型及临床病理特征，并复习相关文献。结果2例患者均为女性，年龄分别为48岁及57岁，均因乳房无痛性肿块就诊。光学显微镜下主要表现为浸润性筛状癌及非特殊类型浸润性导管癌，破骨细胞样巨细胞散布在肿瘤组织内，间质内有不同程度的出血和炎症细胞浸润。免疫组织化学示癌细胞雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）弥漫强阳性，破骨细胞样巨细胞CD68阳性。结论COGC是一种罕见肿瘤，其内的破骨细胞样巨细胞形态特殊，需要与多种类型的多核巨细胞鉴别，其诊断及鉴别诊断需要依据形态学特征及免疫表型。

简介：摘要目的研究橙皮苷对钛颗粒介导前破骨细胞分化及成熟的影响。方法骨髓巨噬细胞在巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)30 ng/ml及核因子κB受体活化因子配体(Rankl)50 ng/ml刺激下，诱导分化为破骨细胞。扫描电镜观察钛磨损颗粒形貌结构。对不同浓度下橙皮苷对巨噬细胞增殖的影响进行t检验分析得出最低有效浓度；对抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)阳性细胞数及骨吸收陷窝面积判断橙皮苷对破骨细胞分化及成熟的影响。最后通过实时定量PCR(RT-PCR)验证橙皮苷对钛颗粒介导的破骨基因，包括活化T细胞核因子(NFATc1)、组织蛋白酶K (CTSK)、TRAP的影响。TRAP阳性细胞数及骨吸收陷窝面积、RT-PCR结果数据均采用t检验分析。结果扫描电镜显示钛磨损颗粒大小在1～3 μm。CCK-8实验结果显示橙皮苷对巨噬细胞增殖有促进作用，浓度超过40 μmol/L后，会对巨噬细胞产生抑制作用(F＝40.1, P<0.01)，所以选择40 μmol/L作为对巨噬细胞分化的影响。在抗酒石酸酸性磷酸酶染色中发现40 μmol/L的橙皮苷会明显抑制前破骨细胞的分化，TRAP阳性细胞数目及破骨细胞的面积明显减少(t＝5.5，P<0.05)。与对照组相比，扫描电镜观察钛颗粒介导骨吸收陷窝面积明显增多，但加入40 μmol/L的橙皮苷后，这种吸收效果或明显减少(t＝6.1，P<0.05)。最后，通过RT-PCR实验得出，40 μmol/L的橙皮苷会明显抑制破骨细胞分化相关NFATc1, CTSK，TRAP基因(t＝7.1、4.8、9.1，均为P<0.05)。结论橙皮苷抑制钛颗粒介导的破骨细胞分化及成熟。

简介：摘要目的探讨金属调节转录因子-1(MTF-1)对破骨细胞分化和功能的影响并探讨其可能的分子机制。方法采用定量聚合酶链反应(qPCR)检测破骨细胞分化过程中MTF-1的表达变化。应用MTF-1小分子抑制剂LOR-253(50、100 nmol/L)抑制MTF-1转录活性后，采用抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色、TRAP酶活检测、qPCR实验及骨板吸收试验，检测MTF-1功能抑制对破骨细胞分化与功能的影响。采用单因素方差分析ANOVA和SNK检验分析组间差异。结果核因子κB受体活化因子配体(RANKL)处理后1d，RAW264.7细胞的MTF-1表达水平升高达5.13倍。LOR-253下调MTF-1转录活性后，RANKL诱导形成的破骨细胞数目显著减少(F＝686.079，P<0.05)，对照组为(74.6±3.2)个，50 nmol/L组为(35.2±1.7)个，100 nmol/L组为(9.2±0.7)个；TRAP酶活性也显著降低(F＝2 119.937，P<0.05)；骨板吸收面积明显减少(F＝463.123，P<0.05)，对照组为(75.0±6.3)%，50 nmol/L组为(49.7±3.4)%，100 nmol/L组为(15.9±1.4)%；破骨细胞标志基因(抗酒石酸酸性磷酸酶、组织蛋白酶K、基质金属蛋白酶9)及分化调控基因活化T细胞核因子-1(NFATC1)的表达均明显下调，50 nmol/L组分别为0.70±0.02、0.65±0.02、0.34±0.01、0.80±0.01，100 nmol/L组分别为0.60±0.01、0.40±0.02、0.30±0.01、0.75±0.01(F＝780.000、1 735.929、6 954.000、787.500，P<0.05)。结论采用LOR-253抑制MTF-1转录活性明显抑制了破骨细胞的分化与功能，而NFATC1在其中发挥了重要作用。

简介：摘要骨性关节炎(OA)是一种慢性退行性疾病，主要表现为慢性疼痛和活动障碍，并伴有关节软骨的进行性退化。软骨细胞退变是OA发生发展的主要原因，但具体机制尚不明确。小鼠成软骨(ATDC5)细胞具有软骨细胞的表型且易增殖，因此该细胞系广泛用于OA的研究。近期研究表明长链非编码RNA(lncRNA)正在成为基因调控的新参与者，lncRNA可以调控软骨细胞增殖、分化和凋亡，影响软骨细胞外基质(EMC)分泌，参与软骨炎症反应，在软骨退行性变的发生发展中发挥重要作用。本文就阐明lncRNA调控ATDC5细胞炎症损伤作一综述，以深度剖析lncRNA与OA中软骨细胞退变的作用关系。

简介：摘要骨组织工程的发展对支架材料提出了更高要求。基于再生医学的完全再生理论，要求骨移植替代物具备骨诱导性的同时，还能被破骨细胞降解并替换为新生骨组织。可吸收支架材料能被破骨细胞降解，且材料的理化性质也影响着破骨细胞的行为。其中材料表面微结构是启动骨诱导性的关键，对破骨细胞行为具有重要影响。此外，材料表面粗糙度在一定范围内可增强破骨细胞的功能活性。就材料表面微结构对破骨细胞调控作用的研究进展作一综述，以进一步探讨其作用机制，为制备性能更佳的组织工程支架材料提供参考。

简介：摘要胰腺导管腺癌伴破骨细胞样巨细胞未分化癌是一种极其罕见的恶性肿瘤，病因及发病机制不明，临床表现、实验室检验及影像学检查均无特异性。其诊断主要依赖组织病理学和免疫组织化学，治疗以手术切除为主，术后可辅以放、化疗，愈后理想，但术后需定期密切随访。本文报道了一例胰腺导管腺癌伴破骨样巨细胞未分化癌患者诊治情况，并结合相关文献进行了讨论。

简介：摘 要 齐墩果酸具有抗骨质疏松的作用，但其机制尚未明了。本研究通过用ICI182780竞争性阻断雌激素受体（ER）的功能，用TRAP染色方法检测竞争性阻断ER后齐墩果酸对破骨细胞分化的影响；用ERα特异性的阻断剂MPP阻断ERα，用TRAP染色考察齐墩果酸对破骨细胞分化的影响。阐明了齐墩果酸通过雌激素受体抑制破骨细胞分化及骨吸收功能。

简介：摘要目的观察微小RNA(miRNA，miR)-140在软骨细胞中的表达并探讨其临床意义。方法收集股骨头32例，按照软骨退变情况，分为骨关节炎(OA)组17例，对照组15例。同时收集两组患者临床资料及相关生化指标，采用实时荧光定量聚合酶链式反应检测两组的miR-140的表达水平，比较两组的临床资料、生化指标和miR-140的表达水平，同时结合相关指标，分析miR-140与其相关性，评估影响miR-140的因素及临床意义。结果两组患者白细胞、血红蛋白、白蛋白、尿酸、血沉及C-反应蛋白差异无统计学意义，OA组的体重指数(BMI)高于对照组，差异有统计学意义(t＝2.436，P<0.05)。miR-140在OA组的相对表达水平为(0.14±0.03)，低于对照组(1.02±0.23)，差异有统计学意义(t＝-14.892，P<0.05)。相关性分析显示，miR-140与年龄、BMI呈正相关(r＝0.852、0.809，P<0.05)。结论miR-140在骨关节炎患者中表达下降并与体重指数及年龄因素明显相关。

简介：摘要干细胞来源的外泌体及微囊泡等纳米级细胞外囊泡，通过携带生物活性物质在细胞间进行信息传递，发挥促进组织再生等作用，在再生治疗中有良好的前景。大量研究显示，干细胞细胞外囊泡能促进骨再生，其机制包括抑制缺血缺氧引起的骨细胞坏死，促进干细胞增殖、迁移和成骨分化，促进血管生成等；进一步研究证实，微RNA等成分可能在其中发挥调节作用。本文就干细胞外泌体及微囊泡等细胞外囊泡的分泌、组成、功能及其在骨再生治疗中的机制及应用研究进展进行综述。

简介：摘要目的观察慢性肾功能不全（CRI）大鼠胫骨生长板软骨细胞自噬功能改变对细胞凋亡的影响。方法雄性4周龄SD幼鼠20只，分为假手术组（暴露左侧输尿管，10只）和CRI组（结扎左侧输尿管，10只）。术后6周处死大鼠前收集24 h尿液并检测总蛋白，处死大鼠后心腔取血检测血肌酐、血尿素氮浓度；取双侧胫骨近端固定脱钙制作组织学切片，番红固绿染色观测胫骨生长板增殖区软骨细胞柱细胞数量，免疫荧光检测软骨细胞自噬指标轻链蛋白3（LC-3）的细胞表达率，Tunel技术检测软骨细胞凋亡率，免疫组化检测软骨细胞糖原指标糖原蛋白1的表达水平。结果与假手术组相比，CRI组24 h尿蛋白[（163.5±11.3）mg比（38.6±9.8）mg，t=25.620，P<0.001]，血肌酐[（67.3±16.2）μmol/L比（28.4±11.5）μmol/L，t=5.974，P<0.001]，血尿素氮[（16.4±6.4）mmol/L比（4.8±2.0）mmol/L，t=5.198，P<0.001]均增高；CRI组胫骨生长板增殖区软骨细胞柱细胞数量减少[（4.2±2.1）个比（9.1±3.8）个，t=3.109，P=0.006]，软骨细胞LC-3蛋白阳性表达率降低[（27.2±12.6）%比（51.4±18.2）%，t=3.457，P=0.003]，糖原蛋白1累积增多[（6.1±2.5）分比（3.5±1.8）分，t=2.669，P=0.016]，凋亡率增高[（17.2±4.8）%比（5.1±3.4）%，t=6.505，P<0.001]。结论肾功能不全大鼠胫骨生长板软骨细胞自噬功能下降，糖原累积增多，凋亡率增高，软骨细胞数量减少。

简介：摘要目的观察大鼠颞下颌关节骨关节炎（temporomandibular joint osteoarthritis，TMJOA）髁突软骨细胞自噬功能改变对细胞凋亡的影响。方法选择雄性2个月龄无特定病原体（specific pathogen free，SPF）级SD大鼠40只，分为对照组（n=20）和实验组（n=20）。实验组所有大鼠均造单侧前牙反模型模拟TMJOA。8周后处死所有大鼠，并取颞下颌关节，分别提取两组大鼠髁突软骨细胞进行体外培养至第3代。应用免疫荧光技术检测软骨细胞中Ⅱ型胶原、基质金属蛋白酶-13（matrix metalloproteinase-13，MMP-13）及细胞自噬水平标志物轻链蛋白-3（light chain-3，LC-3）表达水平；应用免疫组化技术检测细胞糖原累积指标糖原蛋白-1和细胞凋亡指标胱天蛋白酶-3（caspase-3）表达水平。应用Tunel技术检测两组细胞72 h凋亡率。裂解细胞提取全蛋白，应用蛋白质印迹法检测Ⅱ型胶原、MMP-13、LC-3、糖原蛋白-1及胱天蛋白酶-3的表达水平并做灰度分析。结果免疫荧光结果显示，与对照组相比，实验组髁突软骨细胞内Ⅱ型胶原和LC-3表达减少，MMP-13、糖原蛋白-1及胱天蛋白酶-3表达均增多。实验组软骨细胞的72 h凋亡率[（17.3±4.4）%]显著高于对照组[（5.6±2.1）%]（t=10.732，P<0.001）；蛋白质印迹法条带灰度统计结果显示，在实验组软骨细胞内，Ⅱ型胶原表达量（0.43±0.21）显著低于对照组（0.71±0.26）（t=2.409，P=0.043）；LC-3表达量（0.09±0.04）显著低于对照组（0.39±0.18）（t=3.638，P=0.007）；MMP-13的表达量（0.73±0.31）显著高于对照组（0.24±0.10）（t=3.364，P=0.010）；糖原蛋白-1表达量（0.68±0.30）显著高于对照组（0.29±0.17）（t=2.529，P=0.035）；胱天蛋白酶-3表达量（0.19±0.08）显著高于对照组（0.05±0.02）（t=3.796，P=0.005）。结论大鼠发生TMJOA时，髁突软骨细胞自噬水平下降、糖原累积增多，软骨细胞凋亡率增高、数量减少，最终髁突软骨组织出现退变。

简介：摘要目的探讨牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonas gingivalis，Pg）的致病因子脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）刺激巨噬细胞和破骨细胞后的免疫应答反应。方法获取C57BL/6小鼠骨髓单核细胞，利用条件培养基将其分别诱导为骨髓来源的巨噬细胞（bone marrow derived macrophages，BMM）和破骨细胞。实验分为空白对照组和实验组，空白对照组为不加Pg-LPS组，实验组采用Pg-LPS（10 μg/ml）分别刺激BMM和破骨细胞，检测两种细胞表达Toll样受体2（Toll-like receptor-2，TLR-2）和TLR-4的mRNA水平、蛋白水平以及分泌炎症因子的情况，并观察Pg-LPS对BMM分化为破骨细胞过程的影响。结果小鼠骨髓单核细胞成功诱导为BMM及成熟的破骨细胞。在Pg-LPS的作用下，BMM组的TLR-2 mRNA水平（41.41±13.07）较空白对照组（1.03±0.31）显著上调（P<0.01），TLR-4 mRNA无明显改变；破骨细胞组的TLR-2 mRNA（2.24±0.23）和TLR-4 mRNA水平（4.83±1.07）均较空白对照组显著上调（P<0.05，P<0.01）。流式细胞术检测结果显示，BMM组的TLR-2蛋白表达显著上调（P<0.01），平均荧光强度空白对照组为39.85±5.27，实验组为221.57±13.13；破骨细胞组的TLR-2亦有显著增加（P<0.01）：平均荧光强度空白对照组为83.31±2.69，实验组为108.65±6.32；两组细胞的TLR-4均无明显激活（P>0.05）。BMM和破骨细胞分泌的肿瘤坏死因子α和白细胞介素6水平均显著升高（P<0.01），其中破骨细胞的炎症因子增幅水平显著低于BMM（P<0.01）。此外，Pg-LPS显著抑制破骨细胞形成的数目及大小，面积百分比较对照组减少47%。结论Pg-LPS能激活BMM产生明显的免疫炎症反应，而破骨细胞对Pg-LPS的免疫应答较弱；Pg-LPS可抑制BMM分化为破骨细胞。