简介:摘要目的探讨2型糖尿病患者外周血微小RNA-34c(miR-34c)表达与糖尿病足溃疡(DFU)以及糖尿病足骨髓炎(DFO)发病的相关关系。方法共入选60例新诊断2型糖尿病无足溃疡患者(T2DM组)、112名2型糖尿病合并足溃疡患者(DFU组)和60名糖耐量正常的对照人群(NC组)。根据有无合并骨髓炎,将112例DFU患者再分为2组:骨髓炎组(DFO组)64例,非骨髓炎组(NDFO组)48例。应用实时定量PCR(qRT-PCR)方法测定受试者外周血miR-34c水平,并对DFU以及DFO的临床特点以及危险因素进行分析。结果T2DM组外周血miR-34c表达水平较NC组显著增高[2.99(1.45~6.22)对1.01(0.89~1.52), P<0.05],DFU组外周血miR-34c表达水平较T2DM组显著增高[9.65(6.15~18.63)对2.99(1.45~6.22), P<0.01]。此外,与NDFO组相比较,DFO组外周血miR-34c表达水平也显著增高[13.46(8.89~19.11)对6.02(5.93~14.72), P<0.01]。DFU患者外周血miR-34c表达水平与足溃疡的截肢率呈正相关(P=0.030),与8周后足溃疡愈合率呈负相关(P=0.025)。多因素logistic回归分析显示高表达的miR-34c均为DFU以及DFO的独立危险因素(OR值分别为3.52,4.13;均P<0.01)。结论2型糖尿病足溃疡患者外周血miR-34c表达水平增高,可能与DFU以及DFO的发生发展以及预后相关。
简介:摘要目的探讨微小RNA(microRNA,miRNA)-34a和miRNA-204的异常表达是否能用于区别慢性胰腺炎(CP)与胰腺导管上皮内瘤变(PanINs)。方法用部分结扎大鼠胆胰管和置入7,12-二甲基苯并蒽(DMBA)的方法建立SD大鼠(华中科技大学实验动物中心提供)CP-胰腺癌模型,获得16个CP标本和26个PanINs标本。然后用实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测4种与胰腺癌相关的miRNAs(miR-34a、miR-204、miR-107和miR-21)在这些标本中的表达。两组之间的差异用方差分析、Kruskal-Wallis检验或Student’s t检验进行统计学分析。结果miR-34a在PanIN-1(1.81±0.12比1.00±0.08,t=2.032,P<0.05)、PanIN-2(1.72±0.11比1.00±0.08,t=1.332,P<0.05)和PanIN-3(2.62±0.14比1.00±0.08,t=4.135,P<0.05)标本中的表达显著高于CP组,差异有统计学意义。miR-204在PanIN-2(0.59±0.08比1.00±0.12,t=5.037,P<0.05)和PanIN-3(0.51±0.07比1.00±0.12,t=5.385,P<0.05)标本中的表达显著低于CP组,差异有统计学意义。miR-21只在PanIN-3(2.23±0.21比1.00±0.12,t=4.485,P<0.05)标本中表达显著高于CP组,差异有统计学意义。结论miR-34a和miR-204在CP发展到胰腺癌的过程中表达异常,可用于区别CP与PanINs。
简介:摘要目的观察肝细胞癌患者血清中微小RNA(miRNA,miR)-432、微小RNA-432(miR-30b)及微小RNA-432(miR-764)水平。方法选取安徽医科大学第三附属医院2015年1月30日至2018年1月30日收治的150例肝细胞癌患者,同时选取150例年龄匹配的体检结果健康者作为对照组,采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法检测研究对象外周血中miR-432、miR-30b及miR-764表达水平。观察miR-432、miR-30b及miR-764与肝细胞癌患者临床病理因素的相关性,并对肝细胞癌患者进行随访,观察miR-432、miR-30b及miR-764与患者总生存期(OS)的相关性。采用独立样本t检验及Log-rank检验。结果肝细胞癌患者外周血中miR-432(2.11±0.71)、miR-30b(1.88±0.68)及miR-764(1.90±0.65)水平均较对照组高(1.12±0.40、1.01±0.38、0.99±0.35,t=4.879、13.679、15.097,P<0.01)。miR-432、miR-764表达量与肝细胞癌TNM分期有相关(P<0.05),miR-30b与肝细胞癌TNM分期及分化程度有相关(P<0.05)。Kaplan-Meier法及Log-rank检验显示,miR-432、miR-30b及miR-764表达量升高组OS短于降低组(Log-rank χ2=16.433、10.575、7.998,P<0.05)。Cox多因素分析均显示,TNM分期、miR-432、miR-30b、miR-764、肿瘤分化程度是肝细胞癌OS的独立影响因素[比值比(OR)=2.904、2.135、1.651、1.496、1.205,P<0.05]。结论肝细胞癌患者循环中miR-432、miR-30b及miR-764表达上调,且与患者总生存率降低密切相关。
简介:目的分析微小RNA(miR)-34b及c-Myc在膀胱癌中的作用,并验证两者相互作用关系。方法107例膀胱癌患者,全部患者均行手术治疗,取病理组织及瘤旁组织样本,比较miR-34b及c-Myc在膀胱癌和瘤旁组织、肌层浸润和肌层非浸润及的各病理分级的表达水平,采用荧光素酶法及生物信息学软件分析miR-34b与c-Myc的相互作用关系。结果miR-34b在膀胱癌中的相对表达水平为(0.0213±0.0061),与瘤旁组织的(0.0563±0.0089)对比差异有统计学意义(P<0.05);c-Myc在膀胱癌中的相对表达水平为(0.484±0.063),与瘤旁组织的(0.216±0.045)对比差异有统计学意义(P<0.05)。miR-34b在45例肌层浸润性膀胱癌中的相对表达水平为(0.0234±0.0026),与62例肌层非浸润性膀胱癌中的(0.0496±0.0075)对比差异有统计学意义(P<0.05);c-Myc在45例肌层浸润性膀胱癌中的相对表达水平为(0.5180±0.0826),与62例肌层非浸润性膀胱癌中的(0.3140±0.0753)对比差异有统计学意义(P<0.05)。miR-34b在低度恶性倾向、低分级、高分级病例的表达水平依次为(0.0364±0.0047)、(0.0219±0.0034)和(0.0102±0.0028),其表达水平随病理分级升高呈现降低趋势,组间对比差异有统计学意义(F=386.732,P<0.05);c-Myc在低度恶性倾向、低分级、高分级病例的表达水平依次为(0.083±0.013)、(0.236±0.032)和(0.571±0.058),其表达水平随病理分级升高呈现上升趋势,组间对比差异有统计学意义(F=106.964,P<0.05)。经生物信息学软件检验发现,c-Myc是miR-34b的直接靶基因,采用荧光素酶法进一步检测后证实,共转染miR-34b的荧光强度(1.035±0.024)au明显低于共转染的c-Myc强度(3.572±0.068)au(P<0.05)。结论c-Myc是miR-34b的直接靶基因,二者存在密切的相关性,可通过下调c-Myc水平提升miR-34b表达,抑制膀胱细胞癌增殖。
简介:摘要目的观察微小RNA(miR)-34对小儿恶性胶质瘤细胞增殖、侵袭和转移的影响。方法选取2017年6月到2019年6月我院收治的49例恶性胶质瘤组织和癌旁组织作为研究对象,采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析肿瘤组织和癌旁组织miR-34表达水平。用过表达对照和miR-34慢病毒感染U251神经胶质瘤细胞,建立对照组和miR-34组稳定细胞系。采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)、划痕实验和Transwell实验分析对照组和miR-34组细胞增殖、迁移和侵袭能力。采用生物信息学、双荧光素酶报告基因分析miR-34靶基因。蛋白质印迹法(Western blot)分析靶基因表达水平。计量数据比较采用t检验。结果神经胶质瘤组织中miR-34表达水平(0.44±0.10)明显低于癌旁组织(1.14±0.15),差异有统计学意义(t=4.109,P<0.05)。对照组细胞吸光度值(2.09±0.31)明显高于miR-34组(1.63±0.27),差异有统计学意义(t=3.016,P<0.05)。对照组细胞划痕愈合率[(89.37±8.19)%]明显高于miR-34组[(58.32±6.82)%],差异有统计学意义(t=4.781,P<0.05)。对照组细胞迁移数量[(136.22±15.29)个]明显高于miR-34组[(76.29±9.29)个],差异有统计学意义(t=5.891,P<0.05)。生物信息学和双荧光素酶报告基因结果显示SOX4基因是miR-34的靶基因。癌旁组织中SOX4蛋白水平(0.91±0.12)明显低于肿瘤组织(2.86±0.16),差异有统计学意义(t=3.471,P<0.05)。对照组细胞SOX4蛋白表达水平(1.28±0.14)明显高于miR-34组(0.64±0.12),差异有统计学意义(t=3.003,P<0.05)。对照组细胞TMEM2蛋白表达水平(1.37±0.17)明显高于miR-34组(0.76±0.11),差异有统计学意义(t=2.409,P<0.05)。结论miR-34在恶性胶质瘤组织中呈低表达,通过调控SOX4蛋白表达水平,调节恶性神经胶质瘤细胞的增殖、侵袭和转移。
简介:摘要目的探讨精神分裂症患者外周血微小RNA-16、微小RNA-124和微小RNA-195表达与认知功能和社会功能的相关性。方法选择台州市第二人民医院2016年1月至2018年12月收治的精神分裂症患者112例为观察组;另选择台州市第二人民医院2016年1月至2018年12月健康体检者93例作为对照组。采用实时定量荧光聚合酶链式反应法检测外周血微小RNA-16、微小RNA-124和微小RNA-195表达;采用中文版蒙特利尔认知评估量表(MoCA)评价患者认知功能;采用住院精神病人社会功能评定量表(SSPI)评价患者社会功能。结果观察组外周血微小RNA-16(0.03±0.01)和微小RNA-195(0.08±0.03)表达低于对照组(0.12±0.02)和(0.27±0.06),而微小RNA-124(14.63±3.24)表达高于对照组(7.45±1.39),差异均有统计学意义(t=41.763、19.898、29.389,均P<0.05)。观察组MoCA量表评分[(22.17±3.45)分]低于对照组[(28.39±1.28)分],差异有统计学意义(t=16.465,P<0.05)。观察组SSPI量表评分[(26.58±5.16)分]低于对照组[(45.37±3.27)分],差异有统计学意义(t=30.405,P<0.05)。微小RNA-16和微小RNA-195与MoCA量表评分和SSPI量表评分呈线性正相关(MoCA量表评分:r=0.641、0.724,SSPI量表评分:r=0.801、0.657,均P<0.05),微小RNA-124与MoCA量表评分和SSPI量表评分呈线性负相关(r=-0.738、-0.769,均P<0.05)。结论精神分裂症患者外周血微小RNA-16和微小RNA-195表达降低而微小RNA-124表达升高,其中微小RNA-16和微小RNA-195表达与认知功能和社会功能呈正相关,而微小RNA-124与认知功能和社会功能呈负相关。
简介:摘要目的探讨c-Myc调控的微小RNA(miRNA,miR)表达及其在三阴性乳腺癌(TNBC)转移中的作用机制。方法采用慢病毒构建c-Myc低表达的人乳腺癌细胞系MDA-MB-231,分为c-Myc沉默组、阴性对照组和空白对照组,分别对不同MDA-MB-231细胞进行miRNA测序,实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)验证具有显著差异的hsa-let-7a、hsa-let-7c、hsa-let-7d、hsa-miR-34c和hsa-miR-98在细胞中的表达,及20例三阴性乳腺癌组织和癌旁组织中c-Myc和hsa-let-7a的表达水平。采用方差分析、Sidak方法比较多组差异分析。结果与对照组比较,c-Myc沉默组中有126个miRNA存在显著差异,其中84个显著上调,42个显著下调。RT-qPCR验证发现与对照组比较(1.007±0.128,1.003±0.084,1.008±0.138,1.013±0.184,1.009±0.148),在c-Myc沉默组中,hsa-miR-34c(0.693±0.167,F=6.825,P<0.05)、hsa-miR-98下调(0.737±0.145,F=5.260,P<0.05),hsa-let-7a(1.474±0.349,F=7.081,P<0.05)、hsa-let-7c(1.630±0.485,F=7.387,P<0.05)、hsa-let-7d上调(2.104±0.636,F=11.370,P<0.05)。结论c-Myc调控let-7a、let-7c、let-7d、miR-34c和miR-98影响三阴性乳腺癌侵袭转移。
简介:摘要目的观察微小RNA-200c(miR-200c)在人胰腺癌干细胞上皮-间充质转化(EMT)中的作用。方法应用流式细胞术(FACS)在人胰腺癌细胞株PANC-1中分选出以CD24+CD44+ESA+作为标志物的胰腺癌干细胞。将miR-200c前体片段和阴性对照片段分别转染到胰腺癌干细胞中。应用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞中E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、E盒结合锌指蛋白1(ZEB1)和miR-200c的表达。Transwell试验检测细胞的侵袭能力。采用t检验。结果人胰腺癌细胞株PANC-1中分选出CD24+CD44+ESA+细胞(0.8%)。miR-200c在胰腺癌干细胞中的相对表达值(0.15±0.01)显著低于PANC-1细胞(1.00±0.09),差异有统计学意义(t=3.306,P<0.05)。胰腺癌干细胞平均穿膜细胞数[(321.00±7.62)个]明显高于PANC-1细胞[(70.00±16.47)个],差异有统计学意义(t=2.152,P<0.05)。转染miR-200c前体片段24 h后的胰腺癌干细胞中miR-200c的相对表达值(3.70±0.42)明显高于转染阴性对照片段的胰腺癌干细胞中miRNA-200c的相对表达值(0.22±0.21),差异有统计学意义(t=2.073,P<0.05)。E-cadherin、vimentin、ZEB1 mRNA在转染miRNA-200c前体片段的胰腺癌干细胞中的表达分别为(3.12±0.02)×10-4、0.36±0.15、(0.38±0.07)×10-4,在转染阴性对照片段的胰腺癌干细胞中的表达分别为(1.31±0.05)×10-4、1.16±0.08、(1.13±0.03)×10-4,两组比较差异有统计学意义(t=1.941、2.165、2.308,P<0.05)。转染miR-200c前体片段后的胰腺癌干细胞的平均穿膜细胞数[(80.00±5.35)个]明显低于转染阴性对照片段的干细胞[(310.00±19.41)个],两组比较差异有统计学意义(t=2.613,P<0.05)。结论miR-200c过表达可以抑制胰腺癌干细胞的上皮-间充质转化,逆转其侵袭能力。
简介:摘要目的探讨微小RNA(miR)-34a通过靶向调控瞬时受体电位通道家族4(TRPV4)对人膀胱癌细胞增殖和凋亡作用的影响。方法收集2019年1月至2020年8月武汉大学人民医院23例膀胱癌组织以及相应的癌旁组织临床样本,采用实时荧光定量聚合酶链方法(RT-PCR)检测膀胱癌组织及癌旁正常组织临床样本中miR-34a的表达水平。采用蛋白质印迹法(Western blot)检测膀胱癌组织及癌旁正常组织临床样本TRPV4的表达水平。采用噻唑蓝(MTT)法,双染法流式细胞术观察细胞增殖和凋亡水平的改变。采用荧光素酶报告法测定miR-34a与TRPV4的相关性。采用Western blot法检测细胞中TRPV4的蛋白表达水平。组间比较采用t检验。结果miR-34a在膀胱癌旁组织中表达水平(4.38±0.42)高于膀胱癌组织(1.69±0.27),差异有统计学意义(t=-9.332,P<0.05)。TRPV4在膀胱癌旁组织中表达水平(0.39±0.04)低于膀胱癌组织(0.63±0.06),差异有统计学意义(t=15.962,P<0.05)。T24细胞中,miR-34a NC组24、48、72 h增殖率[(58.63±4.35)%、(72.36±6.45)%、(86.45±6.35)%]明显高于miR-34a mimics组24、48、72 h增殖率[(21.65±3.12)%、(36.82±4.51)%、(53.87±5.96)%],差异有统计学意义(t=-8.730、-7.821、-6.480,P<0.01)。miR-34a NC组凋亡率[(12.23±1.56)%]明显低于miR-34a mimics组[(31.09±2.43)%],差异有统计学意义(t=11.313,P<0.05)。5637细胞中,miR-34a NC组24、48、72 h增殖率[(44.58±3.87)%、(52.14±5.23)%、(68.35±6.12)%]明显低于miR-34a inhibitors组24、48、72 h增殖率[(56.87±5.63)%、(68.78±6.87)%、(89.45±7.64)%],差异有统计学意义(t=3.116、3.338、3.733,P<0.01)。miR-34a NC组凋亡率[(19.39±2.12)%]明显高于miR-34a inhibitors组[(9.94±1.05)%],差异有统计学意义(t=6.919,P<0.05)。生物信息学和荧光素酶报告实验验证了TRPV4是miR-34a的下游靶基因。T24细胞中,miR-34a NC组TRPV4蛋白表达水平(0.61±0.05)明显高于miR-34a mimics组(0.32±0.04),差异有统计学意义(t=-7.844,P<0.05)。5637细胞中,miR-34a NC组TRPV4蛋白表达水平(0.53±0.05)明显低于miR-34a inhibitors组(0.79±0.06),差异有统计学意义(t=6.919,P<0.05)。结论miR-34a通过靶向调控TRPV4的表达,从而影响膀胱癌细胞的增殖和凋亡能力。