简介:目的我们前期的实验结果显示A20mRNA和蛋白在人脑胶质瘤组织及细胞系(U251、U87、BT325)中高表达,本研究拟构建A20RNAi载体,并检测其对U251细胞A20表达的抑制作用。方法构建三种针对人A20基因的真核干涉表达载体,以脂质体法将其分别转染人脑胶质瘤细胞系U251,以RT-PCR、蛋白印迹法检测各干涉载体对U251细胞中A20mRNA和蛋白表达的抑制作用。结果成功构建三种针对A20基因的RNAi载体,经RT-PCR、蛋白印迹检测筛选出对A20基因干涉效果最佳的载体,命名为pSilencer3.1-A20R1。结论成功构建A20基因干涉载体,为进一步探讨A20与脑胶质瘤恶性增殖、血管形成以及抗凋亡的关系奠定实验基础。
简介:摘要:目的 探究细菌感染机体后血清锌指蛋白A20的表达效果,探讨A20在细菌复制中所发挥的作用机制。方法:选取我院248例血培养瓶细菌检测阳性的病例血清样本作为研究对象,选取80例健康体检样本作为阴性对照组,采用ELISA方法检测所有样本血清锌指蛋白A20浓度。结果:(a)细菌感染组血清锌指蛋白A20水平显著高于阴性对照组血清锌指蛋白A20水平(P<0.01);(b)革兰阴性菌感染组、革兰阳性菌感染组血清锌指蛋白A20明显高于阴性对照组(P<0.01);(c)大肠埃希菌感染组与阴性对照组间血清锌指蛋白A20差异具有统计学意义(P<0.01);(d)金黄色葡萄球菌感染组、凝固酶阴性葡萄球菌感染组与阴性对照组间血清锌指蛋白A20差异具有统计学意义(P<0.01)。结论:细菌感染时血清锌指蛋白A20表达上调,在细菌感染和复制中发挥重要作用。
简介:摘要目的探讨锌指蛋白Rnf44上Ring-锌指结构突变297Gln>Arg与小鼠行为能力的关系。方法在小鼠Rnf44基因中Ring-锌指结构编码区寻找突变;在21种品系共398只小鼠中采用旷场实验、高架十字迷宫实验检测小鼠活性、焦虑状态、探索功能及运动功能等行为能力;并分析该基因突变与小鼠行为能力间的关联。结果在小鼠Rnf44基因中Ring-锌指结构编码区寻找到突变297gln>Arg,携带297Arg突变的小鼠活性及运动功能下降(旷场实验及高架十字迷宫实验的1-5min运动距离减少),而更易产生焦虑状态(高架十字迷宫试验的粪便颗粒数增加)(以上P值均<0.05)。但297Arg突变不影响小鼠探索功能(停留在高架十字迷宫中央区时间无改变,P>0.05)。结论Rnf44蛋白上关键活性基团Ring-锌指结构的突变297Gln>Arg与小鼠活性、焦虑状态及运动功能等行为能力改变有关,与小鼠探索功能无关。
简介:摘要目的检测锌指蛋白18(ZNF18)在胰腺导管腺癌(PDAC)组织的表达情况,分析其与PDAC临床病理特征和患者预后的关系。方法收集2017年3月至2019年12月间海军军医大学第一附属医院手术切除并经病理证实的131例PDAC患者的癌组织标本,采用免疫组织化学染色法检测癌组织ZNF18蛋白的表达,根据ZNF18表达水平将其分为ZNF18高表达组和低表达组,采用Kaplan-Meier法及Log-Rank检验分析比较ZNF18表达水平与PDAC患者总体生存期之间的关系。分析ZNF18蛋白表达水平与患者临床病理特征的相关性,应用单因素和多因素Cox回归模型分析影响PDAC患者预后的因素。结果131例PDAC组织中ZNF18高表达82例(62.60%),低表达49例(37.40%),ZNF18高表达组的总生存期显著长于低表达组[(21.53±0.69)个月比(12.17±1.57)个月],差异有统计学意义(P<0.001)。ZNF18低表达与肿瘤淋巴结转移有关(P<0.05),而与PDAC患者的性别、年龄、肿瘤位置、肿瘤大小、分化程度、TNM分期、神经侵犯、脉管癌栓无关。单因素分析结果显示,肿瘤分化程度、TNM分期、淋巴结转移及ZNF18表达水平均与PDAC患者的预后有关;多因素分析结果显示,肿瘤分化程度(HR=0.463,95%CI 0.279~0.769,P=0.003)、淋巴结转移(HR=2.062,95%CI 1.247~3.409,P=0.005)及ZNF18表达水平(HR=0.416,95%CI 0.255~0.676,P<0.001)为影响PDAC患者预后的独立危险因素。结论PDAC组织ZNF18低表达与肿瘤淋巴结转移及预后差密切相关,ZNF18可作为评估PDAC患者预后生存的潜在分子标志物。
简介:摘要目的初步探究微小RNA-203(miR-203)调控锌指蛋白281(ZNF281)对黑素瘤细胞增殖、迁移的影响。方法常规培养人血管内皮细胞系ECV304、人黑素瘤细胞系A375、M14、SK-MEL-28、SK-MEL-2,实时荧光定量PCR检测各细胞系中miR-203表达情况,Western免疫印迹法检测各细胞系中ZNF281蛋白水平。A375、M14细胞分别分为5组:对照组(细胞正常培养)、miR-203模拟物对照组(加入miR-203模拟物阴性对照)、miR-203抑制剂对照组(加入miR-203抑制剂阴性对照)、miR-203模拟物组(加入miR-203模拟物)、miR-203抑制剂组(加入miR-203抑制剂)。实时荧光定量PCR检测各组A375、M14细胞中miR-203的表达,CCK8法检测各组A375、M14细胞增殖活性,Transwell实验检测各组A375、M14细胞迁移数量,Western免疫印迹法检测各组A375、M14细胞中ZNF281蛋白的表达。双荧光素酶验证miR-203与ZNF281的靶向关系。多组比较采用单因素方差分析,两两比较采用SNK-q法。结果与血管内皮细胞系ECV304相比,黑素瘤细胞系A375、M14、SK-MEL-28、SK-MEL-2中miR-203表达水平较低(均P < 0.05),ZNF281蛋白水平较高(均P < 0.05)。与对照组、miR-203模拟物对照组、miR-203抑制剂对照组相比,miR-203模拟物组A375、M14细胞中miR-203水平均显著升高(F = 487.632、68.454,均P < 0.05),细胞迁移数量均显著降低(均P < 0.05),ZNF281蛋白表达均显著降低(均P < 0.05);miR-203抑制剂组A375、M14细胞中miR-203表达均显著降低(均P < 0.05),细胞迁移数量均显著增加(均P < 0.05),A375细胞中ZNF281蛋白表达显著升高(均P < 0.05),36、48、60、72 h A375细胞增殖活性显著升高(均P < 0.05),24、36、48、60、72 h M14细胞增殖活性均显著升高(均P < 0.05)。miR-203与ZNF281之间存在靶位点。结论上调miR-203表达可抑制黑素瘤细胞增殖、迁移,下调miR-203表达可促进黑素瘤细胞增殖、迁移,可能通过调控ZNF281的表达实现。
简介:摘要目的检测早幼粒细胞白血病锌指结构( promyelocytic leukemia zinc finger,PLZF)在哮喘(asthma)患者外周血中的表达水平及临床意义。方法选取上海市第五人民医院2021年5月至2021年10月诊治的稳定期Asthma患者外周血标本为研究对象(n=40),以及健康体检者为对照组(Control组,n=40),采用酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测血清中细胞因子的含量,实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)检测血浆中PLZF的mRNA表达。分离外周血的单个核淋巴细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC),并使用流式细胞术检测PBMC中PLZF+细胞的水平和分布。采用SPSS 26.0及Graphpad Prism 7.0软件进行独立样本t检验、Mann-Whitney U检验、χ2检验、ROC曲线及Logistic回归等统计学分析。以P<0.05为差异有统计学意义。结果与Control组相比,在Asthma组中细胞因子干扰素-γ(interferon γ,IFN-γ)、白细胞介素-2(interleukin-2,IL-2)、IL-4、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和IL-17表达水平增加,差异有统计学意义(P<0.05),而IL-10两组相比差异无统计学意义。Asthma组PBMC中PLZF的mRNA表达明显增高(P<0.05),PLZF+细胞明显增加(3.40%±2.52%,Control组:1.23%±0.78%,P<0.05),其中以CD8+PLZF+及Vβ11+PLZF+T细胞为主,提示PLZF主要在CD8+、恒定自然杀伤T细胞(invariant natural killer T cell,iNKT)细胞亚群中表达增加。Logistic回归分析及ROC曲线结果显示,PBMC中PLZF+细胞增高显著增加了哮喘发生的风险(OR=3.63>1,AUC=0.87,P<0.05)。结论哮喘患者外周血中PLZF增加,可能在哮喘疾病发展中起到重要作用,结果尚需更大样本实验数据进一步证实。
简介:摘要目的观察锌指蛋白A20(A20)在慢性丙型肝炎患者肝脏组织中的表达和定位情况,并探讨其与瞬时肝弹性测定(FibroScan)、血清纤维化指标在肝脏纤维化分期中的关系。方法对150例慢性丙型肝炎患者肝组织中的A20按照肝脏病理纤维化分期,行免疫组化定量检测,并检测FibroScan、血清纤维化指标(透明质酸、Ⅲ型前胶原、层粘连蛋白、Ⅳ型胶原),进行统计学分析。结果肝组织A20表达、FibroScan、血清纤维化指标随肝脏病理纤维化加重而增加。肝脏纤维化各期前述指标与对照组之间差异有统计学意义(P<0.05);肝脏A20与FibroScan之间呈正相关,r=0.756(P<0.05)。结论慢性丙型肝炎患者A20、FibroScan、血清纤维化指标与肝脏纤维化程度均呈正相关,A20与细胞外基质沉积致纤维化形成有一定关系。
简介:摘要目的观察甲状腺癌(TC)细胞中微小RNA-630(miR-630)对上皮-间充质转化(EMT)标志物锌指转录因子(Slug)表达的影响,及对细胞侵袭能力的影响。方法收集河北医科大学第二医院普外科2018年1月至2019年12月之间的40例乳头状甲状腺癌及其癌旁标本。采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)的方法检测甲状腺癌及其癌旁组织中miR-630的表达水平;将miR-630模拟物(mimics)转染至人乳头瘤状甲状腺癌细胞(TPC-1)细胞中,应用荧光定量PCR的方法观察Slug基因的表达水平,使用双荧光素酶报告基因实验观察miR-630对Slug基因的调控作用;同时,将过表达Slug质粒与miR-630 mimics共转染至TPC-1细胞,应用Transwell细胞侵袭实验观察miR-630和Slug表达变化对甲状腺癌细胞侵袭能力的影响,组间比较采用t检验。结果miR-630在乳头状甲状腺癌组织中的表达水平为(1.13±0.07),其表达水平明显低于癌旁组织表达水平(5.33±0.08),差异有统计学意义(t=15.472,P<0.05);miR-630 mimics上调甲状腺乳头状癌TPC-1细胞中miR-630后,Slug mRNA表达水平(0.48±0.09)明显低于对照组细胞(1.03±0.07,t=7.132,P<0.05),差异有统计学意义;miR-630 mimics与Slug 3’非翻译区野生型共转染组荧光素酶活性明显低于对照组(0.38±0.03,t=13.021,P<0.05),差异有统计学意义。而miR-630 mimics与Slug 3’非翻译区突变型共转染组,荧光素酶活性却无明显变化(1.08±0.02比1.02±0.03,t=1.122,P>0.05),差异无统计学意义;miR-630 mimics组侵袭细胞数(241.3±42.4)明显低于对照组侵袭细胞数(467.5±51.7),差异有统计学意义(t=3.214,P<0.05);miR-630 mimics和Slug过表达质粒共转染组细胞的侵袭细胞数(411.6±28.3)与阴性对照组(NC,418.3±31.2)组比较,差异无统计学意义(t=1.131,P>0.05)。结论miR-630能够通过靶向抑制Slug的表达,抑制甲状腺癌细胞的侵袭能力。
简介:摘要 目的:研究RET锌指蛋白(ret finger protein,RFP)基因敲除对帕金森病模型小鼠神经退行性改变的影响。方法:RET锌指蛋白基因敲除的 C57BL/6 雄性小鼠通过腹腔注射 1-甲基-4-苯基-1, 2, 3, 6-四氢吡啶(1-methy-4- phenyl-1, 2, 3, 6-tetrahydropyridine, MPTP)制备 PD 模型,注射的第 6 天取小鼠全脑,用 TUNEL 试剂盒检测中脑黑质部细胞的凋亡, 用免疫组织化学法和 Western Blot 法检测黑质酪氨酸羟化酶(Tyrosine hydroxylase,TH),Caspase-3,RFP表达。 结果: RFP基因敲除能够降低由MPTP所导致的多巴胺能神经元的凋亡。 结论:RFP基因敲除减轻了 PD 模型小鼠的神经退变。