简介:目的建立克罗诺杆菌的特异、灵敏的TaqMan—MGB探针实时荧光定量PCR检测方法。方法根据GenBank公布的克罗诺杆菌MMS基因高保守序列,设计特异引物和TaqMan—MGB探针,建立和优化反应体系,用25种其他常见致病菌评价反应体系的特异性,用克罗诺杆菌MMS基因重组质粒构建实时荧光定量PCR标准曲线,对重组质粒、纯菌和人工模拟污染样本进行灵敏度试验,并与FDA推荐的TaqMan探针实时荧光PCR比较,配对t检验分析两种方法对Ct值和荧光强度的差异。结果采用TaqMan—MGB探针实时荧光定量PCR检测克罗诺杆菌MMS基因仅需40min,与25种非目标菌无交叉反应,仅对克罗诺杆菌有特异性扩增;所构建方法线性关系良好,相关系数r2=0.999,扩增效率为99.972%,对重组质粒、纯菌、人工模拟污染样品标本的灵敏度分别达10拷贝/反应、3.8和38cfu/ml;与FDA推荐的TaqMan探针实时荧光PCR相比,TaqMan—MGB探针实时荧光定量PCR的Q值更小、△Rn值更高,灵敏度和分辨率差异均有统计学意义(Ct:t=-14.406,P〈0.01;△Rn:t:14.230,P〈0.01)。结论本研究建立的TaqMan—MGB探针实时荧光定量PCR反应体系能够快速、特异、灵敏地检测克罗诺杆菌MMS基因,可用于婴幼儿奶粉中克罗诺杆菌的快速筛查和鉴定,具有较大的的应用价值和推广价值。
简介:本刊北京讯:由中国食品添加剂和配料协会和中国食品发酵工业研究院共同主持召开的”食品添加剂焦糖色技术交流暨标准讨论会”于2012年7月10El在北京二十一世纪饭店召开。参加会议的有来自国家食品安全标准审评委员会秘书处、中国食品添加剂和配料协会、中国食品发酵工业研究院的相关专家和《食品安全国家标准食品添加剂焦糖色》起草工作组成员单位及其他部分焦糖色生产和应用的企业代表。会议邀请了国际焦糖技术协会主席DrForrestBayer先生介绍了国际上焦糖色的标准法规情况、焦糖色的毒理学评价及焦糖色的应用情况.与会人员就焦糖色的法规标准等相关内容进行了交流。之后.标准起草工作组对焦糖色标准制定工作做了简要的小结,并就标准讨论稿及相关问题展开热烈讨论。本次会议的召开进一步完善了标准编制说明和标准文本.推动了焦糖色标准尽快进入行业征求意见阶段。
简介:根据转基因抗除草剂玉米DAS-40278-9外源基因的旁侧序列,采用ABIPrimerExpress3.0设计引物和TaqMan探针,建立转基因抗除草剂玉米DAS-40278-9品系特异实时荧光定量PCR检测方法。采用该检测方法对DAS-40278-9玉米含量为1%(质量分数)的标准样品进行检测,结果显示,采用建立的方法获得的标准曲线,通过斜率、相关系数、扩增效率判断是可靠的,待测样品的定量检测结果为1.024%,非常接近真实值。本试验表明建立的转基因抗除草剂玉米DAS-40278-9品系特异定量PCR检测方法的特异性好,灵敏度和准确度高,值得推广应用。
简介:目的建立不同水源中GⅡ型诺如病毒(NoVGⅡ)实时荧光逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测方法,对某市疾病预防控制中心送检的10份疑似引起诺如病毒中毒的水样进行NoVGⅡ检测。方法以瓶装水、河水和生活污水为研究对象,采用硝酸纤维素膜-聚乙二醇(PEG)沉淀法富集病毒,对取样体积、病毒洗脱条件、PEG终浓度及PEG沉淀条件等进行了优化,提取病毒RNA、建立实时荧光RT-PCR检测方法;通过外加MS2计算方法的回收率,评价所建方法对水样中诺如病毒的回收效果。结果建立的方法对瓶装水、河水和生活污水中NoVGⅡ的平均回收率分别为(60.1±8.0)%、(22.0±6.5)%和(35.7±8.1)%,10份送检水样中3份检出NoVGⅡ。结论建立的实时荧光RT-PCR方法适用于瓶装水、河水和生活污水中NoVGⅡ的检测,饮用水被NoVGⅡ是引发某市人员中毒的原因之一。
简介:本刊北京讯:由卫生部食品安全综合协调与卫生监督局委托中国食品添加剂和配料协会和中国食品发酵工业研究院承担的2011年度食品添加剂安全标准的制订工作进展顺利,部分标准已完成标准文本和行业内征求意见工作。2012年6月26-27日,在北京国安宾馆召开了“琥珀酸二钠等五项食品添加剂食品安全国家标准初审讨论会”,讨论和审查了琥珀酸二钠、脱乙酰甲壳素、柠檬酸亚锡二钠、维生素A棕榈酸酯、维生素E等五项食品添加剂食品安全国家标准标准。本次会议由中国食品添加剂和配料协会和中国食品发酵工业研究院共同主持,除各标准起草单位委派的标准负责人参会外.还邀请了来自国家食品安全风险评估中心,中国化工研究院.以及华东理工大学、天津师范大学等专业机构及科研院所的资深专家参会。会议首先由中国食品添加剂和配料协会秘书长薛毅讲话.他强调了食品添加剂安全标准的制定得重要性.并对标准制定的形势进行了分析。而后标准起草工作组对标准制定工作情况进行了阐述。