简介:试验旨在构建表达鸡新城疫病毒(NDV)HN基因的大肠杆菌原核表达栽体。以pMD18-T—HN为模板,通过设计的特异性引物PCR扩增出(NDV)HN基因片段,连接至pMD-18T载体,通过双酶切定向插入原核表达载体pET32a中,转化到感受态细胞Rosetta中,获得表达HN基因的阳性亚克隆重组质粒,用lmmol/LIPTG诱导表达,并对表达产物进行鉴定。SDS—PAGE电泳结果显示,HN基因片段在大肠杆菌Rosetta细胞中实现融合表达,表达产物大小约为90KD左右,western—blotting试验证实其有较好的反应原性。本研究为进一步研究HN蛋白功能结构域的免疫原性和研制鸡新城疫HN基因工程疫苗奠定了基础。
简介:现在,企业大都有这样的感觉———市场难做。我们对此做了一些分析,我们认为要解决这个问题,最好从做好小市场中的大份额开始。我们认为,一个企业应该学会有所为有所不为。我们坚信这句话:只有疲软的企业,没有疲软的市场。我们认为细分市场的终极目标就是实现小市场中的大份额。怎样实现小市场中的大份额呢?这是一个复杂的系统科学,不能单独从某个角度孤立地来解释,至少应该从以下几个角度来思考:一、对消费者的研究是市场决策的基础。只有了解消费者的各种需求(不管是现实的还是长远的,不管是生理的还是心理的),才能开发出能满足消费者需求的产品怎样才能知道消费者的需求,实现的方法是进行各种形式的市场调研。市场调研是实现小市场中的大份额的基础工作,而市场调研也不是万能的。调研至少存在两个局限,一是调研存在着时效的局限,调研总是滞后于市场实际情况,市场是瞬息万变的,有时对市场的分析过于简单,得出的结论或预测往往是不全面的、有的甚至是错误的,导致实际上操作的失败,给整个营销战略的实现造成了一定的困难;二是调研的预算和投入约束了调研的可靠性,局部的、短暂的、临时的调研不能在根本上解决市场实际问题。...
简介:为了研制新型细胞因子制剂,将鸡白细胞介素18(ChIL-18)基因和鸡α-干扰素(ChIFN-α)基因通过多肽氨基酸接头(Linker)连接在一起构成mChIL-18/mChIFN-α融合蛋白基因,并构建原核重组表达载体,以期表达具有生物学活性的融合蛋白。以mChIL-18cDNA与mChIFN—αDNA为模板,通过PCR及PCR重叠延伸技术(SOE)得到mChIL-18/mChIFN-α融合DNA。将回收的DNA克隆于pGEM—TEasy载体,并对其进行了测序。测序结果表明获得了阅读框完整、连接部位正确的mChIL-18/mChIFN—α融合分子DNA。将所克隆的目的片断亚克隆到原核表达载体pQE30,构建重组质粒pQE30-mChIL-18/mChIFN-α。pQE30-mChIL-18/mChIFN—α的成功构建为研制开发新一代的多功能、多靶点的细胞因子制剂奠定了基础。