简介:Tb作为镧系元素中少数几个有荧光性质的稀士离子,在荧光方面有很多重要的应用。如Tb被广泛用于与蛋白质钙位点结合的荧光探针,同时也可根据Tb的荧光特性,用荧光方法定量分析Tb-有机配体配合物。本研究发现HEPES(常用的pH缓冲剂)可显著增强Tb在585nm的特征荧光发射峰,同时微弱的增强Tb在490nm和549nm的特征荧光发射峰。一直以来,经常使用Tb在549nm处的特征荧光发射峰定量研究Tb化合物的浓度;然而,本研究却发现在进行此类实验时需要慎重选择实验条件,因为Tb荧光的定量分析结果会随缓冲试剂浓度或者含量的变化而改变。另一方面,Tb585nm处的特征荧光发射峰的荧光强度与HEPES和Tb离子的浓度都有一定的依赖关系,因此Tb585nm特征荧光发射峰也有被用于荧光定量分析研究的潜能。
简介:目的:建立从红花组织中快速分离总RNA的方法,为进行反转录PCR(RT—PCR)、快速扩增cDNA末端(RACE)、蛋白质印迹法及其他分子生物学实验奠定基础。方法:采用改良Trizol法提取红花苞叶总RNA时,加入DNaseⅠ消化残留DNA,并加入RNase抑制剂,利用琼脂糖凝胶电泳及紫外分光光度法进行纯度和浓度检测。RT—PCR后,进行cDNA-序列相关扩增多态性(SRAP)分析。结果:抽提的RNA经电泳检测,可见28S、18S、5SRNA三条带,带的亮度强,且28S的宽度是18S的2倍左右。紫外吸光度D260/D280为1.8~2.0,D260/D230为2.0~2.3。总RNA产物进行cDNA-SRAP扩增,出现清晰的条带。结论:改良Trizol法所提取的RNA纯度高,质量好,完整性好,可成功进行cDNA-SRAP扩增。
简介:【摘要】目的:对HIV/TB患者治疗过程中抗结核药物性肝损伤的临床分析进行研究。方法:选取我院接收的HIV/TB抗结核治疗后肝损伤的患者,共70例,该部分患者均于2015年6月—2020年6月在我院接受治疗,按照随机分组的原则,将该部分患者分为两组,分别为对照组和研究组,每组35例。使用还原性谷胱甘肽对研究组进行治疗,使用复方甘草酸苷给予对照组进行治疗。结果:治疗前两组患者丙氨酸转氨酶、总胆红素等肝功能指标差异无统计学意义(P 〉 0.05),治疗后均有一定程度的改善,研究组明显优于对照组(P 〈 0.05)。结论:还原性谷胱甘肽在HIV/TB抗结核治疗后肝损伤的患者治疗中,对肝功能损伤的恢复明显比复方甘草酸苷高,有较好的疗效,值得在临床治疗上广泛应用。
简介:本文对两种具有抗HIV-1活性的药物与RNA的相互作用进行了探讨.紫外Tm测定及CD光谱结果表明,两种药物均可与polyA@polyU相互作用,影响其构象的改变.流式细胞仪分析提示药物可不同程度地影响cos-7亚二倍体细胞含量,其中ribavirin的作用更显著.
简介:目的:研究微小RNA-21(miRNA-21)在非小细胞肺癌(NSCLC)患者血浆中的表达,探讨血浆miRNA-21与NSCLC铂类化疗疗效的相关性。方法:采用real-timeRT-PCR方法检测63例NSCLC患者和30例健康体检者血浆miRNA-21表达的差异;检测铂类化疗有效(CR+PR)的患者(n=11)与化疗无效(SD+PD)的患者(n=24)血浆miRNA-21的表达差异。结果:NSCLC患者血浆中miRNA-21的表达明显高于正常对照组(P〈0.0001),miRNA-21的表达与年龄、性别、吸烟状况、病理类型及淋巴结转移无关(P均〉0.05)。但与TNM分期具有显著相关性(P〈0.05)。血浆miRNA-21在ROC曲线下面积(AUC)为0.775(95%CI:0.681-0.868),灵敏度和特异性分别为76.19%和70.0%。铂类药物化疗(PD+SD)组血浆miRNA-21表达水平较(CR+PR)组增高,差异具有统计学意义(P=0.0487)。结论:血浆miRNA-21是NSCLC诊断的特异性标志之一,并对铂类联合化疗的疗效具有良好的评判价值。
简介:摘要:目的:研究在丙型肝炎确诊患者中采用HCV-RND和抗-HCV联合检测的临床意义。方法:回顾性分析2018年4月~2020年4月在我院治疗的丙型肝炎确诊患者228例,对所有患者的血清标本进行检测,抗-HCV采用化学发光微粒子免疫法;HCV-RNA采用实施荧光定量聚合酶联反应法,分析检测结果。结果:HCV-RNA的总检出率为88.16%(201/228);抗-HCV总检测率为85.53%(195/228),两种联合检测结果为98.25%(224/228),HCR-RNA阳性与阴性患者的ALT阳性率相比较,P<0.05。结论:采用HCV-RNA联合抗-HCV检测,可尽早的确诊HCV感染。
简介:【摘要】目的:分析结核杆菌RNA实时荧光恒温扩增技术(SAT)测定在肺结核治疗过程中的疗效判定与评估作用。方法:此次实验对象为行标准化抗结核治疗至6个月末的涂阳初治肺结核患者,入选时间均在2020.06月至2022.06月,入选患者共100例,利用随机数字表法进行分组,分为对照组(痰浓缩集菌检测+痰结核菌培养检查,n=50)与观察组(结核杆菌RNA-SAT检测+痰浓缩集菌检测+痰结核菌培养检查,n=50)。观察并对比两组的检测结果。结果:在准确率、敏感度及特异度上,观察组均高于对照组(P<0.05)。结论:结核杆菌RNA-SAT用于肺结核患者治疗期间疗效判定及评估的效果显著,具有较高的敏感度与特异度,有利于提高疗效判定与评估的准确性,为后续治疗方案的调整提供依据,临床可进一步推广应用。
简介:【摘要】目的:分析结核杆菌RNA实时荧光恒温扩增技术(SAT)测定在肺结核治疗过程中的疗效判定与评估作用。方法:此次实验对象为行标准化抗结核治疗至6个月末的涂阳初治肺结核患者,入选时间均在2020.06月至2022.06月,入选患者共100例,利用随机数字表法进行分组,分为对照组(痰浓缩集菌检测+痰结核菌培养检查,n=50)与观察组(结核杆菌RNA-SAT检测+痰浓缩集菌检测+痰结核菌培养检查,n=50)。观察并对比两组的检测结果。结果:在准确率、敏感度及特异度上,观察组均高于对照组(P<0.05)。结论:结核杆菌RNA-SAT用于肺结核患者治疗期间疗效判定及评估的效果显著,具有较高的敏感度与特异度,有利于提高疗效判定与评估的准确性,为后续治疗方案的调整提供依据,临床可进一步推广应用。
简介:目的在验证不同浓度叶酸培养影响人正常肝细胞系增殖、周期和迁移能力的基础上,应用转录组测序(RNASeq)技术筛选差异表达基因,为进一步探讨叶酸缺乏与基因差异表达以及正常肝细胞恶性转化之间的相关性打下基础。方法不同浓度叶酸培养(无叶酸组0mg/L,正常叶酸组40mg/L)的人正常肝细胞系QSG-77016个月,应用CCK-8实验检测细胞增殖、流式细胞技术检测细胞周期、细胞凋亡、Transwell小室检测细胞迁移;利用RNA-Seq技术对两组细胞中的mRNA进行检测,筛选差异mRNA;通过用实时定量PCR对RNA-Seq的结果进行验证,并结合统计学和生物信息学方法分析差异mRNA。结果无叶酸培养显著提高QSG-7701细胞的增殖能力,促进细胞由静止期进入分裂期,促进细胞的迁移能力;RNA-Seq检测得到含有16774条差异mRNA的数据集,初步分析显示其中391条差异mRNA可能与不同浓度叶酸培养相关,其中上调的115条,下调的276条;随机对其中11条进行实时定量PCR验证,72.73%的结果与RNA-Seq一致;分析显示,差异mRNA相对应的基因与细胞周期等生理过程以及多种肿瘤的发生、发展密切相关。结论最终筛选出参与叶酸调控正常肝细胞恶性转化相关的基因,RNA-Seq技术能有效地用于差异基因地筛选。
简介:目的分析微小RNA(miR)-34b及c-Myc在膀胱癌中的作用,并验证两者相互作用关系。方法107例膀胱癌患者,全部患者均行手术治疗,取病理组织及瘤旁组织样本,比较miR-34b及c-Myc在膀胱癌和瘤旁组织、肌层浸润和肌层非浸润及的各病理分级的表达水平,采用荧光素酶法及生物信息学软件分析miR-34b与c-Myc的相互作用关系。结果miR-34b在膀胱癌中的相对表达水平为(0.0213±0.0061),与瘤旁组织的(0.0563±0.0089)对比差异有统计学意义(P<0.05);c-Myc在膀胱癌中的相对表达水平为(0.484±0.063),与瘤旁组织的(0.216±0.045)对比差异有统计学意义(P<0.05)。miR-34b在45例肌层浸润性膀胱癌中的相对表达水平为(0.0234±0.0026),与62例肌层非浸润性膀胱癌中的(0.0496±0.0075)对比差异有统计学意义(P<0.05);c-Myc在45例肌层浸润性膀胱癌中的相对表达水平为(0.5180±0.0826),与62例肌层非浸润性膀胱癌中的(0.3140±0.0753)对比差异有统计学意义(P<0.05)。miR-34b在低度恶性倾向、低分级、高分级病例的表达水平依次为(0.0364±0.0047)、(0.0219±0.0034)和(0.0102±0.0028),其表达水平随病理分级升高呈现降低趋势,组间对比差异有统计学意义(F=386.732,P<0.05);c-Myc在低度恶性倾向、低分级、高分级病例的表达水平依次为(0.083±0.013)、(0.236±0.032)和(0.571±0.058),其表达水平随病理分级升高呈现上升趋势,组间对比差异有统计学意义(F=106.964,P<0.05)。经生物信息学软件检验发现,c-Myc是miR-34b的直接靶基因,采用荧光素酶法进一步检测后证实,共转染miR-34b的荧光强度(1.035±0.024)au明显低于共转染的c-Myc强度(3.572±0.068)au(P<0.05)。结论c-Myc是miR-34b的直接靶基因,二者存在密切的相关性,可通过下调c-Myc水平提升miR-34b表达,抑制膀胱细胞癌增殖。
简介:目的:探究微小RNA-29c(miRNA-29c)在胶质瘤中的表达水平以及表达水平对胶质瘤增殖的影响。方法选取手术切除的胶质瘤组织标本80例,根据世界卫生组织肿瘤分类分级标准,将组织标本进行分级,同时收集非胶质瘤组织标本25例作为对照组。将上述收集的组织标本制作为微组织阵列。同时切取5μm×5μm组织切片留用蛋白细胞分裂周期蛋白42(CDC42)免疫组化检测以及miRNA-29c原位杂交检测。结果非胶质瘤组织标本miRNA-29c表达水平明显高于胶质瘤组织标本表达,miRNA-29c表达水平随着肿瘤分化级别的提升而降低;非胶质瘤组标本CDC42表达水平明显低与胶质瘤组,且随着胶质瘤分化级别提高CDC42水平明显增加;miRNA-29c靶mRNA生物信息学预测结果提示人CDC42mRNA是miRNA-29c潜在的靶mRNA;人胶质瘤细胞U87MG经过miRNA-29cmimics转染48h后,转染组细胞miRNA-29c表达水平明显高于空白对照组以及Scr转染对照组,通过转染方式可将miRNA-29cmimics成功转入人胶质瘤细胞U87MG,并且能够成功表达;miRNA-29cmimics转染组CDC42表达明显低于两对照组,在人胶质瘤细胞U87MG中miRNA-29c可以降解CDC42mRNA的表达,从而降低CDC42蛋白的表达水平;miRNA-29cmimics转染组人胶质瘤细胞增殖活性在48、72、96h明显低于空白对照组与Scr转染对照组,miRNA-29c可以有效的抑制人胶质瘤细胞U87MG增殖活性。结论miRNA-29c是人胶质瘤的有效抑瘤miRNA之一,miRNA-29c表达水平可作为临床上判断胶质瘤分化分级的参考依据,miRNA-29c表达水平的降低减少了对其下游基因CDC42的抑制作用,引起CDC42表达的异常增加,导致肿瘤细胞的异常增殖。研究结果显示miRNA-29c在胶质瘤的发生发展过程中起着重要的调控作用。