简介：摘要目的探讨miR-124-3p和miR-506-3p在蛋白C(protein C，PROC)降低中的作用及机制。方法将PROC 3'-UTR野生型(PROCwt)和PROC 3'-UTR突变型(PROCmut)克隆构建到含萤火虫荧光素酶报告质粒中(Luc-PROCwt和Luc-PROCmut)，利用双荧光素酶报告体系检测相对荧光素酶酶活性，明确miR-124-3p和miR-506-3p与PROC的靶基因关系及其紧密性。将miR-124-3p mimics和miR-506-3p mimics及其抑制基因(inhibitor)分别转染至HL-7702细胞，检测对照组(NC)、miR-506-3p组、miR-124-3p组、miR-506-3p抑制组和miR-124-3p抑制组的细胞增殖率，PROC mRNA表达水平，PROC、COX-2、Bcl-2和Bax蛋白表达水平和细胞凋亡水平，并采用单因素和双因素方差分析比较各组间的差异。结果双荧光素酶报告体系检测显示，NC＋Luc-PROCwt组、miR-506-3p＋Luc-PROCwt组、miR-124-3p＋Luc-PROCwt组、NC＋Luc-PROCmut组、miR-506-3p＋Luc-PROCmut组和miR-124-3p＋Luc-PROCmut组荧光素酶活性分别为6.98±0.07、2.01±0.05、2.67±0.06、8.13±0.26、6.91±0.14和8.41±0.13。与NC＋Luc-PROCwt组相比，miR-506-3p＋Luc-PROCwt组与miR-124-3p＋Luc-PROCwt组的荧光素酶活性均明显降低，差异均有统计学意义(P均<0.01)；与NC＋Luc-PROCmut组相比，miR-506-3p＋Luc-PROCmut组荧光素酶活性明显降低，miR-124-3p＋Luc-PROCmut组荧光素酶活性明显升高，组间比较，差异亦均有统计学意义(P<0.01和P＝0.018 1)。CCK-8检测显示，NC组、miR-506-3p组、miR-124-3p组、miR-506-3p抑制组和miR-124-3p抑制组96 h时细胞增殖率分别为0.506±0.016、0.323±0.021、0.329±0.011、0.570±0.007和0.562±0.007。与NC组相比，miR-506-3p组和miR-124-3p组细胞增殖率均有所下降，组间差异均有统计学意义(P均<0.01)；miR-506-3p抑制组和miR-124-3p抑制组细胞增殖率均有所上升，组间差异亦均有统计学意义(P均<0.01)。RT-PCR检测显示，NC组、miR-506-3p组、miR-124-3p组、miR-506-3p抑制组和miR-124-3p抑制组PROC mRNA表达量分别为1.00±0.08、0.31±0.09、0.34±0.04、1.73±0.28和1.75±0.36。与NC组相比，miR-506-3p组和miR-124-3p组PROC mRNA表达水平均明显降低，组间差异均有统计学意义(P＝0.002 6和0.003 2)；miR-506-3p抑制组和miR-124-3p抑制组PROC mRNA表达水平均明显上升，组间差异亦均有统计学意义(P＝0.001 8和0.001 6)。Western-blot检测显示，与NC组相比，miR-506-3p组与miR-124-3p组PROC与Bcl-2蛋白表达水平下调，COX-2和Bax蛋白表达水平上调；miR-506-3p抑制组和miR-124-3p抑制组PROC与Bcl-2蛋白表达水平上调，COX-2和Bax蛋白表达水平下调。Annexin V-FITC/PI检测显示，NC组、miR-506-3p组、miR-124-3p组、miR-506-3p抑制组和miR-124-3p抑制组细胞凋亡率分别为(10.27±0.57)%、(21.50±1.44)%、(13.52±0.40)%、(1.12±0.08)%和(7.63±0.40)%。与NC组相比，miR-506-3p组和miR-124-3p组细胞凋亡率均明显升高，组间差异均有统计学意义(P均<0.01)；miR-506-3p抑制组和miR-124-3p抑制组细胞凋亡率均明显降低，组间差异亦均有统计学意义(P均<0.01)。结论PROC是miR-506-3p和miR-124-3p的靶基因，miR-506-3p和miR-124-3p可能通过抑制肝细胞增殖、促进肝细胞凋亡和抑制PROC mRNA表达引发PROC蛋白表达水平降低。

简介：摘要目的通过采集肿瘤患者放疗前后外周血，探讨照射对人外周血血清miR-150-5p、miR-23a-3p表达的影响，以期为寻找辐射生物标志物提供科学依据。方法以2021年10月至2022年3月63例行放疗的肿瘤患者为研究对象，采用实时荧光定量PCR(qPCR)方法，检测患者放疗前后外周血血清miR-150-5p与miR-23a-3p的相对表达水平。比较两种miRNAs放疗前后在患者外周血血清中的差异表达变化，分析其与肿瘤类型等因素的关系。结果放疗后，患者外周血血清miR-150-5p与miR-23a-3p的相对表达量明显低于放疗前(t＝4.97，Z＝－2.77，P<0.05)。不同的肿瘤类型中，乳腺癌、食管癌和其他消化道肿瘤患者放疗后miR-150-5p的相对表达量降低(t＝3.47、2.47、2.87，P<0.05)，消化道肿瘤患者放疗后miR-23a-3p相对表达量下降(Z＝－1.99，P<0.05)。在放疗前、后miR-150-5p的表达改变均不受性别、年龄、化疗和肿瘤类型等因素影响(P>0.05)，而miR-23a-3p的表达改变在放疗后受性别、年龄和化疗等因素影响(t＝2.04、－3.34、－2.29，P<0.05)。结论放疗可影响肿瘤患者血清中miR-150-5p的表达，其有作为辐射生物学标志物的潜力。

简介：摘要目的研究miR-125b-1-3p在轮状病毒(rotavirus)复制过程中的作用和调控机制。方法将MA104细胞中的miR-125b-1-3p分别上调和下调后感染轮状病毒，通过RT-PCR分析miR-125b-1-3p的表达情况和轮状病毒拷贝数；免疫荧光分析miR-125b-1-3p对轮状病毒蛋白表达情况的影响；Western blot分析miR-125b-1-3p参与调控的相关蛋白表达情况。结果轮状病毒感染细胞后，miR-125b-1-3p的表达水平明显上调，上调miR-125b-1-3p后，轮状病毒的VP7、NSP3基因拷贝数下降，下调miR-125b-1-3p后，轮状病毒的VP7、NSP3基因拷贝数明显升高；上调miR-125b-1-3p的表达水平后轮状病毒蛋白荧光数下降，下调miR-125b-1-3p后，病毒蛋白荧光数增加；轮状病毒感染细胞16 h后PI3K/Akt通路活性受到抑制，上调miR-125b-1-3p能够抑制PI3K/Akt通路的活化。结论miR-125b-1-3p通过调控PI3K/Akt通路抑制轮状病毒的复制。研究结果为探讨miR-125b-1-3p和PI3K/Akt通路之间的具体调控机制研究提供了实验基础，为轮状病毒抗感染治疗提供了靶点。

简介：摘要目的探讨AP患者血清miR-148a-3p和miR-551b-5p的表达水平及其临床价值。方法选取2017年1月至2020年9月间儋州市人民医院收治的152例AP患者的临床资料，根据病情严重程度将患者分为MAP组(70例)、MSAP组(40例)和SAP组(42例)，SAP组又根据患者预后情况分成生存组(25例)和死亡组(17例)。另选取50例体检健康者作为对照组。于患者发病当天采集空腹静脉血，采用实时定量PCR法检测各组血清miR-148a-3p和miR-551b-5p表达水平。绘制受试者工作特征曲线(ROC)，计算曲线下面积(AUC)，分析血清miR-148a-3p和miR-551b-5p表达水平对SAP预后判断的价值。采用Pearson法分析SAP患者血清miR-148a-3p与miR-551b-5p表达水平的相关性。结果AP组患者血清miR-148a-3p和miR-551b-5p表达水平均明显高于对照组(3.18±1.27比0.96±0.28，1.94±0.85比0.51±0.12，P值均<0.001)。SAP组血清miR-148a-3p及miR-551b-5p表达水平均明显高于MSAP组、MAP组(4.36±1.70比2.84±1.10、2.50±0.92，2.80±1.04比1.68±0.53、1.42±0.45，P值均<0.001)。死亡组血清miR-148a-3p及miR-551b-5p表达水平均明显高于生存组(5.30±1.95比3.47±1.40，3.62±1.37比2.08±0.91，P值均<0.001)。ROC曲线分析显示，miR-148a-3p与miR-551b-5联合判断SAP预后的AUC值明显高于miR-148a-3p、miR-551b-5p单项指标[0.943(95%CI0.886～0.997)比0.860(95%CI0.797～0.924)、0.822(95%CI0.765～0.880)]，其灵敏度为98.3%，特异度为84.6%。相关分析显示，SAP患者血清miR-148a-3p与miR-551b-5p表达水平呈正相关(r＝0.835，P<0.001)。结论AP患者血清miR-148a-3p及miR-551b-5p表达水平明显升高，两者联合检测对判断SAP患者预后具有较好的价值。

简介：AbstractBackground:Long non-coding RNA (lncRNA) actin filament-associated protein 1 antisense RNA 1 (AFAP1-AS1) functions as a competing endogenous RNA to regulate target genes expression by sponging microRNAs (miRs) to play cancer-promoting roles in cancer stem cells. However, the regulatory mechanism of AFAP1-AS1 in cervical cancer (CC) stem cells is unknown. The present study aimed to provide a new therapeutic target for the clinical treatment of CC.Methods:Hyaluronic acid receptor cluster of differentiation 44 variant exon 6 (CD44v6)(+) CC cells were isolated by flow cytometry (FCM). Small interfering RNAs of AFAP1-AS1 (siAFAP1-AS1) were transfected into the (CD44v6)(+) cells. The levels of AFAP1-AS1 were measured by quantitative real-time PCR (qRT-PCR). Sphere formation assay, cell cycle analysis, and Western blotting were used to detect the effect of siAFAP1-AS1. RNA pull-down and luciferase reporter assay were used to verify the relationship between miR-27b-3p and AFAP1-AS1 or vascular endothelial growth factor (VEGF)-C.Results:CD44v6(+) CC cells had remarkable stemness and a high level of AFAP1-AS1. However, AFAP1-AS1 knockdown with siAFAP1-AS1 suppressed the cell cycle transition of G(1)/S phase and inhibited self-renewal of CD44v6(+) CC cells, the levels of the stemness markers octamer-binding transcription factor 4 (OCT4), osteopontin (OPN), and cluster of differentiation 133 (CD133), and the epithelial-mesenchymal transition (EMT)-related proteins Twist1, matrix metalloprotease (MMP)-9, and VEGF-C. In the mechanism study, miR-27b-3p/VEGF-C signaling was demonstrated to be a key downstream of AFAP1-AS1 in the CD44v6(+) CC cells.Conclusions:LncRNA AFAP1-AS1 knockdown inhibits the CC cell stemness by upregulating miR-27b-3p to suppress VEGF-C.

简介：摘要目的观察机械振动对去卵巢骨折大鼠骨折断端miR-214-3p及血清中白细胞介素-1β(IL-1β)表达的影响。方法选取30只3月龄雌性Wistar大鼠，按照随机数字表法将其分为对照组、模型组、振动组，每组10只。振动组大鼠骨折术后5 d进行全身振动治疗，振动频率35 Hz，每日20 min，每周5 d。对照组自然饲养，模型组行卵巢摘除术后自然饲养，均不予振动治疗。术后2周、6周，采用Lane-Sandhu X射线评分系统评价大鼠的骨折愈合质量，采用RT-PCR技术检测大鼠骨中miR-214-3p的含量，用酶联免疫吸附测定法检测大鼠血清中IL-1β的含量。结果术后2周、6周，模型组断端骨痂生长评分低于对照组，振动组断端骨痂生长评分高于模型组(P<0.05)。与对照组同时间点比较，模型组、振动组术后2周、6周骨折断端miR-214-3p含量均较高(P<0.05)。与模型组同时间点比较，振动组术后6周骨折断端miR-214-3p含量(0.71±0.03)较低(P<0.05)。模型组大鼠术后2周、6周的IL-1β较对照组高，振动组大鼠术后2周、6周的IL-1β较对照组及模型组低(P<0.05)。结论机械振动可抑制骨折断端miR-214-3p的表达，降低IL-1β水平，加速骨质疏松后骨折愈合过程。

简介：摘要目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)CALCOCO1在膀胱癌组织中的表达及其通过调控miR-200a-3p对膀胱癌细胞增殖和迁移的影响。方法通过TCGA数据库分析膀胱癌组织和癌旁组织中CALCOCO1的相对表达水平。选择人膀胱癌细胞UM-UC-3，将细胞分为阴性对照组和CALCOCO1组，分别将NC质粒和CALCOCO1质粒转染UM-UC-3细胞。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测各组细胞CALCOCO1的表达水平。采用噻唑蓝(MTT)法和Transwell迁移实验检测UM-UC-3细胞的增殖情况和迁移能力。生物信息学技术预测及双荧光素酶报告基因实验验证CALCOCO1与miR-200a-3p的靶向关系。qRT-PCR检测各组UM-UC-3细胞miR-200a-3p的表达水平。Western blotting法检测各组UM-UC-3细胞增殖和迁移表型蛋白的表达。计量资料以均数±标准差(±s)表示，两组间比较采用t检验，不同时间点比较采用重复测量资料方差分析。结果与癌旁组织相比，膀胱癌组织中CALCOCO1相对表达水平明显降低，差异具有统计学意义(P<0.01)。CALCOCO1组和阴性对照组UM-UC-3细胞中CALCOCO1相对表达水平分别为9.66±2.51和1.07±0.59，CALCOCO1组CALCOCO1相对表达水平明显高于阴性对照组，差异具有统计学意义(P<0.01)。与阴性对照组相比，CALCOCO1组UM-UC-3细胞增殖活性降低(P<0.05)，UM-UC-3细胞迁移数目显著减少(P<0.01)。CALCOCO1与miR-200a-3p存在结合位点。CALCOCO1组和阴性对照组UM-UC-3细胞miR-200a-3p的相对表达水平分别为1.02±0.31和5.79±1.68，差异具有统计学意义(P<0.01)。与阴性对照组相比，CALCOCO1组UM-UC-3细胞增殖表型蛋白CCNB1、CCNE1、CCND2表达水平降低，迁移表型蛋白FOXC2、Fibronectin表达水平降低。结论膀胱癌组织中CALCOCO1表达下调，促进CALCOCO1表达可通过靶向下调miR-200a-3p表达，从而抑制膀胱癌UM-UC-3细胞的增殖和迁移。

简介：摘要目的探讨血清miR-451a、miR-25-3p、GAS8-AS1联合用于早期甲状腺乳头状癌的诊断价值。方法纳入2016年3月至2019年3月池州市人民医院收治的早期甲状腺乳头状癌患者70例为肿瘤组、良性结节患者70例为良性组、健康体检者70名为对照组。通过实时荧光定量PCR检测血清miR-451a、miR-25-3p、GAS8-AS1的表达量。通过酶联免疫吸附试验检测患者血清甲状腺球蛋白(Tg)水平。用受试者工作特征(ROC)曲线的曲线下面积(AUC)分析miR-451a、miR-25-3p、GAS8-AS1检测在早期甲状腺乳头状癌中的诊断意义。结果肿瘤组、良性组和对照组血清miR-451a、miR-25-3p、GAS8-AS1、Tg的表达水平差异存在统计学意义(F＝14.920、9.849、15.060、9.090，P均<0.05)。血清miR-451a、miR-25-3p、GAS8-AS1、Tg鉴别肿瘤组和对照组的敏感性分别为86%、83%、87%、83%，特异性分别为93%、83%、87%、73%，鉴别肿瘤组和良性组的敏感性分别为97%、97%、78%、84%，特异性分别为87%、80%、93%、71%。miR-451a、miR-25-3p、GAS8-AS1联合对早期甲状腺乳头状癌诊断的敏感性为94.29%，特异性为88.57%，准确性为90.48%。结论血清miR-451a、miR-25-3p、GAS8-AS1联合检测可能在诊断早期甲状腺乳头状癌中具有一定价值。

简介：摘要目的探讨miR-605-3p是否影响肺癌细胞A549的增殖和细胞活力。方法转染合成的miR-605-3p模拟物过表达miR-605-3p为过表达组，转染合成的miR-605-3p抑制剂敲低miR-605-3p为敲低组，通过CCK-8和MTT检测2组肺癌细胞A549的增殖水平和细胞活力。通过miRDB在线分析miR-605-3p潜在底物，并通过荧光素酶报告实验验证并分析潜在底物的作用。结果过表达组肺癌细胞A549的增殖水平和细胞活力较对照组均下降(t＝12.45、15.38，P值均<0.05)；敲低组肺癌细胞A549的增殖水平和细胞活力较对照组均上升(t＝11.54、8.45，P值均<0.05)。miR-605-3p靶向TRIB3的3′端非编码区(t＝17.32，P值均<0.05)。过表达TRIB3后，肺癌细胞A549的增殖水平和细胞活力均上升(t＝10.45、9.04，P值均<0.05)。敲低TRIB3后，肺癌细胞A549的增殖水平和细胞活力均下降(t＝8.43、17.43，P值均<0.05)。过表达miR-605-3p后，TRIB3的表达下降，β-catenin进入细胞核的量减少；敲低miR-605-3p后，TRIB3的表达上升，β-catenin进入细胞核的量增加。同时敲低miR-605-3p和TRIB3或miR-605-3p和β-catenin，发现肺癌细胞A549的增殖水平和细胞活力差异无统计学意义(t＝0.42、0.61，P值均>0.05)；过表达TRIB3的同时敲低β-catenin，发现肺癌细胞A549的增殖水平和细胞活力差异无统计学意义(t＝0.56、0.21，P值均>0.05)。结论miR-605-3p靶向TRIB3抑制β-catenin的入核水平，抑制肺癌细胞A549的增殖水平和细胞活力。

简介：摘要miR-142-3p是一种长约19～24核苷酸的短链非编码小RNA，通过转录后调控的方式广泛参与机体疾病的发生、发展进程，参与调控炎症反应及免疫细胞功能，与炎症性疾病如骨关节炎、脓毒症及免疫相关性疾病多发性硬化、系统性红斑狼疮等相关，并可以通过外泌体运输至靶组织，miR-142-3p有望成为免疫炎症性疾病治疗的新靶点。

简介：摘要目的探讨血浆微小RNA-21-3p（miR-21-3p）和miR-551-5p表达水平对急性胰腺炎（AP）的诊断及预后预测的价值。方法采用前瞻性观察性研究，选择2017年1月1日至2019年12月31日海南省第三人民医院收治的AP患者作为研究对象。根据病情严重程度将患者分为轻症急性胰腺炎（MAP）组、中度重症急性胰腺炎（MSAP）组和重症急性胰腺炎（SAP）组，均于入院次日采集空腹静脉血，采用实时定量聚合酶链反应（PCR）检测血浆miR-21-3p及miR-551-5p表达水平。以患者康复出院或死亡作为研究终点。另外以同期50例健康体检者作为健康对照组。用受试者工作特征曲线（ROC）分析血浆miR-21-3p和miR-551-5p表达水平对SAP诊断及预后评估的价值。采用Pearson法分析SAP患者血浆miR-21-3p与miR-551-5p表达水平的相关性。结果共入选164例AP患者，其中MAP 72例，MSAP 47例，SAP 45例。SAP患者中存活27例，死亡18例；MAP组和MSAP组无死亡病例。AP患者血浆miR-21-3p、miR-551-5p表达水平均明显高于健康对照组〔miR-21-3p（2-ΔΔCt）：2.17±0.90比0.65±0.12，miR-551-5p（2-ΔΔCt）：1.80±0.73比0.42±0.08，均P<0.01〕；且随病情程度加重，患者血浆miR-21-3p、miR-551-5p表达水平逐渐升高（F值分别为11.635、10.204，均P<0.01），SAP组血浆miR-21-3p、miR-551-5p表达水平明显高于MSAP组和MAP组〔miR-21-3p（2-ΔΔCt）：3.16±1.08比1.85±0.71、1.70±0.64，miR-551-5p（2-ΔΔCt）：2.63±0.95比1.52±0.46、1.36±0.40，均P<0.01〕。ROC曲线分析显示，miR-21-3p与miR-551-5p联合诊断SAP的ROC曲线下面积（AUC）和95%可信区间（95%CI）明显高于miR-21-3p或miR-551-5p单项指标〔0.898（0.841～0.960）比0.820（0.763～0.882）、0.806（0.748～0.867），Z1＝4.480、Z2＝4.916，均P<0.05〕，其敏感度为90.7%，特异度为85.0%。SAP死亡组患者血浆miR-21-3p、miR-551-5p表达水平均明显高于存活组〔miR-21-3p（2-ΔΔCt）：3.75±1.17比2.66±0.87，miR-551-5p（2-ΔΔCt）：3.17±1.04比2.24±0.83，均P<0.01〕。ROC曲线分析显示，miR-21-3p与miR-551-5p联合预测SAP患者死亡的AUC和95%CI明显高于miR-21-3p或miR-551-5p单项指标〔0.933（0.875～0.996）比0.856（0.794～0.917）、0.816（0.759～0.874），Z1＝4.395、Z2＝5.520，均P<0.05〕，其敏感度为95.2%，特异度为87.5%。相关性分析显示，SAP患者血浆miR-21-3p与miR-551-5p表达水平呈显著正相关（r＝0.827，P<0.001）。结论血浆miR-21-3p和miR-551-5p表达水平升高与AP患者病情严重程度呈正相关，二者联合检测对SAP诊断和预后评估具有较好的价值。

简介：摘要目的探究LncRNA ZBED3-AS1调控miR-339-5p/Notch 1在骨质疏松大鼠成骨细胞增殖分化中的作用。方法构建假手术（Sham）组和模型（Model）组大鼠模型，对大鼠的骨密度进行检查观测大鼠建模情况。分离大鼠成骨细胞，qRT-PCR检测细胞中ZBED3-AS1、miR-339-5p的表达。对Sham组和Model组大鼠成骨细胞进行分组后转染。CCK8、茜素红（AR-S）染色、碱性磷酸酶（ALP）染色检测各组细胞增殖分化能力。FISH实验测定ZBED3-AS1在细胞中的分布。双荧光素酶报告证实ZBED3-AS1与miR-339-5p及miR-339-5p和Notch 1之间的关系。Western blot检测Notch通路相关因子的表达。结果检测股骨骨密度发现，Model组大鼠骨密度明显低于Sham组大鼠（P=0.0 057）。与Sham组大鼠比较，Model组大鼠成骨细胞中ZBED3-AS1呈低表达，而miR-339-5p呈高表达（均P<0.05）。过表达ZBED3-AS1能促进成骨细胞的增殖分化；而敲减ZBED3-AS1则能抑制成骨细胞增殖分化（均P<0.05）。ZBED3-AS1作为ceRNA调控miR-339-5p（均P<0.05）。过表达miR-339-5p能抑制成骨细胞的增殖分化能力，而该作用可被ZBED3-AS1过表达部分挽救。Notch 1被证实为miR-339-5p的作用靶点，且干预ZBED3-AS1/miR-339-5p的表达能影响Notch 1的蛋白表达，ZBED3-AS1/miR-339-5p对成骨细胞的调控可能是通过Notch通路实现的。结论ZBED3-AS1能作为ceRNA调控miR-339-5p，进而影响骨质疏松大鼠成骨细胞增殖分化。

简介：摘要目的研究肺腺癌转移相关转录本1(MALAT1)靶向调控微小RNA-142-3p(miR-142-3p)导致卵巢癌化疗耐药的机制。方法收集2016年2月至2019年2月陕西省人民医院80对卵巢癌组织及对应非癌正常组织标本，通过实时荧光定量PCR法检测卵巢癌组织和非癌正常组织中MALAT1及miR-142-3p的相对表达量，并分析二者表达的相关性；通过CCK-8实验验证异常表达的MALAT1及miR-142-3p对卵巢癌Hey细胞增殖和化疗药物5-氟尿嘧啶及顺铂敏感性的影响；通过双荧光素酶报告基因实验(分4组：MALAT1 wt组、MALAT1 wt＋miR-142-3p mimic组、MALAT1 mut组和MALAT1 mut＋miR-142-3p mimic组)检测miR-142-3p与MALAT1的靶向关系；通过RNA免疫沉淀反应实验验证MALAT1与miR-142-3p的靶点。结果在卵巢癌组织和对应非癌正常组织中，MALAT1的相对表达量分别为0.000 52(0.002 56)、0.000 47(0.000 89)，差异有统计学意义(Z＝2.365，P＝0.018)；miR-142-3p的相对表达量分别为0.001 19(0.002 69)、0.001 61(0.008 48)，差异有统计学意义(Z＝2.935，P＝0.003)；二者在卵巢癌组织中的表达呈负相关(r＝－0.474，P<0.001)。miR-142-3p在miR-142-3p mock组的相对表达量明显低于MALAT1＋miR-142-3p mimic组(0.004 18±0.001 24 vs. 0.006 51±0.000 28；t＝3.174，P＝0.017)。MALAT1 wt组与MALAT1 wt＋miR-142-3p mimic组的相对荧光富集度分别为2.27±0.86、31.10±6.05，差异具有统计学意义(t＝8.172，P<0.001)。Hey细胞转染MALAT1过表达质粒48、72、96 h后，MALAT1过表达组和对照组的吸光度(A)值(0.522±0.021 vs. 0.433±0.021；0.644±0.012 vs. 0.544±0.051；0.887±0.055 vs. 0.698±0.042)差异均有统计学意义(均P<0.05)。Hey细胞过表达MALAT1后，5-氟尿嘧啶0.10 ng/μl浓度时，MALAT1过表达组的细胞增殖速度明显较对照组快(0.615±0.036 vs. 0.506±0.042；t＝4.432，P＝0.002)，5-氟尿嘧啶1.00、10.00、100.00 ng/μl浓度时显示出同样的趋势(均P<0.05)；顺铂0.01 ng/μl浓度时，MALAT1过表达组的细胞增殖速度明显较对照组快(0.777±0.015 vs. 0.733±0.039；t＝2.355，P＝0.023)，顺铂0.10、1.00、10.00、100.00 ng/μl浓度时显示出同样的趋势(均P<0.05)。Hey细胞过表达miR-142-3p后，5-氟尿嘧啶0.10 ng/μl浓度时，miR-142-3p过表达组的细胞增殖速度明显较对照组细胞慢(0.512±0.051 vs. 0.744±0.119；t＝4.028，P＝0.004)，5-氟尿嘧啶1.00、10.00、100.00 ng/μl浓度时显示出同样的趋势(均P<0.05)；顺铂0.10 ng/μl浓度时，miR-142-3p过表达组的细胞增殖速度明显较对照组慢(0.520±0.043 vs. 0.674±0.096；t＝3.441，P＝0.009)，顺铂1.00、10.00、100.00 ng/μl浓度时显示出同样的趋势(均P<0.05)。采用0.10、1.00、10.00、100.00 ng/μl浓度的5-氟尿嘧啶和顺铂分别处理卵巢癌Hey细胞后，MALAT1过表达组、MALAT1＋miR-142-3p组与对照组间的细胞增殖差异均具有统计学意义(均P<0.05)，进一步两两比较发现，MALAT1＋miR-142-3p组均显著慢于MALAT1过表达组(均P<0.05)。结论MALAT1通过靶向调控miR-142-3p使卵巢癌细胞对5-氟尿嘧啶及顺铂的敏感性降低，导致卵巢癌化疗耐药。

简介：摘要目的探究微小RNA(miR)-103a-3p/壳多糖酶3样蛋白1(CHI3L1)在卵巢癌细胞增殖和血管拟生中的作用机制及对转化生长因子-β(TGF-β)通路的影响。方法通过生物信息学分析miR-103a-3p的表达水平与卵巢癌患者总生存率间的关系。将人卵巢腺癌细胞株SKOV3细胞分为4组：对照组、miR-103a-3p mimic组、miR-103a-3p mimic＋CHI3L1组和CHI3L1组。采用定量聚合酶链反应(qPCR)和Western blotting分别检测miR-103a-3p、CHI3L1 mRNA和CHI3L1蛋白的表达水平。采用酶联免疫吸附法检测细胞培养液中YKL-40的表达水平。采用CCK-8法、克隆形成实验和血管生成实验检测4组细胞活力、增殖能力和血管生成能力。通过双荧光素酶报告验证miR-130a-3p靶向CHI3L1。结果miR-103a-3p高表达组卵巢癌患者总体生存率高于miR-103a-3p低表达组(χ2＝6.187，P＝0.048)。对照组、miR-103a-3p mimic组、miR-103a-3p mimic＋CHI3L1组和CHI3L1组4组之间miR-103a-3p和CHI3L1 mRNA的水平差异均具有统计学意义(F＝198.254，P<0.001；F＝60.214，P<0.001)，miR-103a-3p mimic组和miR-103a-3p mimic＋CHI3L1组的miR-103a-3p水平高于对照组(均P<0.001)，CHI3L1组的CHI3L1 mRNA水平显著高于对照组(P<0.001)。4组CHI3L1蛋白的表达水平分别为2.25±0.23、1.19±0.12、2.29±0.28、4.31±0.37，差异具有统计学意义(F＝18.675，P<0.001)。4组细胞培养液中YKL-40的表达水平分别为(1.84±0.20)ng/ml、(0.95±0.08)ng/ml、(2.64±0.25)ng/ml、(6.27±0.79)ng/ml，差异具有统计学意义(F＝35.297，P<0.001)，CHI3L1组的YKL-40水平显著高于对照组(P<0.001)，miR-103a-3p mimic组的YKL-40水平低于对照组(P<0.001)，miR-103a-3p mimic＋CHI3L1组的YKL-40水平高于miR-103a-3p mimic组(P<0.001)。4组的细胞活力分别为100%±2.54%、76.23%±2.13%、104.89%±3.56%、137.42%±2.80%，差异具有统计学意义(F＝23.584，P<0.001)，miR-103a-3p mimic组的细胞活力显著低于对照组(P<0.001)，CHI3L1组显著高于对照组(P<0.001)，miR-103a-3p mimic＋CHI3L1组显著高于miR-103a-3p mimic组(P<0.001)。4组细胞的克隆形成数分别为(76.85±4.67)个、(21.56±2.85)个、(72.06±5.07)个、(169.63±9.21)个，差异具有统计学意义(F＝31.541，P<0.001)，miR-103a-3p mimic组细胞的增殖能力显著低于对照组(P<0.001)，CHI3L1组显著高于对照组(P<0.001)，miR-103a-3p mimic＋CHI3L1组显著高于miR-103a-3p mimic组(P<0.001)。4组细胞的相对管长度和管分支差异均具有统计学意义(F＝24.254，P<0.001; F＝27.564, P<0.001)。4组细胞的TGF-β和Smad水平比较差异均具有统计学意义(F＝30.254，P<0.001；F＝34.187，P<0.001)。双荧光素酶实验结果显示，与转染NC组相比较，共转染miR-103a-3p与CHI3L1-wt后细胞中荧光素酶活性显著降低。分别使用NC和miR-103a-3p与CHI3L1-mut共转染后细胞中荧光素酶活性变化不大。结论miR-103a-3p通过直接靶向抑制CHI3L1的表达，从而抑制卵巢癌SKOV3细胞的增殖和血管生成能力，抑制卵巢癌淋巴转移和远端转移，这可能与TGF-β通路有关。

简介：摘要目的探讨miR-200c-3p对肾母细胞瘤SK-NEP-1细胞株增殖与凋亡的调控作用。方法收集2015年1月至2019年8月深圳市儿童医院收治肾母细胞瘤患儿新鲜的瘤组织和瘤旁肾组织30例。实验分为模拟物阴性对照组、miR-200c-3p组及miR-200c-3p抑制剂组。采用实时荧光定量PCR法检测30例配对的肾母细胞瘤肿瘤组织、瘤旁肾组织及肾母细胞瘤SK-NEP-1细胞和人胚肾293FT细胞系中miR-200c-3p的表达情况。采用细胞计数盒8(CCK-8)细胞增殖实验测定miR-200c-3p抑制SK-NEP-1细胞增殖的效果，流式细胞术检测miR-200c-3p对SK-NEP-1细胞周期及凋亡的影响。裸鼠原位移植实验检测miR-200c-3p过表达对体内成瘤的影响，对瘤体组织进行HE染色并病理形态的观察、免疫组织化学染色检测移植瘤组织中核增殖指数Ki-67的增殖情况；Western blot法检测3组裸鼠移植瘤组织中B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)及活性半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3(cleaved Caspase-3)的表达水平。结果30例患儿miR-200c-3p的表达水平在肾母细胞瘤组织(0.420±0.587)中明显低于配对的瘤旁肾组织(1.500±0.504)(t＝8.613，P<0.001)。miR-200c-3p的表达水平在SK-NEP-1细胞中(0.363±0.006)与人胚肾293FT细胞(0.807±0.186)比较也显著下降(t＝4.136，P<0.05)。CCK-8法表明按照组间和时间交互效应miR-200c-3p可抑制SK-NEP-1细胞体外增殖(F＝16.81，P<0.001)。流式细胞术检测肾母细胞瘤细胞周期与凋亡显示，miR-200c-3p能使SK-NEP-1细胞阻滞在G0/G1期及S期(t＝-7.770，P<0.01；t＝11.501，P<0.001)，且促进早期凋亡率增加，晚期凋亡率降低(t＝-22.270，P<0.001；t＝4.612，P<0.01)。裸鼠原位移植实验显示与模拟物阴性对照组比较，miR-200c-3p组肿瘤体积[(2.469±0.914) cm3比(0.419±0.16) cm3]明显缩小(t＝5.407，P<0.001)，而miR-200c-3p抑制剂组[(1.627±0.189) cm3]差异不明显(t＝2.209，P＝0.052)。Western blot实验示miR-200c-3p上调了凋亡蛋白cleaved Caspase-3和Bax的表达水平(t＝-47.000、-82.730，均P<0.001)，但下调了抗凋亡蛋白Bcl-2的表达水平(t＝53.740，P<0.001)。结论miR-200c-3p能抑制SK-NEP-1细胞增殖及促进细胞凋亡，抑制裸鼠移植瘤的生长并起到抑癌基因的作用。

简介：摘要目的探讨术前检测前列腺癌患者血清miR-148a-3p及miR-139-5p表达水平对预测术后复发转移的价值。方法选择2016年10月至2019年10月平煤神马医疗集团总医院收治的120例前列腺癌患者作为研究对象。按照在随访期内是否出现复发转移分为复发转移组(47例)与术后未复发转移组(73例)。比较两组患者血清miR-148a-3p及miR-139-5p表达水平；分析术后复发转移患者血清miR-148a-3p及miR-139-5p的表达水平与临床病理学特征之间的关系；分析血清miR-148a-3p及miR-139-5p水平在预测前列腺癌术后复发转移的受试者工作特征曲线图。结果术后复发转移组血清miR-148a-3p及miR-139-5p相对表达水平均高于术后未复发转移组(P均<0.05)。术后复发转移患者血清miR-148a-3p及miR-139-5p表达水平与肿瘤TNM分期、Gleason评分均具有显著的相关性(P均<0.05)。miR-148a-3p及miR-139-5p两项指标绘制受试者工作特征曲线分析结果表明，两项指标曲线下面积差异均有统计学意义(P均<0.01)。miR-148a-3p表达水平取4.45 ng/ml时的敏感度为91.5%，特异度为83.2%；miR-139-5p表达水平取7.34 ng/ml时的敏感度为73.5%，特异度为79.2%。结论术后复发转移前列腺癌患者术前血清miR-148a-3p及miR-139-5p相对表达水平显著上升，且与TNM分期、Gleason评分呈正相关，二者在预测前列腺癌术后复发转移中的敏感度及特异度均较好，对临床评估前列腺癌患者预后状况具有一定的价值。

简介：摘要目的探讨miR-301a-3p对大鼠星形胶质细胞凋亡与增殖的影响。方法获取并培养大鼠原代星形胶质细胞，将miR-301a-3p agomir以及antagomir分别转染至细胞。分Blank组、miR-NC对照组、miR-301a组、antagomir组，每组设3个复孔，每孔2×105个细胞，CCK8实验检测各组细胞的增殖能力变化；用流式细胞术及Caspase-3活性检测分析细胞凋亡的情况。结果与Blank组(48 h：0.83±0.09；72 h：1.20±0.21；96 h：1.65±0.17)和miR-NC组(48 h：0.79±0.10；72 h：1.12±0.25；96 h：1.60±0.15)相比，miR-301a组(48 h：1.16±0.07；72 h ：1.56±0.11；96 h：2.13±0.14)细胞的增殖能力显著提高(P<0.05)，miR-301a组细胞的凋亡率显著下降(Blank组：10.44±1.33，miR-NC组：9.84±1.40，miR-301a组：4.32±0.51，P<0.05)；而antagomir组(48 h：0.52±0.12；72 h：0.72±0.09；96 h：1.01±0.15)细胞转染后增殖能力较Blank组和miR-NC组显著降低(P<0.05)，antagomir组细胞的凋亡率显著升高(Blank组：10.44±1.33，miR-NC组：9.84±1.40，antagomir组：21.41±2.57，P<0.05)。结论miRNA-301a-3p过表达促进大鼠星形胶质细胞的增殖，抑制细胞的凋亡通路，降低细胞的凋亡，从而调控大鼠星形胶质细胞的生物学功能。

简介：摘要目的探究HNF1A-AS1对IL-6诱导的血管瘤内皮细胞(hemangioendothelial cells，HemEC)增殖、迁移和侵袭的影响及可能机制。方法用RT-qPCR法检测35例血管瘤患者的瘤组织及瘤旁正常皮肤组织中HNF1A-AS1、miR-363-3p和IL-6的mRNA表达水平，分析瘤组织中HNF1A-AS1和miR-363-3p表达的相关性。体外分离培养HemEC，用双荧光素酶报告基因实验验证HNF1A-AS1与miR-363-3p的调控关系。将IL-6分别作用于转染si-NC、si-HNF1A-AS1、si-HNF1A-AS1与anti-miR-NC、si-HNF1A-AS1与anti-miR-363-3p的HemEC后，用CCK-8法和克隆形成实验检测各组细胞的增殖，用Transwell法检测各组细胞的迁移和侵袭，Western印迹法检测各组细胞中Ki67、MMP-2和MMP-9蛋白的表达水平。结果与正常皮肤组织比较，血管瘤组织中IL-6 mRNA表达水平明显升高，且增生期IL-6 mRNA表达水平低于消退期(P<0.05)。与瘤旁正常皮肤组织相比，血管瘤组织中HNF1A-AS1的表达升高(P<0.05)，miR-363-3p的表达降低(P<0.05)，且二者的表达呈负相关(r＝-0.758，P<0.05)。HNF1A-AS1在HemEC细胞中靶向负调控miR-363-3p的表达。IL-6可促进HemEC中HNF1A-AS1的表达、细胞OD值、克隆形成数、迁移和侵袭数及Ki67、MMP-2和MMP-9的蛋白表达(P<0.05)，而降低miR-363-3p表达(P<0.05)。下调si-HNF1A-AS1降低了IL-6诱导的HemEC细胞OD值、克隆形成数、迁移和侵袭数及Ki67、MMP-2和MMP-9的蛋白表达(P<0.05)。下调miR-363-3p降低了下调si-HNF1A-AS1对IL-6诱导的HemEC细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用(P<0.05)。结论HNF1A-AS1在血管瘤组织中表达升高，下调其表达通过靶向上调miR-363-3p抑制IL-6诱导的血管瘤内皮细胞增殖、迁移和侵袭。

简介：摘要目的观察长链非编码RNA（lncRNA）钾电压门控通道亚家族Q成员1反向转录物1（KCNQ1OT1）和微小RNA（miR）-146a-3p在子痫前期（PE）胎盘组织中的表达，并初步探索两者相互调控后对滋养细胞生物学特性的影响及作用机制。方法（1）选择2017年7月—2018年7月在海南省人民医院住院的PE孕妇45例为PE组，选择同期正常孕妇55例为对照组，采用实时荧光定量PCR技术检测两组胎盘组织中KCNQ1OT1 mRNA、miR-146a-3p的表达，并分析两者的相关性。（2）采用绒毛膜滋养细胞层细胞系HTR8/SVneo细胞，先分为空白对照组和脂多糖（LPS）组，经LPS处理24 h的HTR8/SVneo细胞再进一步分为短发夹状RNA（sh）-KCNQ1OT1组（即沉默KCNQ1OT1的表达）、miR-146a-3p抑制物（inhibitor）组和sh-KCNQ1OT1+miR-146a-3p inhibitor组，共5组。应用生物信息学软件预测KCNQ1OT1和miR-146a-3p的靶向关系，并采用双荧光素酶报告基因实验加以验证；分别采用活细胞计数（CCK-8）法、划痕实验、穿膜（transwell）小室实验检测HTR8/SVneo细胞的增殖、迁移、侵袭能力，实时荧光定量PCR技术检测细胞中KCNQ1OT1 mRNA、miR-146a-3p的表达，蛋白印迹（western blot）法检测细胞中趋化因子12（CXCL12）和趋化因子受体4（CXCR4）蛋白的表达。结果（1）PE组胎盘组织中KCNQ1OT1 mRNA的表达水平低于对照组（分别为0.23±0.03、0.51±0.04），miR-146a-3p的表达水平高于对照组（分别为0.49±0.03、0.31±0.03），两组分别比较，差异均有统计学意义（P<0.05）；PE组胎盘组织中KCNQ1OT1 mRNA的表达水平与miR-146a-3p的表达水平呈负相关（r=-0.79，P=0.031）。（2）生物信息学软件预测并经双荧光素酶报告基因实验验证显示，KCNQ1OT1与miR-146a-3p存在靶向关系。与空白对照组相比，LPS组细胞中KCNQ1OT1 mRNA的表达水平下降（分别为0.91±0.03、0.35±0.03），miR-146a-3p的表达水平升高（分别为0.22±0.03、0.63±0.04），细胞的增殖、侵袭、迁移能力及CXCL12、CXCR4蛋白的表达均下降，分别比较，差异均有统计学意义（P<0.05）；sh-KCNQ1OT1组细胞中KCNQ1OT1 mRNA的表达水平（0.23±0.03）进一步下降，miR-146a-3p的表达水平（0.85±0.03）进一步上升，细胞的增殖、侵袭、迁移能力及CXCL12、CXCR4蛋白的表达均进一步下降，分别比较，差异均有统计学意义（P<0.05）；而miR-146a-3p inhibitor组、sh-KCNQ1OT1+miR-146a-3p inhibitor组分别与sh-KCNQ1OT1组比较，KCNQ1OT1 mRNA的表达水平（分别为0.78±0.04、0.50±0.03）升高，miR-146a-3p的表达水平（分别为0.42±0.03、0.46±0.03）下降，细胞的增殖、侵袭、迁移能力及CXCL12、CXCR4蛋白的表达均增高，分别比较，差异均有统计学意义（P<0.05）。结论KCNQ1OT1负调控miR-146a-3p的表达，激活CXCL12/CXCR4信号通路后，可促进滋养细胞的增殖、迁移和侵袭，可能参与了PE的发病。

简介：摘要目的探讨吡格列酮在减轻脓毒症小鼠炎症反应及脾脏损伤中的作用机制。方法选取6~8周龄、SPF级健康雄性BALB/c小鼠60只，按随机数字表法分为对照组、脓毒症模型组（lipopolysaccharide group, LPS组）和吡格列酮干预组（吡格列酮+LPS组），每组20只。采用腹腔注射LPS 10 mg/kg制备脓毒症小鼠模型，对照组注射等量生理盐水，吡格列酮干预组为连续吡格列酮60 mg/kg灌胃3 d后腹腔注射LPS，再连续吡格列酮灌胃2 d。分别于6 h、12 h、24 h、48 h取各组小鼠眼眶血，采用酶联免疫吸附试验检测白细胞介素（interleukin, IL）-6、IL-10、肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor α, TNF-α）和高迁移率族蛋白B1（high mobility group protein B1, HMGB1）的水平。取血后处死小鼠取脾脏组织，采用苏木素-伊红染色评估脾脏病理损伤；用实时荧光定量反转录-聚合酶链反应检测miR-142-3p和过氧化物酶体增殖物激活受体γ（peroxisome proliferator-activated receptor γ, PPARγ）mRNA的表达水平。多组间的差异比较采用单因素方差分析，两组间的比较采用LSD-t检验，相关性分析采用Pearson相关性分析。结果与对照组相比，LPS组在6 h、12 h、24 h、48 h血清中的IL-6、IL-10、TNF-α及HMGB1均明显升高（均P<0.01），应用吡格列酮干预组促炎因子IL-6和TNF-α在6 h、12 h、24 h、48 h较LPS组下降（均P<0.01），促炎因子HMGB1在12 h、24 h、48 h较LPS组下降（均P<0.01），抑炎因子IL-10在12 h、24 h及48 h较LPS组升高（均P<0.01）。LPS组脾脏脾小结内细胞排列疏松，脾小结结构散乱，可见大量细胞坏死及炎性细胞浸润；吡格列酮干预组细胞坏死及炎性细胞浸润有所减少。与LPS组相比，吡格列酮干预组在6 h、12 h、24 h和48 h脾脏中miR-142-3p和PPARγ均较LPS组升高（均P<0.001），脾脏中miR-142-3p和PPARγ存在正相关（r=0.916，P<0.001），而miR-142-3p和HMGB1存在负相关（r=-0.884，P<0.001）。结论吡格列酮可能通过miR-142-3p来靶向调节HMGB1的表达来减轻脓毒症小鼠的炎症反应及脾脏损伤。