简介：目的：构建带Myc标签的LC3B—PLA2基因的真核表达质粒，获得LC3B—PLA2融合蛋白，并应用LC3B—PLA2研究Atg4B对LC3B的切割作用。方法：以本实验室保存的乳腺文库为模板，PCR扩增获得LCgB序列，与PLA2G]O拼接后插入pCMV—Myc载体，用构建的重组质粒转染HEK293T细胞，Western印迹检测融合蛋白的表达，用LC3B—PLA2与Atg4B共转染的方法检测Atg4B对LC3B的切割作用。结果：菌液PCR、重组质粒双酶切及测序均表明重组质粒构建成功，Western印迹结果表明融合蛋白在HEK293T细胞中获得表达，LC3B—PLA2真核表达蛋白能够应用于Atg4B对LC3B切割作用的研究。结论：构建了pCMV—Myc—LC3B—PLA2真核表达质粒，LC3B—PLA2融合蛋白在Atg4B对LC3B切割作用的研究中至关重要，为进一步研究Atg4B在自噬过程中的作用奠定了基础。

简介：危急值通知服务管理在医院信息化建设的今天起到了越来越重要的作用,已经是LIS不可缺少的一个模块,在与HIS的集成度也是要求越来越高,依赖于现在的实验室管理系统自动判定结果和不断完善的网络建设,危急值通知服务也越来越快捷准确。

简介：利用基因工程表达的志贺毒素Ｂ亚基纯化产物研究志贺毒素的分子组装机理。首先对ＳｔｘＢ进行了分离纯化，并将蛋白质纯品溶解在磷酸缓冲液中。利用蛋白质交联的方法证实，在磷酸缓冲液体系中ＳｔｘＢ可以自发聚合为不同的分子结构形式（单体至五聚体），并可以与游离和细胞膜表面的受体结合，对志贺毒素全毒素的细胞毒性有竞争抑制作用。结果表明，在没有Ａ亚基存在的情况下，单独的ＳｔｘＢ也可以自发组装为多聚体，说明ＳｔｘＢ具有自身组装的能力。

简介：用纯化的ＣＴＢ后腿肌肉注射免疫小鼠，每次１２．５μｇ，每隔１４天加强一次，共注射三次，末次免疫后两周收集血清，免疫小鼠诱导产生了特异性抗ＣＴＢ抗体。在ＣＨＯ细胞中，免疫小鼠血清能够中和ＣＴ的细胞病变效应；小鼠肠结扎实验表明，抗ＣＴＢ血清能够抑制ＣＴ结合细胞表面受体ＧＭ１神经节苷脂。这表明转基因烟草产ＣＴＢ在小鼠中能够产生抗细菌毒素的保护免疫力。

简介：活性氧（ROS）是生物体有氧代谢过程中产生的一类活性含氧化合物的总称,机体细胞可通过多种途径维持ROS产生与降解的动态平衡。研究表明,活性氧可作为第二信使调节与细胞增殖、分化、凋亡相关的信号转导通路。c-JunN端激酶（JNK）通路可以介导氧化应激、细胞因子、紫外照射等引起的细胞凋亡。另外,κ基因结合核因子（NF-κB）是氧化应激调节的靶因子之一,同样也能诱导促进细胞内的氧化应激反应,还可通过活性氧蓄积抑制JNK的激活。简要综述活性氧对NF-κB和JNK信号通路的调节。

简介：IKK复合物由IKKα、IKKβ和IKKγ组成，是NF-κB通路中的重要分子，主要调控NF-κB通路的活化。近年的研究发现，IKK复合物还存在许多NF-κB非相关性的功能，主要涉及肿瘤发生、应激反应、转录调控、免疫功能及细胞周期调控等方面。IKK复合物的NF-κB非相关性的功能研究集中于IKKα和IKKβ亚基，并且存在激酶活性依赖和非依赖2种作用方式。对于该功能的深入探讨，对全面理解IKK分子的生理病理功能十分重要，并且为IKK分子的研究提出了一个新的方向。

简介：目的：研究脂多糖（LPS）对人血清中补体系统的激活及在小鼠模型中诱导产生白三烯B4（LTB4）。方法：LPS包被ELISA板,利用血清中补体C4、C3沉积实验检测补体成分被LPS活化的情况,通过尾静脉注射小鼠LPS后不同时间点ELISA定量检测LTB4,评价补体系统的活化和炎症因子的产生。结果与结论：血清系统ELISA检测发现LPS可以激活补体系统,且以凝集素途径为主;动物实验中LTB4被LPS诱导后1～3h达到峰值,之后回落。C1INH对血清补体活化和动物模型中LTB4的产生均有显著抑制。

简介：柳树是东北平原地区重要的造林绿化树种,其被广泛应用于营造用材林、防护林及风景林。朝白B80柳是以朝鲜柳为母本、新疆白柳为父本经人工杂交育种方法选育出的柳树新品种,该品种具有速生、耐寒、耐干旱、耐水湿、抗烂皮病的特性,其10年生平均树高、胸径、材积生长量分别为12.37m、25.94cm、0.3495m3,分别为对照品种垂爆109柳的1.4、2.3、6.61倍,该品种是适宜在东北寒冷、干旱地区大力推广的乔木柳新品种。

简介：用原子力显微镜（AFM）观察线性DNA并探讨其成像条件。用RT-PCR技术扩增柯萨奇B1病毒VP1基因DNA片段，纯化回收后配制成含和不含1mmol/LMgCl2的水溶液，DNA终浓度为100μg/ml。分别取20μl滴加在新鲜解理的云母片上，吸收1min，用滤纸吸去残液，氮气吹干，在室温下采用MultiModeAFMNanoscopeⅢa的敲击模式成像。同时比较新制备和多次使用过的探析所获得图像的质量，对两种探针进行扫描电镜观察。电泳证明获得了0.83kb的VP1基因DNA线性片段，Mg^2+存在时，DNA在云母片上吸附延展较好，所获图像质量优于无Mg^2+时。新制备的探针较多次使用过的探针所获图像分辨率更高。DNA分子的表现宽度为18±2.9nm，高度为0.8±0.2nm。说明AFM能以高分辨率直接观察DNA分子，Mg^2+的存在和高质量的探针有助于获得理想的图象。

简介：克隆河南人免疫缺陷病毒(HIV)感染者HIV-1B型株tat基因完整编码框序列,并分析比较其编码产物的序列结构特点.使用重叠PCR技术,从河南省1名HIV-1感染者外周血标本中扩增出tat基因第一和第二外显子并重组为完整的tat基因序列.获得的HIV-1B病毒株tat基因,第一外显子为263bp,第二外显子为214bp.将该基因编码产物与其他HIV-1株Tat蛋白经DNA软件编辑并翻译成蛋白质,使用ClustalX1.81进行多序列对比分析发现,第一外显子编码产物的3个保守区域的氨基酸组成大致相同,只有少数氨基酸存在差异.由于Tat蛋白不同病毒株间有高度保守的Cys富集区、核心区和碱性氨基酸富集区,tat基因的克隆为研究其功能并以其为靶点设计和筛选抗艾滋病的药物奠定了基础.

简介：目的：分离羽衣甘蓝S13-b位点受体激酶（SRK13-b）基因并进行序列及结构域分析，构建SRK13-b结构域的原核表达载体并进行重组蛋白质的原核表达和纯化。方法：提取羽衣甘蓝S13-bS13-b自交不亲和系花期柱头的RNA，用RT-PCR法分离SRK13-b基因；将编码SRK13-b激酶结构域的序列插入大肠杆菌表达载体pET-14b中，构建原核表达质粒pET-SRK13-bCT，转化大肠杆菌BL21（DE3）pLysS菌株，经0．1mmol／LIPTG诱导，用Ni—NTA亲和层析柱对SRK13-b激酶结构域蛋白进行纯化。结果：分离获得羽衣甘蓝SRK13-b基因的长度为2571bp，编码856个氨基酸，GenBank收录号为EU180597；对SRK13-b激酶结构域蛋白进行诱导表达及纯化，SDS—PAGE显示相对分子质量约43×10^3的蛋白质特异表达，对表达产物进行分离纯化，获得了SRK13-b激酶结构域的融合蛋白。结论：羽衣甘蓝SRK13-b基因的克隆及激酶结构域的原核表达，为研究SRK的功能及自交不亲和性奠定了基础。

简介：大环内酯类抗生素基因工程是近年来生物工程领域研究的一个热点,利用基因工程改造大环内酯类抗生素合成基因,已经合成了100多种"非天然”的天然化合物,为筛选新抗生素开辟了新的途径.本研究以糖多孢红霉菌A226基因组DNA为模板,先用PCR扩增出红霉素合成基因eryKR6两侧片段,再用重叠PCR将其拼接成去除KR6的约3.2kbDNA片段,并克隆于pWHM3载体,构建了同源重组质粒pWHM2201.用PEG介导将pWHM2201转入糖多孢红霉菌A226原生质体.PCR鉴定和生物活性检测均显示pWHM2201已重组到红霉素合成基因位点.在无抗性R3M斜面上生长两代后,制备重组体原生质体,并涂R3M平皿.利用PCR筛选出KR6敲除的突变体糖多孢红霉菌M.

简介：HLA-B27阳性患者人群中,内质网氨基肽酶1（ERAP1）基因多态性与强直性脊柱炎（AS）密切相关。内质网中,ERAP1可有效剪切抗原肽,使其成为适合HLA-Ⅰ类分子提呈的寡肽。ERAP1基因多态性决定N端抗原肽修剪功能的正常与否以及HLA-B27分子的稳定表达。细胞水平的研究表明,不同ERAP1等位基因组合对于抗原肽底物的修剪能力决定了B27分子能否在细胞表面稳定表达。但是,功能型与功能异常型ERAP1如何影响HLA-B27抗原肽加工、B27稳定表达,以及如何影响AS疾病进程和免疫病理学改变等均未得到阐明。