简介：目的:构建人角质细胞生长因子2(KGF-2)基因真核表达载体,探索KGF-2的上皮细胞迁移功能。方法:以人乳腺cDNA文库为模板,PCR扩增KGF-2基因片段,将其插入pXJ-40-myc,经双酶切和测序验证后,将重组质粒转染HEK-293T细胞,采用Western印迹检测重组蛋白;转染人肠上皮细胞FHC,采用细胞划痕实验检测细胞迁移能力。结果:PCR扩增获得627bp的DNA产物,插入pXJ-40-myc载体,双酶切及测序结果证明重组质粒含有目的序列;转染HEK-293T细胞,Western印迹检测到相对分子质量约23×10^3的目的蛋白;细胞划痕实验显示,转染Myc-KGF-2的FHC细胞较未转染或转染空载体的细胞迁移能力强。结论:构建了人KGF-2基因真核表达载体,并验证了其促进细胞迁移的功能。

简介：为了解决专利申请前期专利文献检索过程新颖性和创造性的把握,本文设计了一种申请决策模型,模型通过拟申报专利主题的关键词、ICP分类号等方式结合,从原始专利数据库提取专利数据,将提取出的专利数据进行清洗后进行二次加工,用选定的数学统计模型对入选专利平均评分后,给予申请人或发明人明确的授权可能性评估结果。

简介：目的:建立适合于止痛透骨贴微生物限度检查的方法。方法:参照《中国药典》2010版一部微生物限度检查法验证试验的要求,采用中和-离心薄膜过滤法进行细菌数检查,采用平皿法进行霉菌和酵母菌数检查,采用直接接种法进行控制菌检查。结果:5种验证菌株的回收率均高于70%,控制菌检查经方法验证,可用直接接种法对金黄色葡萄球、铜绿假单胞菌、大肠菌群进行检查。结论:建立的方法准确可靠,适用于止痛透骨贴的微生物检查。

简介：前列腺癌鼠模型是研究前列腺癌的重要工具,目前常见以下4类：自发和诱发鼠模型,异种移植鼠模型,转基因鼠模型和基因敲除鼠模型。简要综述了前列腺癌鼠模型的研究进展。

简介：目的：构建应用于酵母双杂交系统的羽衣甘蓝柱头cDNA文库。方法：以羽衣甘蓝S13-bS13-b自交不亲和系为材料，提取柱头的总RNA，用亲和层析法分离纯化mRNA，利用CytoTrapXR建库试剂盒构建羽衣甘蓝柱头cDNA文库。结果：羽衣甘蓝柱头cDNA原始文库的库容量为2．5×10^5；扩增后文库的库容量约为4×10^8，重组率为96％，插入片段大小为0．4～3kb，平均长度在0．8kb左右。结论：构建了应用于酵母双杂交系统的羽衣甘蓝自交不亲和系柱头的cDNA文库，为探讨芸苔属植物自交不亲和的分子机理奠定了基础。

简介：目的：建立汉滩病毒感染的小鼠腹腔巨噬细胞模型。方法：PBS灌洗6-8周龄C57BL／6小鼠腹腔，分离获取小鼠腹腔巨噬细胞后，以100TCID50汉滩病毒76—118株感染小鼠腹腔巨噬细胞，通过间接免疫荧光、ELISA和Real-timePCR检测病毒感染情况。结果：病毒感染3d后，间接免疫荧光和ELISA检测到病毒核衣壳蛋白的表达，Real-timePCR检测到病毒核酸的表达。结论：建立了汉滩病毒感染小鼠腹腔巨噬细胞的模型，为进一步阐明汉滩病毒的发病机制奠定了基础。

简介：目的：Gankyrin作为一个新的癌基因,在细胞周期调控和肿瘤发生过程中有重要功能。建立Gankyrin过表达的细胞和动物模型,以便进一步研究其在肿瘤形成过程中的作用机制。方法：采用逆转录病毒感染细胞的方法构建Gankyrin稳定表达的细胞株,采用Western-blot检测Gankyrin的表达,采用软琼脂和裸鼠成瘤实验验证该细胞株的恶性转化效应。结果：构建了Gankyrin稳定过表达的NIH3T3细胞株,且该细胞株具有成瘤性。结论：采用逆转录病毒感染细胞的方法可以有效建立Gankyrin转化细胞株,为进一步研究Gankyrin的作用机制及其在肿瘤形成中的功能提供了基础。

简介：丙型肝炎病毒（HCV）是造成慢性肝炎，肝硬化及肝癌的重要原因之一，目前全球约有1.7亿人感染HCV。然而缺乏有效的HCV感染模型，严重阻碍了对HCV致病机制的认识。最近几年以JFH1株和Huh-7细胞系为基础，通过对不同病毒株基因组的重组和细胞系的优化，进一步提高其感染能力，在HCV感染系统的建立上取得了突破性进展。我们简要综述近几年在HCV感染细胞模型方面取得的进展。

简介：乙型肝炎病毒（HBV）感染严重影响人类的健康，感染HBV的慢性患者可引起肝硬化、肝细胞癌及肝功丧失等病症。开发有效的抗HBV药物，对于其感染的治疗非常关键。HBV具有非常窄的宿主范围，因此选择合适的药物评价用动物模型至关重要，常用的模型动物有鸭、土拔鼠、黑猩猩及近年研究的转基因小鼠等。

简介：目的：拼接DNA片段并克隆。方法：用T4DNA连接酶将DNA片段以平末端随机连接,随后用限制性内切酶切割,琼脂糖电泳分离酶切产物,挑选特定片段纯化回收,与线性化的载体质粒连接,转化大肠杆菌感受态细胞。结果：通过以上步骤,成功拼接了不同DNA片段,构建了含有目的拼接片段的重组质粒。结论：该方法简便、易行、可靠,可作为拼接、克隆DNA的备选方案,在分子生物学研究和基因工程中应用。

简介：本文结合本科毕业论文评价过程的相关特点,提出了层次分析法与德尔菲法相结合的综合评价模型。通过实例运用算得影响本科毕业论文的重要指标。

简介：据调查显示,自从2000年开始,中国就相继启动了一系列的卫生监督体系的改革,这些卫生监督体系的改革为中国的卫生行业的发展提供更多的发展机会,也是中国的卫生体系非常大的进步。而作为卫生监督体系中非常重要的组成部分,精神文化建设也取得了非常显著的成绩。近年来,随着中国卫生监督系统的逐渐完善,专家和学者将更多的精力放在卫生监督精神文化建设这一层面上,旨在形成一个较为系统并且较为完整的精神文化建设体系。现如今,随着新时期的到来,精神文化建设也取得了一定的成就,这对发展中国卫生监督系统有着非常重要的意义。

简介：根据Ｇｅｎｂａｎｋ中大肠杆菌嘌呤核苷磷酸化酶（ＰＮＰ）基因的核苷酸序列，设计并合成了一对引物，以大肠杆菌基因组ＤＮＡ为模板，进行ＰＣＲ扩增，并将扩增产物定向连接到克隆、测序及真核表达载体ＰＣＤＮＡ３中，进行酶切鉴定、测序及序列分析。结果表明ＰＣＲ扩增出７４１ｂｐ大小的片段，通过酶切和序列分析证明含完整的ＰＮＰ基因序列且基因插入方向正确，此序列与文献报道的ＰＮＰ基因的同源性为９９．７％。说明克隆的ＰＮＰ基因与文献报道的基本一致，ｐｃＤＮＡ３－ＰＮＰ的构建成功为今后用其进行基因转染来研究ＰＮＰ／Ｍｅｐ－ｄＲ自杀基因系统在肿瘤基因治疗中的应用打下了基础。

简介：由于现代化的发展,图书馆已投入到市场经济的竞争中,怎样构建图书馆的核心竞争力已成为图书馆将来生存和发展的关键。文章解释了图书馆核心竞争力的定义,目前图书馆核心竞争力的现况,并从资源、人才、管理理念、服务创新等几方面论述了图书馆核心竞争力的构建。

简介：目的：构建莱芜猪肝脏组织全长cDNA文库,以便研究与莱芜猪优良性状相关的基因。方法：采用改良的异硫氰酸酸胍一步法制备总RNA;利用SMART技术,以PrimeScript反转录酶逆转录合成第一链cDNA,通过LD-PCR扩增获得cDNA双链;经蛋白酶K消化和CHROMASPIN-400柱分级分离后,收集500bp以上的cDNA片段,并与pMD18-T载体连接,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,建成原始文库;随机挑取单菌落,用HindⅢ和EcoRⅠ进行双酶切鉴定重组子插入片段大小。结果：经鉴定,原始文库的滴度为2.8×105cfu/mL,重组率约为98%,插入片段大小为0.5～2kb,平均插入片段长度大于1kb。结论：建立的cDNA文库质量良好,可以用于目的基因的筛选。

简介：目的：构建天然免疫胞内识别受体核苷酸寡聚域1（NOD1）真核表达质粒。方法：NOD1基因片段经PCR扩增获得，经酶切后连接到真核表达载体pcDNA3／flag中，对挑选出的阳性克隆测序，将序列正确的重组质粒pnag—NOD1转染293T细胞，用Western印迹检测目的蛋白的表达，同时用NF-κB的萤光素酶报告基因检测NOD1蛋白的活性。结果：pflag-NOD1可以在真核细胞293T中表达，并可以增强NF-κB报告基因的转录活性。结论：构建了重组质粒pnag—NOD1，在细胞中表达NOD1后能够提高NF—κB转录的生物活性，为进一步研究NOD1的功能奠定了基础。

简介：目的：建立大鼠缇解一复发型实验性变态反应性脑脊髓炎（EAE）模型，进行病理学研究，为多发性硬化（MS）的研究提供依据。方法：呆用大鼠脊髓和弗氏完全佐剂混合乳剂一次性注入SD大鼠双足垫和尾部，1周后半剂量注射进行一次加强．诱导大鼠发生EAE；观察发病情况，HE染色观察病理变化，监牢兰染色观察脱髓鞘情况j结果：空白对照组大鼠均未出现症状，HE染色小脑及脊髓无炎性细胞浸润，监牢兰染色未见髓鞘脱失；模型组临床症状发生率为90％以上，HE染色可见小脑白质及脊髓血管周围有大量炎性细胞浸润，监牢兰染色发现有大片髓鞘脱落。结论：用SD大鼠脊髓髓鞘蛋白和弗氏完全佐利混合乳剂可诱导同种SD大鼠发生缓解一复发型EAE。

简介：目的：构建GFE-1多吠与重组人肿瘤坏死因子d（rmhTNF一仅）融合蛋白（GFE-1-rmhTNF），研究该融合蛋白的体外活性和体内分布。方法：利用基因工程方法，将人工合成的编码GFE—l的寡核苷酸片段连接在rmhTNF—d序列的3’端，转入大肠杆菌中诱导表达，采用Q—SepharoseFF阴离子层析柱和SP—SepharoseFF阳离子层析柱纯化蛋白，SDS—PAGE和Western印迹鉴定，测定该融合蛋白的体外活性，观察其在小鼠体内的分布情况。结果：构建了融合蛋白GFE-1-rmhTNF，并在大肠杆菌中获得高效表达。体外活性实验显示，GFE-1-rⅢhTNF对L929细胞有明显的杀伤活性；体内分布实验证实，GFE-I-rmhTNF在小鼠肺组织的富集远高于肝肾组织。结论：构建了融合蛋白GFE-1-rmhTNF．，可显著杀伤L929细胞并特异性富集于小鼠肺组织。

简介：目的:建立无线粒体DNA(mtDNA)的人肺腺癌ρ^0A549细胞系。方法:在含50ng/mL溴化乙锭(EB)、100μg/mL丙酮酸钠和50μg/mL尿嘧啶核苷的RPMI1640细胞培养基中传代培养A549细胞;用低剂量EB连续诱导培养35d后,采用光镜观察、TaqMan探针法实时荧光定量PCR(qPCR)和Western印迹鉴定无mtDNA的ρ^0A549细胞系;采用MTT法测定ρ^0A549细胞增殖曲线。结果:倒置显微镜下野生型ρ^+A549细胞为多角形,ρ^0A549细胞形态呈拉长枝状;qPCR结果显示,低剂量EB诱导35d的ρ^0A549细胞中无mtDNA的存在。Western印迹结果显示,ρ^+A549细胞中能表达核基因编码的线粒体蛋白SDHA和ATP5A,也能表达线粒体基因组编码的蛋白MT-COXI和MT-ATP6;ρ^0A549细胞中无MT-COXI和MT-ATP6蛋白表达,但核基因编码的SDHA和ATP5A蛋白能够正常表达。MTT结果显示,与ρ^+A549细胞相比,ρ^0A549细胞生长速度明显减慢,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:构建和鉴定了无mtDNA的人肺腺癌ρ^0A549细胞系,为后续探讨mtDNA缺失或突变与人肺腺癌发生之间的关系奠定了实验基础。

简介：目的：通过多点突变构建增强型青色荧光蛋白（ECFP）慢病毒表达载体。方法与结果：根据增强型绿色荧光蛋白（EGFP）和ECFP基因序列的差异设计3对引物,以pLentiLox3.7-EGFP为模板进行分段PCR扩增,再以分段PCR扩增产物为模板扩增出突变的ECFP基因片段,将其与载体连接,得到ECFP慢病毒表达载体pLentiLox3.7-ECFP,测序结果证实经过多点突变扩增的ECFP片段基因序列完全正确;磷酸钙介导pLentiLox3.7-ECFP在293T细胞中表达,48h后在荧光显微镜下观察到青色荧光蛋白。结论：通过多点突变的方法得到了ECFP慢病毒表达载体。