简介:摘要目的探讨miR-425-5p对脂多糖诱导的肠道L细胞胰升糖素样肽1(GLP-1)分泌的影响及其机制。方法采用脂多糖孵育肠道L细胞系GLUTag细胞,检测miR-425-5p和GLP-1的表达和分泌;采用MTT法测定细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡。采用实时定量PCR和Western印迹法检测miR-425-5p、磷酸酶和张力蛋白同源基因(PTEN)、胰升糖素原mRNA和蛋白的表达。通过检测TOP/FOP比率测定Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路的活性。采用双荧光素酶报告基因实验和染色质免疫共沉淀(ChIP)明确miR-425-5p与PTEN、β-catenin之间的相互作用。结果在GLUTag细胞中,随着脂多糖浓度的升高,miR-425-5p表达增加,活性GLP-1水平降低,细胞凋亡增加,细胞活力下降;而且miR-425-5p参与脂多糖对GLP-1表达和肠道L细胞活力的调节作用。抑制miR-425-5p可降低胰升糖素原mRNA表达和TOP/FOP比率,提高PTEN蛋白水平,抑制细胞活力。在脂多糖诱导下,miR-425-5p通过靶向PTEN上调β-catenin的表达水平,而β-catenin作为顺式作用元件诱导胰升糖素原的转录,进而促进GLP-1的表达。结论在脂多糖诱导的肠道L细胞中,miR-425-5p通过靶向PTEN调控β-catenin水平进而促进GLP-1的分泌。