简介:摘要目的探讨脂多糖(LPS)促进肠道L细胞miR-425-5p表达的机制。方法将肠道L细胞系GLUTag细胞分为对照(NC)组、LPS组(LPS 200 ng/ml培养24 h)、小干扰RNA(siRNA)NC组(LPS 200 ng/ml培养24 h后转染siRNA NC)和NF-κB siRNA组[LPS 200 ng/ml培养24 h后转染核因子-κB(NF-κB)siRNA],每组3个复孔。采用Western blotting检测细胞核及细胞质中NF-κB p65蛋白表达水平,实时荧光定量聚合酶链反应检测miR-425-5p表达水平,酶联免疫吸附测定法检测胰高糖素样肽-1(GLP-1)的分泌水平。采用Promo软件分析预测miR-425-5p启动子上NF-κB的潜在结合位点,双荧光素酶报告实验检测miR-425-5p启动子区域结合位点的相对活性,染色质免疫沉淀反应验证NF-κB与miR-425-5p之间的相互作用。两组之间比较采用独立样本t检验,多组之间比较采用单因素方差分析。结果与对照组相比,LPS组的GLP-1分泌水平显著下降(P<0.01),miR-425-5p表达水平显著升高(P<0.01)、细胞质和细胞核中NF-κB p65蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。与siRNA NC组相比,NF-κB siRNA组细胞核及细胞质中NF-κB p65的蛋白表达水平、miR-425-5p表达水平均明显下降(P<0.01)。LPS诱导下,含有两个结合位点(2-Luc/3-Luc)的miR-425-5p启动子活性明显高于含有单独的结合位点(3-Luc),差异具有统计学意义(P<0.01);NF-κB与miR-425-5p基因启动子序列结合位点2的结合能力最强(P<0.01)。结论LPS通过活化NF-κB,促进其与miR-425-5p基因启动子序列的结合位点2结合,进而促进肠道L细胞miR-425-5p转录,最终调节肠道L细胞GLP-1分泌。
简介:摘要目的探讨miR-425-5p对脂多糖诱导的肠道L细胞胰升糖素样肽1(GLP-1)分泌的影响及其机制。方法采用脂多糖孵育肠道L细胞系GLUTag细胞,检测miR-425-5p和GLP-1的表达和分泌;采用MTT法测定细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡。采用实时定量PCR和Western印迹法检测miR-425-5p、磷酸酶和张力蛋白同源基因(PTEN)、胰升糖素原mRNA和蛋白的表达。通过检测TOP/FOP比率测定Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路的活性。采用双荧光素酶报告基因实验和染色质免疫共沉淀(ChIP)明确miR-425-5p与PTEN、β-catenin之间的相互作用。结果在GLUTag细胞中,随着脂多糖浓度的升高,miR-425-5p表达增加,活性GLP-1水平降低,细胞凋亡增加,细胞活力下降;而且miR-425-5p参与脂多糖对GLP-1表达和肠道L细胞活力的调节作用。抑制miR-425-5p可降低胰升糖素原mRNA表达和TOP/FOP比率,提高PTEN蛋白水平,抑制细胞活力。在脂多糖诱导下,miR-425-5p通过靶向PTEN上调β-catenin的表达水平,而β-catenin作为顺式作用元件诱导胰升糖素原的转录,进而促进GLP-1的表达。结论在脂多糖诱导的肠道L细胞中,miR-425-5p通过靶向PTEN调控β-catenin水平进而促进GLP-1的分泌。
简介:摘要:目的:针对妊娠患者应用循证护理干预,研究其临床应用价值。方法:选择我院收治的68例妊娠患者,时间范围为2022年5月至2024年5月。采用随机数字表法分为实验组与参照组,实验组34例,参照组34例,参照组实施常规护理,实验组实施循证护理干预,比较两组孕妇的护理满意度和心理状态。结果:(1)与参照组比较,实验组孕妇护理满意度明显增加,统计学差异显著(P<0.05)。(2)护理后两组孕妇的焦虑和抑郁情绪均得到明显缓解,实验组孕妇的焦虑和抑郁情绪缓解程度明显优于参照组(P<0.05)。结论:对妊娠患者应用循证护理干预能够明显提高孕妇的护理满意度,缓解孕妇的焦虑和抑郁情绪,具有临床推广应用价值。