简介：摘要目的探讨小鼠炎症创面组织匀浆体外模拟创面炎症微环境的可行性。方法(1)取10只8周龄C57BL/6雄性小鼠，在背部中线两侧用打孔器各取直径1.0 cm的圆形全层皮肤组织，制作正常皮肤组织匀浆上清液。形成全层皮肤缺损创面48 h后，取距创缘2 mm内创面组织，制作炎症创面组织匀浆上清液。取2种组织匀浆上清液，调整总蛋白质量浓度为1 mg/mL，酶联免疫吸附测定法检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量，样本数为6。(2)取原代人脐带间充质干细胞(hUCMSC)并培养至第3代，培养48 h后提取正常外泌体。另外取第3代hUCMSC，分别加入总蛋白质量浓度为30、50、100 μg/mL正常皮肤组织匀浆上清液和炎症创面组织匀浆上清液，培养48 h后，提取30、50、100 μg/mL正常蛋白刺激外泌体和30、50、100 μg/mL炎症蛋白刺激外泌体。取正常外泌体、30 μg/mL正常蛋白刺激外泌体和30 μg/mL炎症蛋白刺激外泌体，透射电子显微镜下观察外泌体形态，纳米颗粒跟踪分析仪检测外泌体粒径，蛋白质印迹法检测CD9和CD63表达。(3)取1 d龄C57BL/6小鼠乳鼠20只，分离培养原代成纤维细胞(Fb)和第3代Fb，倒置相差显微镜下观察细胞形态。取第3代Fb，培养2 h，利用细胞爬片法结合免疫荧光法观察波形蛋白的表达。(4)取第3代Fb，按随机数字表法分为对照组，正常外泌体组，30、50、100 μg/mL正常蛋白刺激外泌体组及30、50、100 μg/mL炎症蛋白刺激外泌体组，每组4孔。对照组不进行任何处理，其余7组依次加入实验(2)中制备的正常外泌体，30、50、100 μg/mL正常蛋白刺激外泌体和30、50、100 μg/mL炎症蛋白刺激外泌体，并调整外泌体终质量浓度为10 μg/mL。培养48 h，采用细胞计数试剂盒8法检测8组细胞活力。(5)取2个批次第3代Fb，同实验(4)进行分组及处理，每组4孔，并分别调整外泌体终质量浓度为1、10 μg/mL，采用细胞划痕试验检测培养6、12、24 h细胞迁移率。(6)取2个批次第3代Fb，同实验(4)进行分组及处理，但不设置对照组，每组3孔，并调整外泌体终质量浓度为1、10 μg/mL，实时荧光定量反转录PCR法检测培养48 h转化生长因子β1(TGF-β1)、TGF-β3、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的mRNA表达。对数据行重复测量方差分析、单因素方差分析及Bonferroni法。结果(1)伤后48 h，小鼠炎症创面组织匀浆上清液中TNF-α含量为(116±3)pg/mL，显著高于正常皮肤组织匀浆上清液的(97±5)pg/mL，t＝3.306，P<0.05。(2)hUCMSC正常外泌体、30 μg/mL正常蛋白刺激外泌体、30 μg/mL炎症蛋白刺激外泌体均呈典型茶托样；3种hUCMSC外泌体粒径为30～150 nm，均在外泌体正常粒径范围内；3种hUCMSC外泌体CD9和CD63均呈阳性表达。(3)原代细胞轮廓清晰，呈突起的纺锤形、不规则多角形或细长条状；第3代细胞形态与原代细胞相近。培养2 h，细胞中波形蛋白呈阳性表达，细胞鉴定为Fb。(4)培养48 h，30 μg/mL炎症蛋白刺激外泌体组细胞活力为(137.4±2.8)%，明显高于对照组的100%、正常外泌体组的(107.5±2.4)%、30 μg/mL正常蛋白刺激外泌体组的(113.3±3.2)%及50、100 μg/mL炎症蛋白刺激外泌体组的(104.0±2.0)%、(101.9±1.5)%，P<0.01, 30 μg/mL正常蛋白刺激外泌体组细胞活力明显高于对照组、正常外泌体组及50、100 μg/mL正常蛋白刺激外泌体组[(103.4±2.2)%、(102.5±1.4)%]，P<0.01。(5)外泌体终质量浓度为1 μg/mL时，培养6、12、24 h，30 μg/mL炎症蛋白刺激外泌体组细胞迁移率明显高于对照组、正常外泌体组、30 μg/mL正常蛋白刺激外泌体组及50、100 μg/mL炎症蛋白刺激外泌体组(P<0.05)；培养12 h，30 μg/mL正常蛋白刺激外泌体组细胞迁移率明显高于对照组、正常外泌体组以及50、100 μg/mL正常蛋白刺激外泌体组(P<0.05)。外泌体终质量浓度10 μg/mL时，培养6 h，30 μg/mL炎症蛋白刺激外泌体组细胞迁移率明显高于对照组、正常外泌体组(P<0.05)；30 μg/mL正常蛋白刺激外泌体组细胞迁移率明显高于50、100 μg/mL正常蛋白刺激外泌体组(P<0.05)。培养12、24 h，30 μg/mL炎症蛋白刺激外泌体组细胞迁移率明显高于对照组、正常外泌体组及50、100 μg/mL炎症蛋白刺激外泌体组(P<0.05)；30 μg/mL正常蛋白刺激外泌体组细胞迁移率明显高于对照组、正常外泌体组及50、100 μg/mL正常蛋白刺激外泌体组(P<0.05)。(6)外泌体终质量浓度1 μg/mL时，7组细胞培养48 h TGF-β1、TGF-β3、α-SMA mRNA表达量组间总体比较，差异无统计学意义(F＝1.123、1.537、1.653，P>0.05)。外泌体终质量浓度为10 μg/mL时，培养48 h，7组细胞TGF-β1、α-SMA mRNA表达量组间总体比较，差异无统计学意义(F＝1.487、1.308，P>0.05)。50 μg/mL炎症蛋白刺激外泌体组细胞培养48 h TGF-β3 mRNA表达量明显高于正常外泌体组、50 μg/mL正常蛋白刺激外泌体组及30、100 μg/mL炎症蛋白刺激外泌体组(P<0.05)。结论小鼠炎症创面组织匀浆上清液预处理对hUCMSC外泌体的总蛋白含量无影响，低浓度炎症创面组织匀浆上清液刺激所得的hUCMSC外泌体能够上调Fb的增殖和迁移能力，但炎症创面组织匀浆上清液中的炎症介质含量过低，不足以有效启动间充质干细胞抗炎及组织修复旁分泌效应。

简介：摘要目的探讨旋股外侧动脉分叶皮瓣修复下肢复杂创面的临床疗效。方法采用回顾性病例系列研究分析2018年9月至2020年9月遵义医科大学附属医院收治的25例下肢复杂创面患者临床资料，其中男18例，女7例；年龄18～69岁［（42.2 ± 3.7）岁］。创面位于小腿7例，足踝部7例，足背11例。单处宽大不规则创面15例，缺损面积10 cm × 9 cm～18 cm × 12 cm；2～3处创面10例，每处缺损面积4 cm × 3 cm～12 cm × 5 cm。均采用旋股外侧动脉分叶皮瓣修复创面，皮瓣供区均直接闭合。末次随访时，观察皮瓣外观与质地、供区瘢痕形成情况及患肢行走情况；术后1个月及末次随访时采用英国医学研究会（BMRC）分级与温哥华瘢痕量表（VSS）评分评估皮瓣感觉功能恢复与供区瘢痕形成情况。结果患者均获随访 7～30个月［（12.1 ± 1.8）个月］。末次随访时，皮瓣外形良好，质地柔软，供区仅残留线性瘢痕，患肢可以正常行走。末次随访时BMRC分级S3、S4级为23例，高于术后1个月的0例（P < 0.01）；VSS评分为4～8分［（6.0 ± 1.3）分］，低于术后1个月的7～13分［（9.9 ± 1.6）分］（P < 0.01）。结论旋股外侧动脉分叶皮瓣修复下肢复杂创面，皮瓣外形、质地及感觉功能恢复良好，供区仅留线性瘢痕。

简介：摘要目的探讨股前外侧嵌合穿支皮瓣对糖尿病足溃疡（DFU）创面修复的临床疗效。方法2018年1月至2019年12月,共收治14例II型糖尿病足部溃疡,男10例,女4例,年龄49~58岁。其中单纯周围神经病变10例,周围神经病变合并血管病变4例,无单独血管病变患者。在严格控制患者血糖的基础上,对Wagner 2级以上DFU进行清创后抗生素骨水泥覆盖或填充,2~3周后采用股前外侧嵌合穿支皮瓣移植修复,皮瓣大小8 cm×3 cm~27 cm×7 cm。术后定期随访。结果术后13块皮瓣一期成活,1块发生静脉危象,积极探查后皮瓣完全成活。随访6~12个月,供区和受区愈合良好,皮瓣外形好,质地佳,功能恢复满意。结论股前外侧嵌合穿支皮瓣可修复DFU创面,临床效果良好,能有效改善患者生存质量。

简介：摘要创面愈合是多种类型细胞、细胞因子及细胞外基质相互作用的动态过程，其中上皮细胞和间充质细胞是参与创面愈合和瘢痕形成的主要细胞。相关学者分别对创面愈合和瘢痕形成过程中上皮细胞和成纤维细胞(Fb)的作用进行了大量研究，结果显示上皮细胞在创面复杂的微环境刺激下会失去其上皮特征并获得间充质细胞典型特征及迁移能力，同时伴随细胞结构和细胞行为等的复杂改变，进而通过细胞迁移覆盖创面，参与组织创伤修复过程，包括正常或纤维化修复。而Fb是创面纤维化修复的关键细胞，在创面愈合包括创面过度愈合和延迟愈合中均发挥重要作用。近年来研究者们认识到上皮细胞与Fb在创面愈合过程中的信息交流，即上皮-间充质相互作用，明显影响着这2种细胞的生物学行为，决定着真皮重塑和创面再上皮化的质量。上皮-间充质相互作用在胚胎发育期皮肤的形态发生和维持成人皮肤的结构完整中发挥重要作用。在创面愈合再上皮化过程中，Fb能够促进角质形成细胞(KC)增殖和迁移，同时KC接受来自Fb的信号以重建功能性的上皮，相关研究已成为目前创面愈合领域的研究热点。本文就近年来国内外有关上皮-间充质相互作用在创面愈合和瘢痕形成中的相关文献进行综合分析，供相关学者参考。

简介：摘要目的探讨改良掌背动脉皮支筋膜蒂皮瓣修复手指近、中节创面的临床效果。方法2017年1月—2018年9月，遵义医科大学附属医院收治12例手指近、中节创面患者，其中男8例、女4例，年龄35～70岁，创面面积为3.4 cm×2.4 cm～6.5 cm×4.0 cm。采用改良掌背动脉皮支筋膜蒂皮瓣修复创面，皮瓣切取面积为3.5 cm×2.5 cm～6.7 cm×4.1 cm。5例患者皮瓣供区直接间断缝合，4例患者皮瓣供区取同侧前臂内侧全厚皮片修复，3例患者皮瓣供区采用腕部带蒂皮瓣修复。记录皮瓣存活情况，随访观察供受区恢复情况，采用中华医学会手外科学会上肢部分功能评定试用标准评定手功能。结果12例患者皮瓣全部成活。随访3～12个月，皮瓣质地、外形恢复较佳，11例患者供区愈合；1例患者供区植皮边缘区域部分坏死，经换药后愈合。本组患者皮瓣两点辨别觉距离为5.6～9.0 mm，手功能评定为优5例、良4例、中3例。结论改良掌背动脉皮支筋膜蒂皮瓣修复手指近、中节创面血运可靠，手术操作简便、安全，疗程短，值得临床推广。

简介：摘要目的探讨人羊膜间充质干细胞(hAMSC)在体内外对小鼠全层皮肤缺损创面巨噬细胞表型的调控及对创面愈合相关炎症因子的影响。方法(1)取遵义医科大学附属医院妇产科5名足月分娩健康孕妇产后弃用的新鲜羊膜，酶消化法分离纯化培养hAMSC，取第3代细胞，经成骨、成脂诱导分化鉴定；取第4代细胞，经hAMSC表面标志物鉴定。取10只C57BL/6小鼠(均为雄性，6～8周龄，性别、鼠龄下同)，腹腔灌洗法提取小鼠腹腔巨噬细胞，用含γ干扰素的DMEM培养基培养诱导制备M1型巨噬细胞。将M1型巨噬细胞分为hAMSC＋巨噬细胞组及单纯巨噬细胞组。hAMSC＋巨噬细胞组每孔巨噬细胞加入1×104个第4代hAMSC后加入DMEM培养基2 mL，常规培养；单纯巨噬细胞组每孔巨噬细胞仅加入2 mL DMEM培养基常规培养。于培养1、7 d，酶联免疫吸附测定法检测2组细胞培养上清液中白细胞介素12(IL－12)、精氨酸酶1及IL－10含量(样本数为6)。(2)取56只C57BL/6小鼠，建立背部全层皮肤缺损创面模型，按随机数字表法分为hAMSC组和磷酸盐缓冲液(PBS)组，每组28只。hAMSC组小鼠于创周皮下注射100 μL采用PBS悬浮的含1×107个/mL hAMSC的细胞悬液，PBS组小鼠创周仅注射100 μL PBS。于注射后1、3、7、14 d，2组分别取7只小鼠，处死后行苏木精－伊红染色组织病理学观察，免疫荧光染色检测创面巨噬细胞表面标志物[CD68与诱导型一氧化氮合酶(iNOS)双阳性、CD68与精氨酸酶1双阳性]表达，实时荧光定量反转录PCR检测创面IL－10、巨噬细胞炎症蛋白1α(MIP－1α)、MIP－2的mRNA表达。对数据行析因设计方差分析、t检验、Bonferroni校正。结果(1)培养1 d，2组细胞培养上清液中IL－12、精氨酸酶1含量相近(t＝0.448、0.536，P>0.05)，hAMSC＋巨噬细胞组细胞培养上清液中IL－10含量明显低于单纯巨噬细胞组(t＝14.722，P<0.01)。培养7 d，hAMSC＋巨噬细胞组细胞培养上清液中IL－12含量明显低于单纯巨噬细胞组(t＝13.226，P<0.01)，精氨酸酶1和IL－10含量明显高于单纯巨噬细胞组(t＝30.172、31.406，P<0.01)。(2)注射后1 d，2组小鼠创面均有大量炎性细胞浸润；注射后3 d，2组小鼠创面炎性细胞浸润均增多，hAMSC组炎性细胞浸润较PBS组少；注射后7 d，2组小鼠创面炎性细胞浸润均减少，hAMSC组炎性细胞浸润较PBS组少；注射后14 d，2组小鼠创面均未见明显炎性细胞浸润。(3)注射后1、14 d，2组小鼠创面CD68与iNOS双阳性细胞百分比、CD68与精氨酸酶1双阳性细胞百分比相近(t1 d＝0.134、0.693，t14 d＝1.146、2.585，P>0.05)；注射后3、7 d，hAMSC组小鼠创面CD68与iNOS双阳性细胞百分比明显低于PBS组(t＝6.396、4.787，P<0.01)，CD68与精氨酸酶1双阳性细胞百分比明显高于PBS组(t＝3.928、4.473，P<0.01)。(4)注射后1 d，2组小鼠创面IL－10的mRNA表达相近(t＝2.005，P>0.05)；注射后3、7、14 d，hAMSC组小鼠创面IL－10的mRNA表达明显高于PBS组(t＝7.758、124.355、80.823，P<0.01)。注射后1、3、7、14 d，hAMSC组小鼠创面MIP－1α和MIP－2的mRNA表达(0.341±0.212、0.648±0.004、0.611±0.106、0.763±0.049，1.377±0.099、1.841±0.042、1.181±0.035、0.553±0.028)均明显低于PBS组(3.853±0.035、6.914±0.163、3.648±0.113、2.250±0.046，11.119±0.495、8.634±0.092、5.722±0.021、4.862±0.036，t＝43.198、101.904、51.845、58.231，51.074、177.501、291.752、251.614，P<0.01)。结论hAMSC具有促进小鼠全层皮肤缺损创面M1型巨噬细胞向M2型巨噬细胞转化的生物学效应；可以上调抗炎及抗纤维化因子IL－10的表达，下调重要的炎症反应介导因子MIP－1α和MIP－2的表达。

简介：摘要目的探讨二纵三横法在胸背动脉穿支皮瓣穿支定位及深度创面修复中的临床应用价值。方法采用回顾性观察性研究方法。2018年12月—2020年6月，遵义医科大学附属医院收治17例符合入选标准的深度创面患者，其中男7例、女10例，年龄12~72岁。清创后创面面积为7 cm×3 cm~11 cm×7 cm。通过腋窝中点、髂后上棘和骶髂关节突出点定位2条纵线，在2条纵线间通过腋窝中点下5、10、15 cm定位3条横线（即二纵三横法），从而形成2个梯形区域，再使用便携式多普勒血流探测仪在2个梯形区域内探寻胸背动脉穿支，以此设计并切取单个、分叶或携带部分背阔肌的面积为7 cm×4 cm~12 cm×8 cm的游离胸背动脉穿支皮瓣修复创面。供区均直接缝合。记录术前定位与术中探查胸背动脉穿支数量、位置及第1穿支（距离腋窝顶点最近的穿支）穿出肌肉的位置距离背阔肌外侧缘的长度，术中测量的胸背动脉穿支管径，采用的组织瓣类型；术后随访组织瓣成活情况与供区外观。结果每例患者术前定位胸背动脉穿支数量、位置与术中探查情况一致，穿支数量为2条或3条（共42条）；穿支均位于2个梯形区域内，在第1个梯形区域中均定位和探查到1条稳定的穿支（第1穿支），第2个梯形区域的平均穿支数量为1.47条；第1穿支穿出肌肉的位置距离背阔肌外侧缘2.1~3.1 cm。术中测量的胸背动脉穿支管径为0.4~0.6 mm。本组患者中12例采用单个胸背动脉穿支皮瓣、3例采用胸背动脉穿支分叶皮瓣、2例采用携带部分背阔肌的胸背动脉穿支皮瓣。术后随访6~16个月，17例患者组织瓣均成活，质地柔软、弹性好、血运良好；供区仅遗留线性瘢痕。结论二纵三横法有助于胸背动脉穿支皮瓣的穿支定位，方法简单可靠，基于该方法设计切取的胸背动脉穿支皮瓣修复深度创面的临床效果良好，供区损伤小。

简介：摘要目的观察股前外侧肌瓣与穿支皮瓣游离移植修复眼眶肿瘤扩大眶内容物摘除术后巨大创面的疗效。方法回顾性病例系列研究。纳入2017年2月至2021年4月遵义医科大学附属医院烧伤整形外科收治的眼眶肿瘤12例患者临床资料，其中男性4例、女性8例，年龄48~87岁；皮肤鳞状细胞癌9例，基底细胞癌3例；患者均行肿瘤扩大切除、眶内容物摘除术及创面修复。所有患者均手术彻底切除眼眶病灶，一期切取股前外侧肌瓣与穿支皮瓣组成的股前外侧嵌合皮瓣修复创面，皮瓣供区采用减张缝合关闭，总结术中切除病灶遗留皮肤缺损面积、创腔深度、术中切取皮瓣面积、肌瓣面积，观察术后皮瓣成活情况、伤口愈合情况、术区外观，皮瓣颜色、厚度、质地，术区瘢痕、感觉及肿瘤是否复发。结果12例患者手术均顺利完成，术中切除病灶遗留皮肤缺损面积为7.0 cm×5.0 cm~15.0 cm×8.0 cm，创腔深度为4.0~5.0 cm，术中切取皮瓣面积为7.0 cm×5.0 cm~19.0 cm×8.0 cm，肌瓣面积为4.0 cm×3.0 cm~5.0 cm×4.0 cm。12例患者术后皮瓣均完全成活，伤口均一期愈合，受区术后5~7 d拆线，供区术后12~14 d拆线。患者术后均获随访，随访时间3~30个月，眶周术区外观满意，瘢痕隐蔽，皮瓣颜色、厚度、质地与周围健康皮肤接近；皮瓣供区外观功能满意，无明显增生瘢痕，仅瘢痕周围局部皮肤存在小面积皮肤感觉减退，随访期间患者均无肿瘤复发。结论股前外侧肌瓣与穿支皮瓣修复眼眶肿瘤扩大眶内容物摘除术后巨大创面的疗效较好。