简介：摘要目的制备一种新的靶向CD19的三特异性T细胞衔接器融合蛋白（19TriTE），研究其对CD19阳性血液肿瘤的免疫治疗作用。方法通过分子克隆技术构建19TriTE表达质粒，并通过真核蛋白表达系统成功表达该融合蛋白。体外实验验证19TriTE对T细胞的活化与增殖作用及介导T细胞发挥对CD19阳性肿瘤细胞的特异性细胞毒作用。结果①成功构建19TriTE融合蛋白表达质粒，并通过真核蛋白表达系统成功表达。②19TriTE可以特异性结合T细胞和Nalm6细胞，与T细胞的平衡解离常数为19.21 nmol/L，与Nalm6细胞的平衡解离常数为11.67 nmol/L。③2 nmol/L浓度的19TriTE与T细胞及Nalm6细胞共培养时，T细胞中CD69阳性表达率为35.4%，CD25阳性表达率为49.8%，较对照组显著升高。④19TriTE在浓度为1 nmol/L时即可显著促进T细胞增殖，第12天时，T细胞绝对计数由初始1×106扩增至7.4×107，增殖74倍。⑤19TriTE融合蛋白能明显介导T细胞杀伤CD19阳性靶细胞且与剂量呈正相关，浓度为10 nmol/L时，靶细胞裂解率达50%。⑥脱颗粒实验验证，CD19阳性靶细胞存在时，19TriTE可以显著激活T细胞且与剂量呈正相关。⑦将19TriTE融合蛋白分别与过表达RFP及Luciferase基因的靶细胞及T细胞共培养，19TriTE能够介导T细胞杀伤CD19阳性的靶细胞。结论本研究成功构建及表达19TriTE融合蛋白，体外实验验证其可以有效活化T细胞，并促进T细胞增殖。同时，能够结合CD19阳性靶细胞和T细胞，促进T细胞发挥体外抗白血病作用，为进一步临床研究奠定基础。

简介：摘要目的制备一种新的靶向CD19的三特异性T细胞衔接器融合蛋白（19TriTE），研究其对CD19阳性血液肿瘤的免疫治疗作用。方法通过分子克隆技术构建19TriTE表达质粒，并通过真核蛋白表达系统成功表达该融合蛋白。体外实验验证19TriTE对T细胞的活化与增殖作用及介导T细胞发挥对CD19阳性肿瘤细胞的特异性细胞毒作用。结果①成功构建19TriTE融合蛋白表达质粒，并通过真核蛋白表达系统成功表达。②19TriTE可以特异性结合T细胞和Nalm6细胞，与T细胞的平衡解离常数为19.21 nmol/L，与Nalm6细胞的平衡解离常数为11.67 nmol/L。③2 nmol/L浓度的19TriTE与T细胞及Nalm6细胞共培养时，T细胞中CD69阳性表达率为35.4%，CD25阳性表达率为49.8%，较对照组显著升高。④19TriTE在浓度为1 nmol/L时即可显著促进T细胞增殖，第12天时，T细胞绝对计数由初始1×106扩增至7.4×107，增殖74倍。⑤19TriTE融合蛋白能明显介导T细胞杀伤CD19阳性靶细胞且与剂量呈正相关，浓度为10 nmol/L时，靶细胞裂解率达50%。⑥脱颗粒实验验证，CD19阳性靶细胞存在时，19TriTE可以显著激活T细胞且与剂量呈正相关。⑦将19TriTE融合蛋白分别与过表达RFP及Luciferase基因的靶细胞及T细胞共培养，19TriTE能够介导T细胞杀伤CD19阳性的靶细胞。结论本研究成功构建及表达19TriTE融合蛋白，体外实验验证其可以有效活化T细胞，并促进T细胞增殖。同时，能够结合CD19阳性靶细胞和T细胞，促进T细胞发挥体外抗白血病作用，为进一步临床研究奠定基础。