简介：摘要目的研究瘦素与胆道闭锁患儿肝纤维化的关系及其在胆道闭锁肝纤维化中的作用，为胆道闭锁患儿的治疗提供依据。方法回顾性分析2019年8月至2021年8月在天津市儿童医院普外科手术的胆道闭锁或先天性胆总管扩张症(CBD)患儿的临床资料。共纳入31例患儿，其中男性14例，女性17例，中位年龄[60(30，63)]d。胆道闭锁患儿26例作为研究组，CBD患儿5例作为对照组。免疫组织化学检测肝组织中瘦素蛋白、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)以及磷酸化细胞外信号调节激酶1/2(p-ERK1/2)蛋白的表达情况。实时定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测肝组织中瘦素mRNA表达水平。结果研究组患儿肝组织中瘦素蛋白、α-SMA蛋白、p-ERK1/2蛋白的平均光密度值均高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。瘦素、α-SMA以及p-ERK1/2在胆道闭锁患儿肝组织中的表达水平随纤维化程度的增加均同步升高，差异具有统计学意义(P<0.05)。瘦素在胆道闭锁患儿肝组织中表达水平与肝纤维化分级(rs＝0.876)、α-SMA(r＝0.723)和p-ERK1/2(r＝0.725)均呈正相关(P<0.01)。qRT-PCR结果表明，胆道闭锁患儿肝组织中瘦素mRNA的含量高于CBD患儿，差异具有统计学意义(P<0.05)。结论瘦素的表达水平随着胆道闭锁肝纤维化程度的加重而升高。在胆道闭锁肝纤维化过程中，瘦素可能通过ERK1/2信号通路参与了HSCs活化。

简介：摘要目的探索表皮生长因子（epidermal growth factor，EGF）对胆管上皮细胞增殖和上皮间充质转化（epithelial mesenchymal transition，EMT）的作用，为胆道闭锁（biliary atresia, BA）肝纤维化的发生机制和治疗方向提供实验依据。方法收集2019年1月至2020年1月就诊的28例BA和9例胆总管囊肿患儿的肝组织样本，分别作为BA肝脏组和对照肝脏组；收集28例中20例BA患儿的血清，并收集5例胆汁淤积患儿和20例年龄匹配健康体检婴幼儿的血清，分别作为BA血清组、疾病对照血清组和正常对照血清组。通过CK19和N-cadherin免疫组织化学检测肝组织胆管增生和EMT情况；通过酶联免疫吸附试验（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）检测血清EGF的表达水平；进行体外人肝内胆管上皮细胞系（human intrahepatic biliary epithelial cell，HIBEpiC）培养，检测经EGF干预后细胞增殖和EMT的变化。结果较对照肝脏组，BA肝脏组中胆管增生显著，差异具有统计学意义（P<0. 001），胆管增生程度与肝纤维化程度正相关，增生的小胆管可分泌大量间质细胞成分。BA血清组EGF表达水平显著高于正常对照血清组，差异具有统计学意义（P<0. 001），BA肝脏组EGF mRNA水平显著高于对照肝脏组，差异具有统计学意义（P<0. 001），血清和肝组织EGF水平与肝纤维化程度相关。EGF可明显促进体外胆管上皮细胞增殖，EGF可诱导体外胆管上皮细胞发生EMT。结论EGF在BA中高表达，是促进肝内胆管上皮细胞增殖与EMT的重要诱导因子，其在BA肝纤维化进程中起重要作用。

简介：摘要目的本实验旨在进一步验证与评价M2BP与M2BPGi在胆道闭锁（biliary atresia，BA）患儿肝纤维化中的作用。方法收集2019年9月至2020年11月天津市儿童医院普外科收治的48例行肝相关手术的患儿肝组织标本，患儿按疾病类型分为实验组（BA组）35例，其中男17例，女18例，年龄为60(30, 60) d；对照组（DC组）13例，其中男7例，女6例，年龄为120(60, 720) d。DC组中包括2例胆汁淤积，7例胆总管囊肿（choledochal cyst，CC），4例胆管发育不良（biliary hypoplasia，BH）。通过免疫组织化学检测肝组织中M2BP蛋白含量，分析其与肝组织纤维化分级的相关性；通过实时荧光定量聚合酶链反应（real-time reverse transcription polymerase chain reaction，qRT-PCR），检测肝组织中M2BP mRNA含量，分析其转录、翻译水平是否表达一致。另收集患儿中26例BA、4例BH的血清，检测患儿肝功能相关的生化指标，采用酶联免疫吸附测定（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）检测其血清M2BPGi浓度。患儿组间比较采用Mann-Whitney U秩和检验；用Spearman相关分析评价M2BP及M2BPGi水平与肝纤维化分级的相关性，建立ROC曲线评价血清M2BPGi浓度在肝纤维化中的作用。结果①免疫组织化学结果显示，M2BP表达于肝细胞、巨噬细胞胞质内；BA组患儿肝组织中M2BP蛋白的含量为0.187(0.116, 0.222），高于DC组的0.122(0.072, 0.141），组间比较，差异有统计学意义（P=0.004）；肝组织中M2BPGi的含量与肝纤维化分级存在正相关（rs=0.847，P< 0.001）。②qRT-PCR结果显示，BA组患儿肝组织中M2BP mRNA水平为0.099(0.059, 0.138），高于DC组的0.036(0.015，0.064），组间比较，差异有统计学意义（P<0.001）；Ⅲ~Ⅳ级肝纤维化中M2BP mRNA水平为0.129(0.093, 0.194），高于Ⅰ~Ⅱ级肝纤维化的0.060 （0.027, 0.098），组间比较，差异有统计学意义（P<0.001）；与肝组织中M2BP蛋白含量表达一致，随着肝纤维化分级增加，M2BP mRNA水平也随之增加。③ELISA结果显示，Ⅲ~Ⅳ级肝纤维化的血清中M2BPGi含量为6.07 （5.03 ，10.33) ng/ml，高于Ⅰ~Ⅱ级肝纤维化的2.70(2.03, 3.68) ng/ml，组间比较，差异有统计学意义（P<0.001）。单独建立血清中M2BPGi评估肝纤维化分级的ROC曲线，当评估Ⅲ~Ⅳ级肝纤维化时，显示曲线下面积为0.972 （95%的置信区间为0.918~1.000），敏感度、特异度、准确度、PPV和NPV分别为0.889、1.000、94.45%、100.00%和90.01 %，M2BPGi的临界值4.48 ng/ml。结论M2BP在BA肝组织中高表达且随肝纤维化程度加重而增加，血清中其糖基化异构体M2BPGi在预测BA患儿肝纤维化的严重程度方面有一定价值。