简介：

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简介：摘要目的探讨人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞氧糖剥夺/恢复(OGD/R)模型中应激诱导蛋白Sestrin2基因过表达对线粒体分裂的调控作用及其机制。方法(1)将SH-SY5Y细胞分为正常对照组、OGD/R组、Sestrin2过表达组及空载体组，后2组细胞预先采用慢病毒感染方法分别构建Sestrin2过表达及空载体稳转细胞株，除正常对照组细胞外均给予氧糖剥夺4 h/恢复18 h造模处理。造模完成后采用细胞计数试剂-8(CCK-8)法检测各组细胞的存活率，采用Western blotting实验检测各组细胞中Sestrin2、线粒体动力相关蛋白1(Drp1)、线粒体分裂蛋白1(Fis1)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、胞浆Kelch样环氧氯丙胺相关蛋白1(Keap1)、胞核核因子E2相关因子2(Nrf2)的蛋白水平，采用透射电镜观察各组细胞中线粒体的超微结构，采用免疫荧光染色检测各组细胞中Nrf2的核移位情况。(2)将Sestrin2过表达稳转SH-SY5Y细胞株分为Sestrin2过表达组、鸦胆子苦醇+Sestrin2过表达组、二甲基亚砜(DMSO)+Sestrin2过表达组，后2组细胞在造模前分别给予Keap1/Nrf2通路抑制剂鸦胆子苦醇(终浓度100 nmol/L)或DMSO溶液(终体积分数0.1%)预处理4 h，然后各组细胞均给予氧糖剥夺4 h/恢复18 h造模处理。造模完成后采用Western blotting实验检测各组细胞中胞浆Keap1、胞核Nrf2、Drp1、Fis1的蛋白水平。结果(1)与OGD/R组相比，Sestrin2过表达组细胞的存活率明显升高（61.33%±1.15% vs. 81.00%±3.00%)，Bcl-2/Bax值明显升高（0.467±0.006 vs. 0.880±0.010)，Drp1、Fis1、胞浆Keap1蛋白水平明显降低（1.089±0.033 vs. 0.865±0.014；0.829±0.009 vs. 0.350±0.007；0.967±0.017 vs. 0.881±0.024)，胞核Nrf2蛋白水平明显升高(0.627±0.025 vs. 0.957±0.015)，差异均有统计学意义(P<0.05)；并且，Sestrin2过表达组细胞的线粒体结构明显较OGD/R组更完整，Nrf2发生了明显的核移位。(2)与Sestrin2过表达组相比，鸦胆子苦醇+Sestrin2过表达组细胞胞核Nrf2的蛋白水平明显降低(0.920±0.013 vs. 0.627±0.035)，Drp1、Fis1的蛋白水平明显升高（0.994±0.020 vs. 1.084±0.005；0.728±0.010 vs. 0.906±0.022)，差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 Sestrin2基因过表达可下调胞浆Keap1蛋白水平、促进Nrf2核移位而激活Keap1/Nrf2通路，从而抑制线粒体分裂，减少细胞凋亡，减轻SH-SY5Y细胞的OGD/R损伤。

简介：摘要目的探讨双侧胸椎旁阻滞（bilateral thoracic paravertebral blocks, bTPVB）复合全身麻醉在胸腹腔镜联合食管癌根治术（thoracoscopic-laparoscopic esophagectomy, TLE）中的应用及其对术后早期恢复的影响。方法采用随机数字表法将70例拟行TLE的食管癌患者分为全身麻醉组（G组）和bTPVB复合全身麻醉（B组），每组35例；5例患者因术中输血、改为传统开放手术等原因而排除，最终G组和B组分别纳入32例和33例患者。两组均采用标准的全身麻醉，B组在麻醉诱导前15 min行右侧T7-T8、左侧T8-T9的两点椎旁阻滞。记录两组患者围手术期血流动力学变化、麻醉时间、手术时间、术中麻醉药物及血管活性药物应用，记录PACU舒芬太尼和胸科ICU氟比洛芬酯补救镇痛药物的应用，记录睁眼时间、拔管时间、转入和转出PACU时镇静躁动评分、PACU停留时间、术后谵妄和术后48 h时肺功能，记录术后0、4、8、12、24、36、48 h静息和咳嗽时疼痛VAS评分和舒芬太尼累积用量。结果两组患者各时点血流动力学比较，差异无统计学意义（P>0.05）。与G组比较，B组术中舒芬太尼用量、PACU停留时间、术中硝酸甘油使用率、PACU舒芬太尼补救镇痛率、胸科ICU氟比洛芬酯补救镇痛率降低（P< 0.05）。与术前比较，两组患者术后48 h时用力肺活量（forced vital capacity, FVC）及第1秒用力呼气容积（forced expiratory volume in one second, FEV1）降低（P<0.05），且G组低于B组（P<0.05）。G组术后0、4、8、12 h静息时和咳嗽时VAS评分均高于B组，且术后24 h时点咳嗽VAS评分亦高于B组（P<0.05）。B组术后4、8、12、24、36、48 h舒芬太尼累积用量均低于G组（P<0.05）。结论bTPVB复合全身麻醉用于TLE可减少围手术期镇痛药物用量，缓解术后早期疼痛，改善术后肺功能，从而促进术后早期康复。

简介：摘要目的探讨Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1 （Kelch-like ECH-associated protein 1, Keap1 ）/核因子E2相关因子2 (nuclear factor-E2-related factor 2, Nrf2）/抗氧化反应元件（antioxidant response element, ARE）信号通路在脑缺血/再灌注（ischemia/reperfusion, I/R ）损伤中对线粒体分裂的调控。方法将提取的大鼠原代海马神经元采用随机数字表法分为4组：正常组（C组）、氧糖剥夺再灌注（oxygen-glucose deprivation/reperfusion, OGD/R）组、OGD/R+Nrf2抑制剂组（OGD/R+N组）和OGD/R+赋形剂组（OGD/R+V组）。透射电子显微镜观察线粒体形态，蛋白免疫印迹法检测线粒体动力相关蛋白（dynamin-related protein 1, Drp1 ）、线粒体分裂蛋白1 （mitochondrial fission protein 1, Fis1）、Keap1、Nrf2的表达，免疫荧光技术观察Nrf2的核转位，流式细胞仪检测各组细胞的凋亡率。结果与C组比较，OGD/R组Keap1水平降低，Nrf2核内蛋白水平升高，Drp1、Fis1水平升高，免疫荧光观察Nrf2在OGD/R的过程中发生核转位，细胞凋亡率增加（P<0.05）；与OGD/R组比较，OGD/R+N组Nrf2核内蛋白水平降低，Keap1水平升高，细胞凋亡率增加（P<0.05）；OGD/R+V组与OGD/R组比较，Keap1、Drp1、Fis1、Nrf2核内蛋白水平及细胞凋亡率差异均无统计学意义（P>0.05）。结论在脑I/R中，Keap1/Nrf2/ARE信号通路能调控线粒体分裂、减少细胞凋亡、减轻脑损伤。