简介：摘要目的分析山东省两地区影响尖锐湿疣(condyloma acuminatum，CA)患者复发的危险因素及人乳头瘤病毒(human papillomavirus，HPV)型别分布。方法2019年8月至2020年12月在山东省济南市和济宁市共三家医院对CA患者开展匿名问卷调查并采集样本进行HPV分型检测，采用多因素二元Logistic回归分析影响CA复发的危险因素，HPV分型采用PCR-反向点杂交法进行检测。结果共收集问卷653份，有效问卷占98.77%(645/653)。174例患者出现复发，复发率26.98%。单因素分析显示，CA是否复发在患者现住址的居住时间、性生活频率、是否清洗生殖器、是否知道如何预防HPV感染之间的分布差异均具有统计学意义(P<0.05)；多因素二元Logistic回归结果显示，知晓如何预防HPV感染是CA复发的独立影响因素。共428例患者接受HPV分型检测，HPV阳性检出率为98.60%(422/428)。其中最常见的HPV型别分别是HPV6(57.58%)、HPV11(36.49%)和HPV16(11.37%)。感染类型以低危型HPV为主，占51.42%(217/422)。结论CA患者存在"知行分离"现象，需要加强健康教育和行为干预，指导该人群正确对待性行为，提高自我防范意识和风险意识。

简介：摘要目的研究HAD和非HAD的艾滋病患者不同部位来源的Tat蛋白氨基酸位点变异及其对U87细胞氧化应激的影响。方法采用BLAST和MEGA6对一例HAD患者(H)和一例非HAD患者(N)的基底节(BG)、脾脏(SPL)共4个部位来源的HIV-1 Tat蛋白进行序列分析，研究其氨基酸位点变异，并将tat基因转染至U87细胞，显微镜观察绿色荧光蛋白(green fluorescent protein，GFP)初步判断Tat蛋白表达情况，Western blot检测细胞Tat蛋白的表达；并使用cck-8法、Western blot、MDA检测试剂盒研究不同部位Tat蛋白对细胞活性、氧化应激指标GPX、MDA水平的影响。结果氨基酸序列分析显示N-BG、N-SPL、H-BG、H-SPL来源的HIV-1 Tat蛋白关键氨基酸位点存在差异；Tat蛋白可抑制U87细胞的活性，抑制作用可以被抗氧化剂N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)逆转。与对照组相比，四个实验组MDA水平均升高，GPX蛋白表达量均降低，差异具有统计学意义(P＝0.012，P＝0.004，P＝0.000，P＝0.003；P＝0.000，P＝0.016，P＝0.000，P＝0.021)；且不同部位的Tat蛋白诱导细胞氧化应激的能力不同，H-BG组MDA水平高于N-BG部位，差异具有统计学意义(P＝0.023)；且无论是HAD还是非HAD患者BG组GPX含量均低于SPL组，差异有统计学意义(P＝0.01，P＝0.007，P＝0.01，P＝0.007)。结论HAD及非HAD患者外周及中枢神经系统中的Tat蛋白关键氨基酸位点存在差异，对细胞氧化应激的影响也不同。

简介：摘要目的研究肠道病毒71型(enterovirus 71, EV71)中3D蛋白关键氨基酸突变对病毒增殖的影响，并根据3D三级结构模型推断突变影响病毒增殖能力的可能机制。方法以强毒株SDLY107构建的质粒pMD19T-SDLY107-EGFP为模板，利用定点突变和反向遗传学技术构建病毒突变株，对突变株增殖特性进行测定。同时对3D蛋白三级结构进行预测，根据3D蛋白的结构域功能特性推测突变影响病毒增殖能力的可能机制。结果经过双酶切鉴定和病毒基因测序证实已成功构建两株突变株病毒：EGFP-EV-A71(S37N)和EGFP-EV-A71(R142K)。两株突变株在RD细胞中的增殖速率均明显弱于亲本毒株。3D蛋白三级结构预测模型显示3D蛋白由"手指(finger)"、"拇指(thumb)"和"手掌(palm)"三个结构域构成握杯状右手结构，S37N位于"拇指"结构域，R142K位于"手指"结构域，而"拇指"和"手指"结构域对3D聚合酶的活性以及蛋白的稳定性具有重要影响。结论S37N和R142K突变降低了EV71的复制能力，这两个突变可能是通过改变3D蛋白聚合酶活性和结构域之间的相互作用，进而影响EV71病毒增殖。

简介：摘要目的探讨HIV-1负调控因子(Nef)在HIV-1神经致病性中的作用。方法从HIV-1相关痴呆(HIV-associated dementia, HAD)患者的中枢神经系统(central nervous system, CNS)和外周5个部位(基底结、额叶皮质、脑膜、颞叶皮质和脾)中获得5株不同的HIV-1 nef基因，与载体pcDNA3.1连接构建重组的pcDNA3.1-nef真核表达载体，转染人神经胶质瘤细胞U87。转染后22 h、27 h、32 h、37 h和42 h经免疫组化法和Western blot检测Nef蛋白表达情况，采用JEDA801D和JD-801软件对结果进行半定量分析。转染后27 h～62 h，每间隔5 h收集U87细胞的培养上清，ELISA测定上清中两种细胞因子TNF-α和IL-1β的含量，分析两种细胞因子的动态表达情况。结果成功构建5株来自一例HAD患者不同部位组织的nef基因的重组的pcDNA3.1-nef真核表达载体，转染U87细胞。免疫组化实验的结果显示，Nef蛋白在转染后42 h开始表达，Western blot进一步证实了这一结果。ELISA结果显示，转染后22 h、27 h、32 h、37 h，各组上清中细胞因子的含量随时间逐渐增多，但各组间的差异均无统计学意义(TNF-α：F＝0.445, P＝0.837; F＝0.579, P＝0.742; F＝0.617, P＝0.714; F＝2.728, P＝0.057。IL-1β：F＝2.656, P＝0.062; F＝0.485, P＝0.809; F＝0.165, P＝0.982; F＝2.463, P＝0.093); 42 h后，各组细胞因子含量逐渐降低，57 h～62 h，TNF-α及IL-1β含量基本维持稳定；转染后42 h、47 h、52 h、57 h、62 h，实验组两种细胞因子的含量明显高于对照组，差异有统计学意义(TNF-α：F＝241.310, P<0.001; F＝242.638, P<0.001; F＝250.114, P<0.001; F＝143.877, P<0.001; F＝146.172, P<0.001。IL-1β：F＝251.578, P<0.001; F＝188.816, P<0.001; F＝276.240, P<0.001; F＝238.136, P<0.001; F＝163.361, P<0.001)，各对照组间或实验组间的差异无统计学意义(P>0.05)。结论HIV-1 Nef蛋白能诱导并增强U87细胞分泌TNF-α和IL-1β的能力，而HAD患者体内不同来源的HIV-1 Nef蛋白发生氨基酸变异对U87细胞分泌TNF-α和IL-1β无影响。

简介：摘要目的研究HIV-1 Nef蛋白氨基酸位点变异对其抑制神经细胞自噬的影响，探讨Nef蛋白致中枢神经系统损伤的机制。方法分别扩增和克隆1例HIV相关性痴呆(HIV－associated dementia，HAD)患者(H)及1例非AIDS HAD患者(N)中枢神经系统颞叶(temporal cortex，TC)部位的HIV-1 nef基因，进行序列分析，研究氨基酸位点变异；构建H-TC和N-TC来源的Nef真核表达载体p EGFP-N1－nef，并分别转染U87细胞，观察绿色荧光蛋白并初步判断Nef蛋白表达情况；同时Western blot检测U87细胞Nef蛋白及细胞自噬标记蛋白LC3-Ⅱ、p62蛋白的表达，分析不同来源的Nef对U87细胞自噬的影响。结果PCR扩增并构建H-TC及N-TC nef基因克隆载体pMD-19T-nef，测序证实为HIV-1B亚型，氨基酸序列分析显示，H-TC与N-TC关键氨基酸位点存在差异；成功构建pEGFP-N1－nef重组质粒，在U87细胞内表达Nef蛋白，转染后48 h Nef蛋白表达量最高；Western blot结果分析表明，LC3-Ⅱ蛋白的表达量在组间的差异有统计学意义(F＝11.764，P＝0.001)，两组细胞中LC3－Ⅱ含量较低，Western blot未能检测到。，空白组与空载体组之间LC3-Ⅱ的表达量差异无统计学意义(P＝0.169)，H-TC、N-TC及阳性对照CQ组LC3-Ⅱ表达升高，与空白对照或空载体相比，差异具有统计学意义(P＝0.017，P＝0.039，P＝0.031)，且H-TC组LC3-Ⅱ的表达量高于N-TC组(P＝0.023)；H-TC、N-TC及阳性对照CQ组p62蛋白的表达量较空白对照或空载体组有所升高，但组间差异无统计学意义(F＝2.049，P＝0.163)。结论HAD及非HAD患者中枢神经系统中HIV-1 Nef氨基酸位点存在差异，对U87细胞自噬的影响也因此不同，H-TC来源的Nef诱导自噬标记蛋白LC3-Ⅱ表达的能力更强。