简介：摘要目的探讨2型髓系细胞触发受体（TREM2）在小鼠肺缺血/再灌注损伤（LIRI）中的作用及其可能的调控机制。方法将36只健康雄性C57BL/6小鼠按照随机数字表法分成正常对照组及LIRI 2、6、12、24、48 h组，每组6只。采用开胸夹闭左肺肺门法建立LIRI模型。取各组小鼠左肺组织，测定肺湿/干质量比值（W/D），苏木素-伊红（HE）染色后光镜下观察肺组织病理学改变，透射电镜下观察肺组织超微结构改变；用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测肺组织白细胞介素（IL-1β、IL-18）水平；用聚合酶链反应（PCR）检测肺组织TREM2和天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶1（caspase-1）的mRNA表达；用蛋白质免疫印迹试验（Western blotting）检测肺组织TREM2、caspase-1、细胞焦亡标志成孔蛋白Gasdermin-D（GSDMD）的蛋白表达。结果LIRI后2 h模型小鼠肺组织开始出现损伤，肺超微结构改变，肺组织病理学评分增加；6 h时肺损伤程度最为严重；12 h后肺损伤逐渐减轻，肺组织病理学评分逐渐降低。与正常对照组比较，LIRI 2、6、12、24、48 h组肺W/D比值和肺组织病理学评分均明显增高，差异均有统计学意义〔肺W/D比值：7.06±0.52、8.34±0.17、6.42±0.35、5.34±0.25、5.59±0.45比4.69±0.23，肺组织病理学评分（分）：5.50±0.54、9.75±0.89、5.88±0.84、3.63±0.74、4.13±0.64比1.13±0.35，均P<0.05〕。与正常对照组比较，LIRI后2 h肺组织IL-1β、IL-18水平即明显升高，于6 h达峰值〔IL-1β（ng/L）：502.76±12.25比56.50±8.07，IL-18（ng/L）：414.02±10.75比81.63±5.29，均P<0.05〕，随后逐渐降低，48 h时仍显著高于正常对照组。PCR和Western blotting结果显示，LIRI后2 h模型小鼠TREM2表达即明显低于正常对照组，于6 h达谷值〔TREM2 mRNA（2-ΔΔCt）：0.47±0.05比1.02±0.05，TREM2/GAPDH：0.23±0.13比0.48±0.17，均P<0.05〕，随后逐渐升高，于24 h达峰值〔TREM2 mRNA（2-ΔΔCt）：3.98±0.15比1.02±0.05，TREM2/GAPDH：0.71±0.17比0.48±0.17，均P<0.05〕；而caspase-1和GSDMD的表达趋势与TREM2相反，呈先升高后降低趋势，均于再灌注后6 h达到高峰〔caspase-1 mRNA（2-ΔΔCt）：2.20±0.13比1.01±0.02，caspase-1/GAPDH：0.64±0.02比0.20±0.06，GSDMD/GAPDH：1.23±0.01比0.87±0.02，均P<0.05〕。结论TREM2可能参与了小鼠LIRI的发生，其机制可能与TREM2影响caspase-1介导的肺内细胞焦亡有关。

简介：摘要目的探讨地塞米松对大鼠肺缺血/再灌注损伤（LIRI）的保护作用及其作用机制。方法实验一：按随机数字表法将24只SD大鼠分成正常通气组（N组）、生理盐水组（NS组）、LIRI组和地塞米松+ LIRI组（DEX组），每组6只。用血管夹夹闭左肺肺门1 h、再灌注2 h建立大鼠LIRI模型；DEX组于再灌注前5 min经尾静脉给予地塞米松3 mg/kg，NS组注射等量生理盐水；N组不予任何处理。各组于再灌注后2 h处死大鼠取左肺组织，测定肺湿/干重比值（W/D），苏木素-伊红（HE）染色后光镜下观察肺组织病理学改变并评估损伤程度，电镜下观察肺组织超微结构改变；用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测肺组织肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素（IL-1β、IL-6）水平，用蛋白质免疫印迹试验（Western Blot）检测磷酸化蛋白激酶B（p-AKT）表达。实验二：应用磷脂酰肌醇3 -激酶/蛋白激酶B（PI3K/AKT）通路抑制剂LY294002进行干预，以进一步探讨地塞米松减轻LIRI导致肺组织损伤的作用机制。另取24只大鼠，按随机数字表法分为N组、LIRI组、DEX组、地塞米松+ LY294002+LIRI组（LY组），每组6只。除LY组外，其他组均按实验一方法进行制模及干预，LY组于给予等量地塞米松后尾静脉注射LY294002 0.3 mg/kg。采用免疫组化法检测肺组织中M1型巨噬细胞极化标志物CD11c、CD16以及M2型巨噬细胞极化标志物CD206、Arg1的表达。结果①实验一：与N组比较，LIRI组肺组织形态学和超微结构发生明显改变，肺病理学评分、肺W/D比值及TNF-α、IL-1β、IL-6水平明显升高，p-AKT表达明显下降。与LIRI组比较，DEX组肺组织形态学和超微结构改变明显改善，肺病理学评分降低（分：5.00±0.89比8.83±0.75），肺W/D比值及TNF-α、IL-1β、IL-6水平明显下降〔肺W/D比值：6.25±0.56比8.27±0.72，TNF-α（ng/L）：93.28±16.42比205.90±25.30，IL-1β（ng/L）：130.10±10.81比209.10±19.20，IL-6（ng/L）：195.80±21.17比310.50±20.77〕，p-AKT表达明显升高〔p-AKT/AKT：（57.58±8.80）%比（36.62±9.25）%〕，差异均有统计学意义（均P<0.05）。而NS组各指标与N组比较差异均无统计学意义。②实验二：与N组比较，LIRI组巨噬细胞极化标志物CD11c、CD16、CD206、Arg1表达均明显升高。与LIRI组相比，DEX组CD11c、CD16表达明显降低，CD206、Arg1表达明显增加。而给予PI3K/AKT信号通路抑制剂LY294002干预后可明显阻断地塞米松对LIRI介导的巨噬细胞极化的影响〔CD11c免疫组化评分（分）：7.20±0.36比5.00±0.34，CD16免疫组化评分（分）：8.20±0.48比7.40±0.64，CD206免疫组化评分（分）：5.80±0.59比7.40±0.28，Arg1免疫组化评分（分）：7.20±0.72比8.80±0.48，均P<0.05〕。结论地塞米松预处理可减轻LIRI导致的大鼠肺内炎症反应和肺组织损伤，其作用机制与地塞米松激活PI3K/AKT通路进而改变肺巨噬细胞极化方向有关。