简介：摘要目的了解高效抗逆转录病毒治疗(highly active antiretroviral therapy，HAART)后HIV/AIDS患者T淋巴细胞免疫活化及CD4＋CD45RA＋ T细胞的亚群变化，探讨抗病毒治疗对HIV感染者免疫恢复的影响。方法前瞻性分析105例接受HARRT治疗的HIV/AIDS患者，流式细胞仪检测治疗前和治疗后1、3、6及12个月T淋巴细胞活化水平(CD38、HLA-DR的表达)及CD4＋CD45RA＋ T淋巴细胞；同时选取未暴露且HIV-1抗体检测阴性者35名作为健康对照。结果HAART治疗前HIV/AIDS患者T淋巴细胞活化水平显著高于健康对照(P<0.01)，HAART治疗后随治疗时间延长活化水平明显下降，治疗1个月时CD4＋CD38＋ HLA-DR＋及CD8＋CD38＋ 、CD8＋ HLA-DR＋ T淋巴细胞首先出现降低，治疗6个月时包含CD8＋CD38＋HLA-DR＋ T在内的4项活化指标均明显下降，差异有统计学意义(P<0.01)；治疗12个月与6个月相比，CD8＋CD38＋HLA-DR＋ T表达水平继续降低(P<0.01)，而其余3项活化指标差异无统计学意义。但HAART治疗12个月后，4项活化指标仍全部高于健康对照组(P<0.01)。CD4＋CD45RA＋ T淋巴细胞百分比在治疗前及治疗后12个月均明显低于健康对照组。结论HIV/AIDS患者在HAART治疗后6个月免疫活化水平降低，但HAART并不能使免疫活化逆转；HAART治疗也不能恢复HIV感染后降低的CD4＋CD45RA＋ T淋巴细胞的水平。

简介：摘要目的探讨低剂量光动力对人脂肪间充质干细胞（ADSC）的增殖、调节及分泌功能的作用及其相关机制，以期为慢性创面的修复探索新方法。方法采用实验研究方法。取2021年2—4月于陆军军医大学（第三军医大学）第一附属医院皮肤科行皮肤外科手术的10例患者（5例男性、5例女性，23~47岁）捐献的术后废弃脂肪组织，提取细胞并鉴定表型。取3批ADSC，各批细胞均分为仅行常规培养的正常对照组，行海姆泊芬处理后常规培养的单纯光敏剂组，行红光照射处理后常规培养的单纯光照组，行海姆泊芬和红光照射处理后再常规培养的光敏剂+光照组，样本数均为3。第1和2批细胞于处理完成后培养24 h，分别采用脱氧尿嘧啶核苷染色法检测ADSC增殖水平，Transwell实验检测与ADSC共培养的HaCaT细胞迁移比例；第3批细胞于处理完成后培养7 d，采用免疫荧光法检测ADSC的细胞外基质蛋白表达。取ADSC分为光动力后0 min组、光动力后15 min组、光动力后30 min组、光动力后60 min组，每组3孔，分别于行光动力处理后相应时间点采用蛋白质印迹法检测并计算磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（p-mTOR）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）、磷酸化p70核糖体蛋白S6激酶（p-p70 S6K）/p70核糖体蛋白S6激酶（p70 S6K）比值。取2批ADSC，各批细胞均分为正常对照组、单纯光动力组及光动力+雷帕霉素组，每组3孔，并行相应处理。第1批细胞于处理完成后培养15 min，同前检测并计算p-mTOR/mTOR、p-p70 S6K/p70 S6K比值；第2批细胞于处理完成后培养7 d，同前检测细胞外基质蛋白表达。对数据行单因素方差分析、LSD检验。结果培养12 d后，细胞鉴定为ADSC。处理完成后培养24 h，单纯光敏剂组和单纯光照组ADSC增殖水平［分别为（4.0±1.0）%、（4.1±0.4）%］和HaCaT细胞迁移比例（分别为1.17±0.14、1.13±0.12）均与正常对照组［分别为（3.7±0.6）%、1.00±0.16］相近（P>0.05），且均明显低于光敏剂+光照组［分别为（34.2±7.0）%、2.55±0.13，P<0.01］。处理完成后培养7 d，与正常对照组相比，单纯光敏剂组ADSC的Ⅲ型胶原表达增加（P<0.05），单纯光照组ADSC的Ⅰ型胶原与Ⅲ型胶原表达均明显增加（P<0.01）；与单纯光敏剂组和单纯光照组相比，光敏剂+光照组ADSC的Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原与纤维连接蛋白表达均明显增加（P<0.01）。与光动力后0 min组相比，光动力后15 min组ADSC的p-mTOR/mTOR与p-p70 S6K/p70 S6K比值均明显增加（P<0.01），光动力后30 min组、光动力后60 min组ADSC的p-p70 S6K/p70 S6K比值均明显增加（P<0.01）。处理完成后培养15 min，与正常对照组相比，单纯光动力组ADSC的p-mTOR/mTOR与p-p70 S6K/p70 S6K比值均明显增加（P<0.05或P<0.01）；与单纯光动力组相比，光动力+雷帕霉素组ADSC的p-mTOR/mTOR与p-p70 S6K/p70 S6K比值均明显减少（P<0.05）。处理完成后培养7 d，与正常对照组相比，单纯光动力组ADSC的Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原与纤维连接蛋白表达均明显增加（P<0.01）；与单纯光动力组相比，光动力+雷帕霉素组ADSC的Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原与纤维连接蛋白表达均明显减少（P<0.01）。结论低剂量光动力可以促进ADSC的增殖、提高ADSC调节HaCaT细胞迁移的能力，并通过快速激活mTOR信号通路增强细胞外基质蛋白的分泌。

简介：摘要目的探讨小分子化合物UM171和SR1对脐带血、供者动员外周血和淋巴瘤患者自体动员外周血3种来源的造血干/祖细胞（HSPCs）体外扩增的作用。方法将3种来源的CD34+细胞分别予以UM171、SR1干预后进行体外扩增培养，记为对照组、UM171组、SR1组和UM171+SR1组。通过细胞计数检测各组总有核细胞的数量，流式细胞术检测HSPCs的比例、各谱系分化细胞的比例和HSPCs上归巢相关因子CXCR4的表达水平。多组数据若满足方差齐性，采用单因素方差分析，组间两两比较采用LSD-t检验；若方差不齐，多组间比较以及两两比较均采用Kruskal-Wallis检验。结果与对照组比较，UM171和SR1均能促进3种来源HSPCs的比例升高，同时UM171能够增加3种来源HSPCs的扩增倍数。与对照组比较，UM171处理后脐带血来源的CD33+ （髓系）细胞的比例升高，CD41+ （巨核）细胞的比例降低；SR1处理后3种来源的CD3-CD56+ （自然杀伤）细胞的比例均升高。体外扩增48 h后各组HSPCs上CXCR4的表达较培养前增加。结论UM171能够有效扩增3种来源HSPCs的数量，促进脐带血来源HSPCs分化为髓系细胞并抑制其分化为巨核细胞。SR1能够促进3种来源HSPCs分化为自然杀伤细胞。体外扩增培养可以提高3种来源HSPCs上CXCR4的表达水平。

简介：摘要目的探讨微小RNA-23b-3p(miR-23b-3p)对高糖诱导的人晶状体上皮细胞自噬和凋亡的调控作用。方法纳入2019年9月至2020年10月在西安医学院第一附属医院眼科收治的糖尿病性白内障(DC)患者30例为DC组，同期就诊的单纯白内障患者30例为单纯白内障组。2个组均行常规晶状体超声乳化及人工晶状体植入术，术中收集晶状体前囊膜组织。实时荧光定量PCR检测各组晶状体前囊膜组织中miR-23b-3p表达。体外培养人晶状体上皮细胞系HLEB3细胞，将其分为正常对照组、高糖组，分别于正常和高糖培养基中培养。根据生物信息学数据库预测原钙黏附蛋白17(PCDH17)与miR-23b-3p的靶向关系，双荧光素酶报告基因实验验证两者的靶向关系；取高糖培养的HLEB3细胞，分为miR-23b-3p拟似物组、阴性对照(NC)拟似物组、NC-siRNA组、PCDH17-siRNA组、miR-23b-3p拟似物+Vector组、miR-23b-3p拟似物+pcDNA-PCDH17组，分别转染相应试剂后实时荧光定量PCR法检测miR-23b-3p和PCDH17 mRNA表达；Western blot法检测哺乳动物ATG6同源蛋白(Beclin-1)、微管相关蛋白1轻链3(LC3B)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)、磷酸化(p-)JNK、c-Jun、p-c-Jun、B淋巴细胞瘤基因-2相关X蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤基因-2蛋白(Bcl-2)蛋白的表达；流式细胞术检测细胞凋亡率。结果DC组晶状体前囊膜组织中miR-23b-3p相对表达量为0.35±0.15，明显低于单纯白内障组的1.00±0.09，差异有统计学意义(t＝44.627，P<0.01)；正常对照组、高糖组、高糖+NC拟似物组、高糖+miR-23b-3p拟似物组细胞中miR-23b-3p，LC3B Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1、Bcl-2、Bax蛋白相对表达量以及细胞凋亡率总体比较，差异均有统计学意义(F＝21.325、28.318、17.634、15.482、22.325、26.537，均P<0.01)；其中与正常对照组比较，高糖组细胞凋亡率、LC3B Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1、Bax蛋白表达量显著升高，Bcl-2蛋白表达量下降，与NC拟似物组比较，miR-23b-3p拟似物组细胞凋亡率、LC3B Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1、Bax蛋白表达量显著下降，Bcl-2蛋白表达量显著升高，差异均有统计学意义(均P<0.05)；生物信息学和双荧光素酶报告基因实验结果显示，PCDH17是miR-23b-3p的靶基因，miR-23b-3p拟似物组中PCDH17 mRNA相对表达量较NC拟似物组显著降低(P<0.05)。与NC-siRNA组相比，PCDH17-siRNA组细胞凋亡率、LC3B-Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1以及Bax蛋白表达量显著下降，Bcl-2蛋白表达量显著升高，差异均有统计学意义(t＝9.116、12.413、5.349、3.273、8.419，均P<0.01)。NC拟似物组、miR-23b-3p拟似物组、miR-23b-3p拟似物+Vector组、miR-23b-3p拟似物+pcDNA-PCDH17组细胞中p-JNK/JNK、p-c-Jun/c-Jun、LC3B Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1、Bcl-2、Bax蛋白相对表达量总体比较，差异均有统计学意义(F＝24.724、19.319、23.418、17.562、20.263、15.249，均P<0.05)；其中与miR-23b-3p拟似物+Vector组比较，miR-23b-3p拟似物+pcDNA-PCDH17组细胞中p-JNK/JNK、p-c-Jun/c-Jun、LC3B Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1以及Bax蛋白表达量显著升高，Bcl-2蛋白表达量降低，差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论miR-23b-3p对高糖环境下HLEB3细胞具有保护作用，其机制主要是通过靶向PCDH17调控JNK信号通路抑制高糖诱导HLEB3细胞的自噬和凋亡。