简介：摘要目的构建携带过表达miR181a的慢病毒载体，转染骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells，BMSC)，使基因修饰后的BMSC持续高水平表达miR181a。方法将miR181a质粒与三种助转质粒PRSV，PRRE，VSVG共同转染进293T细胞中，构建含有增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein，eGFP)的过表达miR181a的慢病毒表达载体。72 h后收获过表达miR181a的病毒液，转染BMSC。用嘌呤霉素筛选，得到能够长期稳定过表达miR181a的BMSC，即miR181a-BMSC。结果成功构建出携带miR181a的慢病毒载体，转染率超过95%。嘌呤霉素筛选BMSC，得到能够长期稳定过表达miR181a的BMSC，与BMSC组相比，miR181a-BMSC组中，miR181a的表达量明显增多，差异具有统计学意义(3.80比25.92，t＝19.401，P<0.05)。提取BMSC和miR181a-BMSC的外泌体，纯化后miR181a-BMSC的外泌体内miR181a表达量明显增高，差异具有统计学意义(1.41比0.87，t＝6.003，P<0.05)。结论成功构建出慢病毒介导的过表达miR181a基因修饰的骨髓间充质干细胞。

简介：摘要目的验证过表达小RNA(micro RNA, miR)-23b的骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells, BMSCs)回输对治疗实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis, EAE)小鼠具有更好的协同治疗效果。方法体外实验将EAE小鼠新鲜外周T淋巴细胞与miR23b-BMSCs (miR23b-BMSC-LN组)，未处理BMSCs(BMSC-LN组)，或未加入BMSCs的空白对照(Control-LN组)共培养48 h，应用酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)检测其中白细胞介素(interleukin, IL)-17、转化生长因子-β(transforming growth factor, TGF-β)的表达水平。用CD4 Percp、CD25 PE、IL-17 APC、Foxp3 APC抗体对细胞进行染色，流式细胞仪分析MOG35-55刺激后的CD4＋ IL-17 ＋ Th17细胞和CD4 ＋ CD25 ＋ Foxp3 ＋ Treg细胞的百分比；体内实验应用HE染色分析回输miR23b-BMSCs组(miR23b-BMSC-EAE组)，回输未处理BMSCs组(BMSCs-EAE组)，假手术组(ctrl-EAE组)的脊髓白质的炎性浸润情况。结果过表达miR-23b可增强BMSCs可抑制Th17细胞的分化能力[(4.34±0.32)%比(8.21±0.16)%，χ2＝10.03, P<0.05]，并促进调节性T(T regular, Treg)细胞亚群的分化[(1.05±0.27)%比(0.24±0.06)%，χ2＝12.67，P<0.05)]。在病理表现上，miR23b-BMSCs移植能够通过降低Th17/Treg细胞比率以及抑制炎症细胞浸润血脑屏障，从而减轻脊髓脱髓鞘，延缓EAE病程的进展。结论过表达miR23b-BMSCs回输治疗具有更高效更持久的治疗效果，为BMSCs治疗自身免疫疾病的应用奠定了基础。