简介：摘要目的研究应用胚胎外胚层发育(EED226)抑制组蛋白甲基化过度修饰是否具有抗癌活性并研究相关分子机制。方法体外培养肝癌细胞株BEL-7402和SMMC7721，用不同浓度的EED226处理肝癌细胞4、6、8 d，细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞活性；5 μmol/L的EED226或者二甲基亚砜(DMSO)处理肝癌BEL-7402和SMMC7721细胞株48 h，分别采用蛋白质印迹(Western blot)检测EED226对肝癌细胞组蛋白3上的第27位赖氨酸的三甲基化(H3K27me3)的表达水平的影响和定量反转录-聚合酶链反应(qRT-PCR)、Western blot检测EED226对肝癌细胞株的Bcl-2相互作用细胞死亡介导因子(Bim)和细胞周期依赖性蛋白激酶抑制因子1A(p21)的表达水平的影响。组间比较采用t检验。结果EED226能强效抑制肝癌细胞株BEL-7402和SMMC7721的增殖，抑制效应呈现明显的时间、浓度依赖作用。处理8 d后，EED226在两个细胞株中的半数细胞活性抑制率(IC50)分别为0.8 μmol/L和0.9 μmol/L。分子机制研究结果显示，2个肝癌细胞株分别经EED226处理与DMSO处理后H3K27me3的表达相比较显著下降。在BEL-7402和SMMC7721细胞中，EED226处理组H3K27me3的下游基因Bim和p21的mRNA相对表达水平高于DMSO组[1.00±0.15比5.67±1.53(t＝-5.266，P<0.01)，1.00±0.05比6.67±1.53(t＝-6.422，P<0.05)和1.00±0.25比6.30±1.50(t＝-5.968，P<0.05)，1.00±0.10比6.00±1.00(t＝-8.617，P<0.05)]，差异有统计学意义；相应的Bim和p21蛋白质水平均显著升高。结论表观遗传调控新型抗癌制剂EED226能够抑制肝癌细胞中组蛋白三价甲基化过度修饰，进而解除对Bim和p21表达的抑制，达到抑制肝癌细胞增殖，表明EED抑制剂具有一定的抗肝癌作用。

简介：摘要目的RNA结合基序蛋白10(RBM10)突变体(N392S)的鉴定及探究其对肺腺癌细胞功能的影响。方法收集天津医科大学肿瘤医院生物样本库108例肺腺癌(LUAD)组织样本，进行RBM10外显子的sanger测序。将野生型RBM10及RBM10突变体(N392S)通过慢病毒感染的方法分别转入肺癌细胞，转入空载体的细胞作为对照。采用细胞增殖实验(MTT)、平板克隆实验、划痕实验和侵袭实验分析RBM10突变体对肺癌细胞增殖和迁移能力的影响，通过实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测含有和不含第9外显子的NUMB转录本核糖核酸(RNA)水平的变化分析RBM10突变体对NUMB第9外显子的剪切调控作用。组间数据比较采用t检验。结果在LUAD组织样本中检测到一种新的RBM10错义突变(N392S)；与空载体对照细胞比较，表达野生型RBM10的A549-RBM10-Wild和H358-RBM10-Wild细胞增殖明显变慢(1.28±0.01比1.43±0.03，t＝7.866，P<0.01；1.27±0.03比1.70±0.05，t＝11.840，P<0.01)，而表达突变体RBM10(N392S)的A549-RBM10-Mut和H358-RBM10-Mut细胞增殖能力高于表达野生型RBM10细胞系(1.49±0.13比1.28±0.01，t＝2.851，P<0.05；1.62±0.10比1.27±0.03，t＝5.823，P<0.01)；在平板克隆实验中，表达RBM10突变体的A549和H358细胞克隆形成率高于表达野生型RBM10的A549和H358细胞克隆形成率(53.00±3.61比28.60±4.34，t＝9.675，P<0.01；42.40±3.98比18.60±4.34，t＝9.047，P<0.01)；细胞划痕实验显示，野生型RBM10较对照组抑制肺腺癌细胞的迁移(56.28±13.49比100.00±10.27，t＝4.465，P<0.01)，而突变体较野生型则失去抑制细胞迁移的能力(138.94±20.18比56.28±13.49，t＝5.898，P<0.01)；Transwell实验证实，野生型RBM10较对照组抑制肺腺癌细胞的迁移(158.00±36.81比497.25±38.20，t＝15.093，P<0.01)，突变体较野生型RBM10失去抑制肺腺癌细胞迁移的能力(474.00±48.63比158.00±36.81，t＝12.424，P<0.01)；分析RBM10对NUMB第9外显子的剪切调控作用，随着野生型RBM10质粒浓度的递增，野生型RBM10促进NUMB第9外显子(NUMB-EXON 9)的跳读使得NUMB短剪接转录本水平的增加，而随着RBM10(N392S)质粒浓度的递增，NUMB短剪接转录本水平没有变化。结论RBM10突变体(N392S)丧失了野生型RBM10抑制LUAD细胞增殖与迁移的功能，并可能通过调控NUMB蛋白剪切影响LUAD细胞功能。

简介：摘要目的探讨维纳托克(Venetoclax)在HepG2、Hep3B 2个肝癌细胞株的抗癌活性。方法对人肝癌细胞株HepG2、Hep3B细胞株进行体外培养，采用不同浓度的Venetoclax(0、3、10、30 μmol/L)处理肝癌细胞，以细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞活性，0，3, 10和30 μmol/L Venetoclax作用细胞48 h，锥虫蓝拒染法检测细胞的死亡，0，5 μmol/L Venetoclax，作用24 h，流式细胞学检测细胞凋亡率，蛋白质印迹法(Western blot)检测Venetoclax诱导半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3活化，聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)裂解。组间比较采用t检验。结果Venetoclax对HepG2、Hep3B细胞株均有较强活性抑制作用。不同浓度的Venetoclax处理肝癌细胞48、72 h，Venetoclax在HepG2细胞株中取得的半数细胞活性抑制率(IC50)值分别为46.5 μmol/L和14.2 μmol/L；在Hep3B细胞的IC50值分别为24.6 μmol/L和11.2 μmol/L。处理24 h，30.0 μmol/L的Venetoclax在HepG2和Hep3B细胞株中诱导57%[对照组、实验组凋亡率分别为(4.00±1.00)%、(56.67±8.51)%，t＝-10.650，P<0.01]和54% [对照组、实验组凋亡率分别为(5.67±1.53)%、(54.33±9.87)%，t＝-8.440，P<0.01]的肝癌细胞发生凋亡，并能诱导肝癌细胞的Caspase-3活化，PARP裂解，差异均有统计学意义。用0、3、10和30 μmol/L的Venetoclax处理48 h，在HepG2细胞株中可诱导3%(3.26±1.71)%，12%[(12.36±1.99)%，(t＝-12.36，P<0.05)]，32%[(32.38±4.57)%，(t＝-10.350，P<0.01)]和67%[(66.71±6.29)%，(t＝-16.86，P<0.01)]的细胞死亡，差异均有统计学意义；在Hep3B细胞株诱导2%(1.91±0.68)%，16%[(15.72±3.40)%，(t＝-6.890，P<0.05)]，42%[(42.39±6.86)%，(t＝-10.180，P<0.01)]和73%[(73.32±2.69)%，t＝-44.490，P<0.01]的细胞死亡，差异均有统计学意义。应用半胱氨酸蛋白酶(Caspase)抑制剂预处理，Venetoclax对HepG2和Hep3B细胞的死亡率分别从56%(56.71±6.29)%降低至11%(10.70±1.43)%，(t＝12.350，P<0.01)和68%(68.05±10.16)%至12%(12.7±6.12)%，(t＝8.080，P<0.01)，差异有统计学意义。结论Venetoclax能够通过诱导Caspase的活化，诱导肝癌细胞发生凋亡，并对肝癌细胞进行杀伤。

简介：摘要目的探讨妊娠早期孕妇血清betatrophin、纤维凝胶蛋白-3（ficolin-3）对妊娠期糖尿病（GDM）的预测价值。方法采用前瞻性的研究方法，选取昆明市延安医院2018年6月至2019年6月行产前检查的孕7 ~ 13周孕妇作为研究对象并预留空腹外周静脉血标本，于孕24~28周行口服75 g葡萄糖耐量试验（OGGT）检查，其中65例诊断为GDM（GDM组），选取年龄和孕周匹配的60例结果正常孕妇作为正常组。另外，再选取同期年龄匹配的非妊娠健康女性体检者60例作为对照组。采用酶联免疫吸附试验法检测GDM组、正常组孕7 ~ 13周及对照组血清betatrophin和ficolin-3水平，采用Pearson检验分析血清betatrophin和ficolin-3与孕24 ~ 28周糖脂代谢指标的相关性，采用受试者工作特征（ROC）曲线分析妊娠早期孕妇血清betatrophin和ficolin-3对GDM的预测价值。结果GDM组血清betatrophin和ficolin-3明显高于正常组和对照组[（35.69 ± 6.15） ng/L比（23.90 ± 7.68）和（19.68 ± 6.33） ng/L、（31.75 ± 10.30） μg/L比（22.88 ± 12.71）和（18.47 ± 9.54） μg/L]，正常组血清betatrophin和ficolin-3水平明显高于对照组，差异均有统计学意义（P<0.05）。相关性分析结果显示，孕妇血清betatrophin与总胆固醇（TC）、糖化血红蛋白（HbA1c）和稳态模型评估法胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）呈正相关（r = 0.585、0.440和0.735，P<0.01）；血清ficolin-3与HbA1c呈正相关（r = 0.673，P<0.01），与高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）呈负相关（r = - 0.520，P<0.01）。ROC曲线分析结果显示，betatrophin和ficolin-3预测GDM的曲线下面积为0.829和0.795，95% CI 0.753 ~ 0.905和0.718 ~ 0.872，最佳临界值27.69 ng/L和29.72 μg/L，灵敏度为89.36%和84.58%，特异度为72.14%和79.64%，约登指数为0.62和0.59。两者联合检测预测GDM的AUC为0.923，95% CI 0.868 ~ 0.978，灵敏度为91.25%，特异度为87.24%，约登指数为0.86。结论GDM孕妇在妊娠早期血清betatrophin和ficolin-3已存在表达异常，且与糖脂代谢指标相关，妊娠早期血清betatrophin和ficolin-3对GDM有一定预测价值。

简介：摘要目的探讨妊娠早期孕妇血清betatrophin、纤维凝胶蛋白-3（ficolin-3）对妊娠期糖尿病（GDM）的预测价值。方法采用前瞻性的研究方法，选取昆明市延安医院2018年6月至2019年6月行产前检查的孕7 ~ 13周孕妇作为研究对象并预留空腹外周静脉血标本，于孕24~28周行口服75 g葡萄糖耐量试验（OGGT）检查，其中65例诊断为GDM（GDM组），选取年龄和孕周匹配的60例结果正常孕妇作为正常组。另外，再选取同期年龄匹配的非妊娠健康女性体检者60例作为对照组。采用酶联免疫吸附试验法检测GDM组、正常组孕7 ~ 13周及对照组血清betatrophin和ficolin-3水平，采用Pearson检验分析血清betatrophin和ficolin-3与孕24 ~ 28周糖脂代谢指标的相关性，采用受试者工作特征（ROC）曲线分析妊娠早期孕妇血清betatrophin和ficolin-3对GDM的预测价值。结果GDM组血清betatrophin和ficolin-3明显高于正常组和对照组[（35.69 ± 6.15） ng/L比（23.90 ± 7.68）和（19.68 ± 6.33） ng/L、（31.75 ± 10.30） μg/L比（22.88 ± 12.71）和（18.47 ± 9.54） μg/L]，正常组血清betatrophin和ficolin-3水平明显高于对照组，差异均有统计学意义（P<0.05）。相关性分析结果显示，孕妇血清betatrophin与总胆固醇（TC）、糖化血红蛋白（HbA1c）和稳态模型评估法胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）呈正相关（r = 0.585、0.440和0.735，P<0.01）；血清ficolin-3与HbA1c呈正相关（r = 0.673，P<0.01），与高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）呈负相关（r = - 0.520，P<0.01）。ROC曲线分析结果显示，betatrophin和ficolin-3预测GDM的曲线下面积为0.829和0.795，95% CI 0.753 ~ 0.905和0.718 ~ 0.872，最佳临界值27.69 ng/L和29.72 μg/L，灵敏度为89.36%和84.58%，特异度为72.14%和79.64%，约登指数为0.62和0.59。两者联合检测预测GDM的AUC为0.923，95% CI 0.868 ~ 0.978，灵敏度为91.25%，特异度为87.24%，约登指数为0.86。结论GDM孕妇在妊娠早期血清betatrophin和ficolin-3已存在表达异常，且与糖脂代谢指标相关，妊娠早期血清betatrophin和ficolin-3对GDM有一定预测价值。