简介:摘要目的探讨miRNA-20a在脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的A549细胞焦亡与炎症反应中的作用与调控机制。方法培养人肺泡上皮A549细胞,以LPS为刺激物建立细胞焦亡及炎症反应模型,给予LPS+三磷酸腺苷刺激为LPS组,未给予刺激为空白对照组,验证模型是否成功。将A549细胞根据转染物质分为miRNA-20a模拟物(mimics)组、mimics-阴性对照(negative control,NC)组、miRNA-20a抑制物(inhibitor)组和inhibitor-NC组,构建过表达及沉默miRNA-20a的A549细胞模型,各组细胞在转染24 h后给予LPS+三磷酸腺苷刺激。构建TLR4-3'UTR双荧光素酶报告基因载体质粒,包括野生型(WT)载体质粒TLR4-3'UTR-WT1、TLR4-3'UTR-WT2及相应的变异型(MUT)载体质粒TLR4-3'UTR-MUT1、TLR4-3'UTR-MUT2,用双荧光素酶报告基因实验验证miRNA-20a的靶基因。采用实时荧光定量聚合酶链反应、免疫印迹试验及酶联免疫吸附试验检测各组焦亡标志因子消皮素D(gsdermin D,GSDMD),炎症因子凋亡相关斑点样蛋白(apoptosis-associated speck-like protein containing a CARD,ASC)、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NOD-like receptor thermal protein domain associated protein 3,NLRP3)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1(cysteinyl aspartate specific proteinase-1,Caspase-1)、白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β),以及信号分子Toll样受体4(Toll-like receptor-4,TLR4)、核因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)mRNA及蛋白表达。免疫荧光检测各组细胞TLR4表达和NF-κB入核情况。结果LPS组A549细胞GSDMD、ASC、NLRP3、Caspase-1、IL-1β mRNA和蛋白表达量均高于空白对照组(P<0.05),模型建立成功。mimics组miRNA-20a表达量高于mimic-NC组(P<0.05),inhibitor组miRNA-20a表达量低于inhibitor-NC组(P<0.01)。双荧光素酶报告基因实验显示,TLR4-3'UTR-WT与miRNA-20a mimics共转染组的相对荧光值低于TLR4-3'UTR-WT与mimics-NC共转染组(P<0.05)。mimics组LPS介导的A549细胞GSDMD、ASC、NLRP3、Caspase-1、IL-1β、TLR4、NF-κB mRNA和蛋白表达水平均低于mimics-NC 组(P<0.05),inhibitor 组GSDMD、ASC、NLRP3、Caspase-1、IL-1β、TLR4、NF-κB mRNA和蛋白表达水平均高于inhibitor-NC 组(P<0.05)。结论在LPS诱导的A549细胞焦亡及炎症反应中,miRNA-20a可能经TLR4/NF-κB 信号通路对细胞焦亡及炎症反应产生抑制作用。
简介:摘要目的基于基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术(MALDI-TOF MS)技术建立一种无需抗体富集直接检测血清M蛋白的方法,并评估其检测效能。方法方法学建立。收集在首都医科大学附属北京朝阳医院申请M蛋白鉴定检测的患者检验后剩余血清标本712份。用TCEP还原剂处理IgG、IgA纯品获得免疫球蛋白轻链,初步确定检测方法。收集20名健康体检人群检验后剩余血清标本,确定κ和λ轻链离子峰质荷比范围。设置8个平行管和8个批次进行批内和批间重复性评价;选取23例M蛋白阳性标本进行10倍、100倍和200倍稀释,采用所建MALDI-TOF MS方法检测M蛋白,评价灵敏度;采用IFE、SPE和MALDI-TOF MS 3种方法同时检测M蛋白,计算MALDI-TOF MS方法与IFE和SPE的符合率。结果批内和批间重复性均为100%;对23份M蛋白阳性标本的原倍、10倍、100倍和200倍稀释标本进行测定,MALDI-TOF MS对M蛋白的检测限为0.06~0.18 g/L;在712份标本中,以IFE为金标准,SPE与MALDI-TOF MS总的符合率分别为85.9%和92.3%,SPE与MALDI-TOF MS的阳性符合率分别为72.8%和99.7%;在M蛋白的不同型别中,MALDI-TOF-MS在IgA、IgD、IgM、游离轻链型和双克隆组中对M蛋白的检出率为100%,而SPE对IgM、IgA和游离轻链型标本的检出率分别只有66.7%、58%和19.5%;IgG组有1份阳性标本MALDI-TOF MS未检出。对23份M蛋白阳性标本进行原倍、10倍、100倍和200倍稀释后,10倍稀释时MALDI-TOF MS的检出率为100%,IFE为96%;100倍和200倍稀释时,IFE的检出率分别为MALDI-TOF MS的28%和23%。结论本研究成功建立了血清M蛋白的MALDI-TOF MS检测方法,该法检测通量高、速度快,具有良好的灵敏度、特异性和符合率。
简介:摘要:2000年以后,巴音戈壁盆地铀矿勘查工作取得重大突破,依次发现了以塔木素特大型铀矿床为首的一系列铀矿床、矿化点,成果显著。但是,在盆地南部的因格井坳陷工作程度还比较低,存在大部分找铀空白区,本文旨在通过研究该坳陷巴音戈壁组上段的沉积特征,收集、整理研究层位巴音戈壁组上段钻孔数据、砂体等厚线图、含砂率等值线图,得知因格井坳陷巴音戈壁组上段为冲积扇-扇三角洲-滨浅湖-深湖沉积体系,铀矿化有利的沉积相为冲积扇扇中、扇端相和扇三角洲前缘相,为因格井坳陷砂岩型铀矿勘查指明方向。
简介:[摘要] 智能时代的到来,智能化电子产品将不断涌现,电子产品也进一步向轻薄化、定制化方向发展,新的电子产品设计理念要求其制造工艺不断升级,如何确保智能产品在电子制造工艺环节的最优化,提高封装产品的可靠性,降低不良率,提高生产效率,是各电子产品制造商需要着重解决的问题。本文就采用了COB IC(COB即chip on board)的电子产品,阐述了通过采用直观分析法进行金线焊接(W/B)工艺优化的试验分析过程,对当前电子制造企业如何通过较低的试验验证成本及分析优化的方法进行工艺攻关具有重要参考,该方法具有开展简便、试验高效、易于一般工程技术人员掌握的特点。
简介:摘要:近年来,国家大力弘扬中华优秀传统文化进课堂、进教材,并发布了传统文化进中小学课程教材指南,为的就是进一步加强立德树人、培养好学生的红色底色。我们尝试着把古诗词与歌曲教学相融合,通过学科融合的方式,教学生吟唱古诗,感受古人文采及蕴含其中的道理。通过资料查找及了解,决定结合著名作曲家谷建芬老师编创的新学堂歌等歌曲引入小学阶段的教学,从而影响学生们产生高尚的审美培养良好的品德。经过近几年的实践研究,本人将从以下几方面来阐述研究的意义。
简介:摘要目的分析术者对完全腹腔镜根治性膀胱切除(LRC)+改良回肠通道术(MIC)的学习效果。方法回顾性分析首都医科大学附属北京朝阳医院2014年4月至2019年10月42例接受完全LRC+MIC患者的临床资料。男34例,女8例;年龄(63.4±9.1)岁。其中术者1行34例手术,术者2行8例。将术者1的34例按时间顺序分为3组,第1~12例为A组,第13~23例为B组,第24~34例为C组;术者2实施的8例为D组。4组中有腹部手术史者分别为0、1、4、3例,差异有统计学意义(P<0.05);4组年龄、体质指数、美国麻醉医师协会评分等差异均无统计学意义(P>0.05)。改良术式的重要步骤包括光源透射下离断肠系膜、输出袢固定的条件下行输尿管-输出袢反流性对端吻合、缝合后腹膜缺口。比较各组患者手术时间、构建回肠通道时间、出血量、并发症发生比例、淋巴结清扫数量、切缘阳性比例等重要手术指标。结果各组手术均顺利完成,均无中转开放手术。A~C组手术时间分别为330.0(320.0,360.0)、300.0(250.0,308.0)、270.0(216.0,324.0)min,差异有统计学意义(P =0.010);3组构建回肠通道时间分别为136.5(131.3,147.5)、92.0(79.0,119.0)、79.0(72.0,115.0)min,差异有统计学意义(P<0.001)。手术时间和构建回肠通道时间组间两两比较,A、B组,A、C组差异均有统计学意义(P<0.05),B、C组差异无统计学意义(P>0.05)。3组出血量[200.0(125.0,300.0)、100.0(100.0,150.0)、200.0(100.0,400.0)ml]、并发症发生比例[4/12、4/11、3/11]、淋巴结清扫数量[(19.0±10.7)、(16.0±9.8)、(23.3±8.5)枚]、切缘阳性比例(1/12、1/11、2/11)的比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。D组手术时间420.0(350.0,450.0)min,与A组比较差异有统计学意义(P<0.05)。D组出血量200.0(112.5,350.0)ml,并发症发生比例2/8,淋巴结清扫数量(13.8±7.1)个,切缘阳性比例1/8,与A组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论完全LRC+MIC学习效果明显,随着手术例数的增加,手术时间及构建回肠通道时间显著下降;该术式具有较好的可重复性和安全性。
简介:摘要目的对应用circRNA高通量测序技术在急性呼吸窘迫综合征(ARDS)新生大鼠肺组织中筛选出差异表达的circ_Dock6进行体内验证,并通过生物信息学方法预测其相对应的miRNA靶基因,分析其所参与的生物学过程及富集的信号通路。方法采用实时定量PCR技术检测ARDS组(12只)和正常对照组(12只)新生大鼠肺组织circ_Dock6表达变化。应用TargetScan、RNAhybrid和miRanda数据库预测circ_Dock6可能的募集miRNAs及其对应的靶基因,并对各个miRNA的靶基因进行功能富集分析和信号通路富集分析。结果ARDS组新生大鼠肺组织circ_Dock6表达(0.44±0.29)较正常对照组(1.63±1.33)显著下调(t=2.060,P<0.05)。用3个数据库得到circ_Dock6可能募集的miRNAs(miR-24-3p、miR-667-3p、miR-711、miR-203b-5p、miR-5132-5p等)的靶基因交集情况;对前述靶基因的合集进行注释描述、富集分析,其靶基因的功能参与调控多种生物学过程,包括各种细胞蛋白质代谢、蛋白质氨基酸磷酸化、DNA依赖性转录调节、生物调节、组织器官发育、细胞分化、信号调节、基因表达、对刺激的反应性调节等;细胞组分富集分析可见靶基因集合富集于细胞内、细胞器、细胞质、细胞核等几乎所有细胞组分上;分子功能富集分析可见其具有转移酶活性、转录因子活性、磷酸转移酶活性等功能。所涉及的信号通路包括富集于丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路、磷脂酰肌醇-3-激酶-蛋白激酶B(PI3K-Akt)信号通路、雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路等均与ARDS密切相关;circ_Dock6在ARDS发病过程中可能发挥重要作用。结论circ_Dock6可能与新生儿ARDS的发病机制密切相关,通过生物信息学分析对其靶基因与相关信号通路的预测,为进一步探讨其作用机制奠定了基础。