探讨干血片荧光分析法在凉山彝族自治州新生儿苯丙酮尿症大样本筛查中的应用效果

探讨干血片荧光分析法在凉山彝族自治州新生儿苯丙酮尿症大样本筛查中的应用效果

黄雪[1]  师德菊[1]    向光敏[2]

凉山州妇幼保健计划生育服务中心  四川 凉山  615000    宁南县疾病预防控制中心   四川 凉山  615499

【摘 要】目的：探讨应用荧光分析法在凉山彝族自治州新生儿苯丙酮尿症（PKU）筛查中的应用效果。方法: 应用全自动荧光免疫分析仪（GSP）对凉山彝族自治州 2022年1月-2023年 12月出生的140517例新生儿进行苯丙酮尿症（PKU）筛查,初筛阳性者进行召回复筛，复筛阳性者则进行基因检测确诊。结果：采用化学荧光检测法对140517名新生儿进行苯丙酮尿症筛查，共诊断出该病症15例，检出率1.07/10000。结论：运用化学荧光法技术进行检测较稳定又灵敏，且具有速度优势，非常适宜用于大规模人群中的新生儿苯丙酮尿症筛查。

关键词： 荧光分析法； 苯丙酮尿症； 新生儿筛查

苯酮尿症（PKU）属于一种常染色体隐性遗传代谢病，其患病频率大约是1/11000[1]。由于肝脏缺少苯丙氨酸羟化酶，致使苯丙氨酸（Phe）未能转换成酪氨酸，进而导致各类组织如大脑、血液及尿液中苯丙氨酸浓度异常升高，从而对中枢神经系统产生损害，并可能引发不同程度的智力障碍[2]。近年来，采用干血片荧光分析法定量检测苯丙氨酸（Phe）在国内外新生儿 PKU 筛查中得到应用。通过对新生儿进行早期筛查，使苯丙酮尿症（PKU）能够早期发现并及早进行干预和治疗，大幅减少了此种疾病对孩子造成的不可逆伤害。

1 资料与方法

1.1　资料

1.1.1研究对象

收集了从2022年1月至2023年12月期间凉山州妇幼保健院新筛中心检测的140517份新生儿样本数据，检测经医院医学伦理委员会批准。筛查前均告知家长筛查的目的、意义、筛查项目情况等，并签署知情同意书。

1.1.2 标本采集与递送

凉山彝族自治州各医疗助产机构，按照《凉山州新生儿遗传代谢病筛查工作方案》要求，在新生儿出生72小时至7天内，充分哺乳后，采集足跟血3-5滴于滤纸片上，要求每滴血直径8mm、背面渗透、且不重叠，于室温下自然晾干，装入塑料袋密封，并于2～8 ℃冰箱中保存，并及时送达凉山州妇幼保健院新筛中心进行检测。

1. 2 方法

1. 2. 1 仪器和试剂

使用美国PerkinElmer公司的全自动荧光免疫分析( GSP2021)，

美国PerkinElmer公司的Phe 测定试剂盒 ( 荧光法) ，以及自动化打孔设备Panthera－PuncherTM 9。

1. 2. 2　阳性判断及召回　

血Phe浓度≥1.8mg/dl 为可疑阳性。对可疑阳性者采用电话、短信通知等方式召回被测者复采血斑，对复采血斑采用相同的方法再次检测，Phe浓度仍≥1.8mg/dl为阳性。

1. 2. 3 　诊断及分类

对Phe阳性者进行召回，进一步做尿蝶呤分析、红细胞二氢蝶啶还原酶测定、及基因检测以明确诊断及临床分型。PKU患儿诊断参照《高苯丙氨酸血症的诊治共识》进行分类，轻度HPA:Phe2-6mg/dL,中度PKU:Phe6-20mg/dL，经典PKU:Phe≥20mg/dL。[3]

2 结果

2.1干血片荧光法对凉山州140517份新生儿干血片进行苯丙氨酸浓度检测其频数分布情况见表1。

表1 Phe 的不同浓度 PKU 分布

上述结果可知 Phe＜2mg／dl 有140346例，占99．88％；2．1～4．0mg／dl 有156例，占0.111％；4.1～6．0mg／dl有6例，占0．043％；6．1～8．0mg／dl 有5例，占0．0036％；8．1mg／dl 以上有4例，占0．0028％。

2.2荧光分析法共筛查新生儿140517例，经原始血片复查 Phe≥1．8mg／dl 者，召回被测试者重新采样进行双孔检测， Phe仍≥1．8mg／dl 者21例，死亡3例，经基因检测排除3例，诊断为HPA 13例， PKU 2例，经统计发病率为1.07/10000。

讨 论

患有PKU的婴儿在出生早期通常无异常表现，仅少部分可能会出现进食不畅、呕吐和易烦躁等非特异性症状[3]。患儿在未接受治疗的情况下，3-4个月起逐渐出现智力发育落后，发色从黑色变为黄色，汗液及尿液散发出独特的鼠臭味等症状。多数孩子在疾病初期并没有显著的临床表现，使得家长难以发现[4]。因此，新生儿尽早的做PKU筛查，诊断后尽早干预与治疗是降低智力受损的关键措施。

本研究通过荧光法对140517例新生儿标本进行苯丙氨酸检测，检出PKU 2例，HPA13例，检出率1.07/10000，高于全国水平（1/11 000）。所有确诊患儿均在凉山州妇幼保健院新筛中心进行治疗和随访，极大程度控制病情、减轻疾病引起的智力损害，力求患儿像常人一样进行日常生活、接受教育。

对新生儿进行早期遗传代谢病筛查旨在降低新生儿先天性疾病对患儿造成的损害，提升国民健康水准，是一项有效的出生缺陷三级预防措施。根据《中华人民共和国妇幼保健法》以及相关的执行条例，该项筛查已正式纳入妇幼健康保健服务范围[]。时间分辨荧光法筛查PKU灵敏度高且稳定性好，标本采集较为简单且对新生儿损害较小，易被家长接受，适用于新生儿苯丙酮尿症大样本筛查。

参考文献

[1]黄尚志 , 宋昉 . 苯丙酮尿症的临床实践指南［J］. 中华医学 遗传学杂志 , 2020, 37(3): 226-234.

[2] 尹亚茹,厉勇,刘正美,et al.贵州省全自动荧光免疫分析仪筛查新生儿苯丙酮尿症的参考限值研究[J].中国妇幼保健, 2024, 39(2):329-334.

[3] 党晨滢,王雪侠.2021年郑州市新生儿苯丙酮尿症筛查情况分析[J].临床医学, 2023(1):4-6.

[4] 周尚琴,陈曦,薛淑媛,等.新疆维吾尔自治区四地州新生儿苯丙酮尿症筛查及确诊患者随访[J].发育医学电子杂志, 2023, 11(4):270-276.

[5] 廖敏娟,袁丽萍,王洋真,等.福建省龙岩市新生儿苯丙酮尿症,甲状腺功能减退症筛查分析[J].中国卫生标准管理, 2023, 14(14):24-27.