多组分药物配方中高效液相分析方法的开发与验证

多组分药物配方中高效液相分析方法的开发与验证

王悦

山东标准检测技术有限公司，山东省济南市250000

摘要：近年来，随着医疗技术不断发展，新型药物不断研发，并且在临床得到广泛应用。临床用药中，药物检验是重要环节，直接关系用药安全。目前，我们常用的药物检验方法有高效液相色谱和超高效液相色谱。高效液相色谱无论是灵敏度还是分辨率、速度等均明显超出高效液相色谱（简称HPLC），而且对环境的适应能力也很强。HPLC在高速、高压环境下，也可以更有效地展开药物分析工作，并且还可以有效保障样品质量。

关键词：多组分；药物配方；高效液相分析方法；开发与验证

前言

本文针对多组分药物配方的高效液相分析方法进行了开发与验证。首先，通过选择合适的样品和制备方法进行样品制备。然后，根据药物特性和分析目的选择合适的色谱柱和流动相，并通过优化流动相组成和流速实现高效分离。接下来，根据药物特性选择合适的检测器，并通过改变柱温、流速、流动相组成等参数进行方法优化。最后，通过验证方法的准确性、精密度、线性范围、灵敏度、选择性和稳定性等指标，验证了该方法的可靠性和有效性,以期为多组分药物配方的高效液相分析方法的开发与验证提供了有效的指导。

1高效液相色谱（HPLC）简介

高效液相色谱（HighPerformanceLiquidChromatography\HPLC）简称为HPLC，是一种结合液相色谱与气相色谱基础理论及技术的分离分析法。其主要是结合输液系统，将多种溶剂按不同比例进行混合，缓冲液以及流动相泵装入固定的色谱柱中。通过对应的分析处理后，再将其送入检测容器中进行试样试验，这种方式在我国现代化医学以及农业和商检、法检中较为常用。色谱法中，HPLC是重要一个分支。其中，液体是流动相重要成分，通过压力作用，将其挤压至固定相中。HPLC，具有“四高一广”特征，其中，四高是指“高速度”、“高压强”、“高效率”、“高灵敏度”，一广是指“应用范围广”。HPLC处理药品时，操作简单，组分回收容易。这种技术的应用原理是“柱外效应”，特点在于可以反复利用，不会破坏样品，不过这种处理方式存在一定缺陷，在进样以及检测器处理时候，会让整个流动的流动相有所变化，分离的物质扩散以及滞留都会影响色谱峰的加宽。

2高效液相色谱的主要类型

（1）吸附色谱。所谓的吸附色谱，就是一种可以根据不同物质之间的吸附量的差别，来进行相应的分析，因此，在采用吸附色谱的方法时，要考虑到材料的状态。吸附就是一个流动相与固定相之间的相互吸引。同时吸附方法也有不同，可以分为三种：物理吸附、半化学吸附、化学吸附。

（2）分配色谱。分配色谱系色谱法是因为被分离成分的溶解程度不同，所以，在固定相和流动相中，会有不同的成分，从而进行了分离。通常，以液体为溶剂的固定相居多。若采用分选色谱法进行分离分析，则可使被分离的组分在固定相与流动相中的溶解达到平衡。

（3）离子色谱。采用离子色谱可以很好地分离出阴阳离子。离子色谱法的原理是离子交换，为了确保离子交换能够顺利实现，必须要知道离子的特性，然后选择最适合的方法来进行离子交换。主要有高效离子交换色谱、离子排斥色谱和离子对色谱三种，这三种方法使用的材料以及材料的功能存在一定的差异。

（4）分子排阻色谱法。分子排阻色谱法是根据待测组分的分子大小进行分离的一种液相色谱技术。分子排阻色谱法的分离原理为凝胶色谱柱的分子筛机制。色谱柱多以亲水硅胶、凝胶或经修饰凝胶如葡聚糖凝胶（Sephadex）和聚丙烯酰胺凝胶（Sepharose）等为填充剂，这些填充剂表面分布着不同尺寸的孔径，药物分子进入色谱柱后，它们中的不同组分按其分子大小进入相应的孔径内，大于所有孔径的分子不能进入填充剂颗粒内部，在色谱过程中不被保留，最早被流动相洗脱至柱外，表现为保留时间较短；小于所有孔径的分子能自由进入填充剂表面的所有孔径，在色谱柱中滞留时间较长，表现为保留时间较长；其余分子则按分子大小依次被洗脱。

3多组分药物配方的高效液相分析方法验证

3.1准确性验证

准确性验证是为了确定测定结果与真实值之间的接近程度。首先，选择已知浓度的标准品，确保其纯度和稳定性。标准品应该与待测样品中目标成分具有相似的化学性质。然后，按照一定比例将标准品加入待测样品中，使得待测样品中含有不同浓度的目标成分。这样可以模拟实际样品中目标成分的浓度变化情况。使用高效液相色谱仪进行分析，测定待测样品中目标成分的浓度。在测定过程中，应注意仪器的稳定性和准确性，确保测定结果的可靠性。为了提高测定结果的准确性，可以重复测定多次，并计算测定结果的平均值和相对标准偏差（RSD）。RSD反映了测定结果的离散程度，较小的RSD值表示较好的精密度。最后，将测定结果与已知浓度进行比较，计算准确度。准确度可以通过计算偏差（测定结果与已知浓度之间的差异）和回收率（测定结果与已知浓度之间的比值）来评估。较小的偏差和接近100%的回收率表示较好的准确性[2]。

3.2精密度验证

精密度验证是为了确定测定结果的重复性和稳定性。选择待测样品，将其重复测定多次，使用高效液相色谱仪进行分析。在测定过程中，应注意仪器的稳定性和重复性，确保测定结果的可靠性。计算测定结果的平均值和相对标准偏差（RSD）。RSD是测定结果的离散程度的度量，较小的RSD值表示较好的精密度。较小的RSD值说明测定结果的重复性较好，即测定结果在多次测定中变化较小。

3.3线性范围验证

线性范围验证是为了确定测定方法在不同浓度范围内的可靠性和准确性。选择不同浓度的标准品，涵盖待测样品中目标成分的浓度范围。使用高效液相色谱仪进行分析，测定标准品的峰面积或峰高度。将测定结果绘制成浓度与峰面积（或峰高度）之间的曲线，进行线性回归分析。线性回归分析可以得到回归方程，用于后续待测样品中目标成分浓度的计算。回归方程的斜率和截距可以用于将峰面积（或峰高度）转换为浓度值。同时，计算回归方程的相关系数（R^2）来评估线性关系的好坏。R^2越接近1，表示回归方程拟合度越好，线性关系越可靠。

3.4灵敏度验证

（1）最低检测限的测定：在合适的条件下，逐渐稀释样品，直到仪器无法检测到目标成分的信号为止。记录最低稀释倍数，并计算出最低检测限。（2）最低定量限的测定：在合适的条件下，逐渐稀释样品，直到仪器能够准确测量到目标成分的信号，并且信号与噪音之间的比值（信噪比）达到一定的要求。记录最低稀释倍数，并计算出最低定量限。

3.5选择性验证

（1）准备含有目标成分和其他成分的样品，并进行高效液相分析。（2）观察目标成分的峰是否能够被准确地检测到，并且没有被其他成分的峰所干扰。（3）根据峰的保留时间、峰形和峰面积等参数，判断目标成分的选择性。

3.6稳定性验证

(1)准备多个样品，并分别在不同的条件下进行储存或处理，如不同温度、湿度、光照等。（2）在一定时间间隔内，对这些样品进行高效液相分析，并观察目标成分的峰是否保持稳定。（3）根据峰的保留时间、峰形和峰面积等参数，判断目标成分的稳定性。

4结束语

综上所述，通过样品制备、色谱柱选择、流动相选择、检测器选择、方法优化等步骤，我们建立了一套高效、准确、可靠的分析方法。方法验证结果表明，该方法具有良好的准确性、精密度、线性范围和灵敏度，并且具有良好的选择性和稳定性。该方法可用于多组分药物配方的质量控制和分析，为药物研发和生产提供了可靠的分析手段。本研究的成果对于提高药物质量和保障患者用药安全具有重要意义。

参考文献：

[1]陈瑾;张勇.高效液相色谱法测定组胺的方法验证[J].中国质量与标准导报,2022:4.

[2]李飞,李云.对药物研发中分析方法验证的几点考虑[J].中国新药杂志,2021:3.

[3]封志杰.超高效液相色谱法在药物检验分析中的应用[J].中国化工贸易,2021:2(87-88).