ICU多重耐药鲍曼不动杆菌纸片法体外药敏联合研究及新发现

ICU多重耐药鲍曼不动杆菌纸片法体外药敏联合研究及新发现

钟穗斌1陈美君2蒋宇杰3

1. 广东省农垦中心医院   重症医学科   广东省湛江市   524002
2. 广东省农垦中心医院   消化内科     广东省湛江市   524002
3. 广东省农垦中心医院   检验科       广东省湛江市   524002

【摘要】目的比较替加环素、碳青霉素烯类抗生素、舒巴坦对多重耐药鲍曼不动杆菌敏感性的研究。方法收集2021.5-2022.5期间多重耐药的鲍曼不动杆菌40株，采用MIC法分别检测替加环素、碳青霉素烯类抗生素、舒巴坦对多重耐药鲍曼不动杆菌的敏感性。结果根据FDA标准，VITEK-2法与MTS法相比呈现较高一致性，而纸片扩散法的一致性较低。VITEK-2法中的MIC值比MTS法低约1~2个稀释度，对替加环素对耐碳青霉烯鲍曼不动杆菌的耐药率检测结果为23.3%，显示存在耐药株。结论对于多重耐药鲍曼不动杆菌，需用MIC法确认。

【关键词】替加环素；鲍曼不动杆菌；纸片扩散法；MICTest

在现代医疗体系中，重症监护室（ICU）是一个高风险区域，特别是对于感染性疾病的管理。ICU中的患者往往因为严重的基础疾病、长期使用抗生素、以及侵入性操作而更容易感染多重耐药病原体[1]。鲍曼不动杆菌（Acinetobacter baumannii，ABA）作为一种典型的院内感染病原体，以其卓越的抗药性和在ICU中的高发性而受到全球关注[2]。多重耐药鲍曼不动杆菌（Multidrug resistant Acinetobacter baumannii，MDR-AB）的治疗难度不仅在于其对多种抗生素的天然或后天耐药性，更在于其耐药机制的复杂性，这使得有效的药物选择变得极为有限。尽管纸片扩散法是一种传统的药敏测试方法，在临床上被广泛用于指导抗生素的选择[3]。然而，面对MDR-AB，单一药物往往难以达到理想的治疗效果，因此联合用药策略成为了研究的新焦点。本研究将分析替加环素不同药敏试验所产生的MDR-AB药敏结果影响。

1方法

①MIC法：选择已知为MDR-AB菌株。通过标准方法复苏菌株并在适宜的培养基中培养至对数生长期。根据需要测试的抗生素，准备一系列两倍稀释的抗生素溶液。使用96孔微量滴定板，将不同浓度的抗生素溶液分别加入到孔中。每个孔中加入相同体积的细菌悬液，使得最终接种量约为5×10^5CFU/mL。设置阳性对照和阴性对照。在35-37℃下孵育18-24小时。观察微量滴定板中各孔液体的清澈程度，以确定细菌的生长情况。记录每种抗生素抑制细菌生长的最小浓度，即为MIC。②联合药敏实验棋盘法设计：同MIC法，准备MDR-AB菌株。选择两种或以上具有潜在协同作用的抗生素，准备相应的两倍稀释系列。在96孔微量滴定板中布局，列方向放置一种抗生素的稀释系列，行方向放置另一种抗生素的稀释系列。每个孔中的终浓度应由两种抗生素的对应浓度组合而成。向每个孔中加入预先调整过的细菌悬液，保证接种量一致。设置单药对照和双重对照。在35-37℃下孵育18-24小时。对每一对抗生素组合的效果进行评估，观察是否有明显的生长抑制。通过比较组合使用抗生素的MIC与单独使用抗生素的MIC来判断是否存在协同效应。协同效应通常使用分数抑制浓度指数（Fractional Inhibitory Concentration Index,FICI）来评价，FICI≤0.5表示协同，FICI>0.5-4.0表示无协同，FICI>4.0表示拮抗。

1.3数据分析

参考FDA推荐的MIC折点进行结果判读：MIC≤2mg/L为敏感（S）、4mg/L为中介（I）、≥8mg/L为耐药（R）。

1.4统计学处理

采用SPSS23.0软件分析及处理数据，计数资料采用百分比表示，采用х2检验；计量资料以（±s）表示，采用t检验，以P<0.05为差异具有统计学意义。

2结果

表1MTS法与Vitek-2法的MIC结果比较[株（%）]

表2MTS法与其他2种方法检测结果比较［株（%）］

3讨论

ABA是一种典型的医院内感染病原体，特别是在ICU中，这种细菌对医疗环境具有极高的适应性，并且因其多重耐药性而在全球范围内引起广泛关注。ABA是革兰氏阴性、不动杆菌属的一员，可以在各种环境中存活，包括医院中的多种表面[4]。这种细菌通常不对健康个体构成威胁，但在免疫系统受损或有严重基础疾病的患者中，可以引起包括呼吸道感染、血流感染、尿路感染、皮肤和软组织感染等在内的多种感染。

纸片扩散法，也称为Kirby-Bauer抗生素敏感性测试，是一种广泛应用于临床微生物实验室的标准化方法，用于评估细菌对抗生素的敏感性。在针对ICU中MDR-AB的研究中，纸片扩散法是评估细菌药物敏感性和指导抗生素选择的重要工具[5]。纸片扩散法基于抗生素从浸有药物的纸片向周围培养基中扩散的原理。抗生素的扩散形成一个浓度梯度，细菌在培养基表面生长时会在一定浓度的抗生素存在下受到抑制[6]。本研究结果表明，纸片扩散法对MDR-AB的耐药率、中介率上升，敏感率存在显著下降。这表明纸片扩散法在体现MDR-AB耐药性趋势上的这些发现，不仅突显了临床上面临的挑战，也强调了公共卫生层面上需采取措施应对多重耐药细菌的紧迫性。这要求从抗生素研发、感染控制、抗生素管理策略等多方面入手，综合应对MDR-AB带来的威胁。

综上所述，对于MDR-AB，建议使用MTS法进行确认，以便对纸片扩散法测定的中介和耐药菌株进行进一步检测。

参考文献

[1]李琳.替加环素剂量对泛耐药鲍曼不动杆菌重症肺炎患者治疗效果的影响[J].医疗装备,2020,33(24):75-76.

[2]魏小杰,陈雨燕,罗斌,等.联合头孢哌酮舒巴坦与替加环素治疗多重耐药鲍曼不动杆菌肺炎的疗效分析[J].中国医药科学,2020,10(24):92-95.

[3]陈晓亭,亓志刚.高剂量替加环素与头孢哌酮-舒巴坦钠联用对碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌致患者复杂尿路感染的临床治疗分析[J].抗感染药学,2020,17(12):1834-1836.

[4]黄邵军,袁珊珊,成聪聪.重症医学科鲍曼不动杆菌的耐药性及感染相关危险因素分析[J].中国公共卫生管理,2020,36(06):856-858.

[5]林宇斌,温建立.替加环素治疗多重或泛耐药鲍曼不动杆菌引起的重症肺炎的疗效分析[J].云南医药,2020,41(06):534-536.

[6]马致洁,于小红,章从恩,等.柴胡桂枝汤对泛耐药鲍曼不动杆菌侵袭的人肺癌A549细胞的保护作用[J].中国医院用药评价与分析,2020,20(11):1281-1284+1289.

项目名称：湛江市科技计划项目

课题题目：ICU多重耐药鲍曼不动杆菌纸片法体外药敏联合研究及治疗对策

课题编号：2021B01270

课题人：钟穗斌