复方藤梨汤对结肠癌CT26细胞的影响

复方藤梨汤对结肠癌CT26细胞的影响

1陈亨德    2刘强     2曹刘荐   2赖象权*通讯作者

1贵州中医药大学  550000             2贵州中医药大学第一附属医院肛肠科  550000

摘要：目的 讨论复方藤梨汤对结肠癌CT26细胞的影响。方法 选择150只Balb/c实验室小鼠（雌性75只，雄性75只，7周龄），随机分成5组（空白对照组、荷瘤对照组、低、中、高剂量给药组）。空白对照组不造模，其余组均造模。并为不同给药组，给予复方藤梨汤灌胃，两组对照组则选择生理盐水灌胃。在处死小鼠之后，对比不同组小鼠的瘤重。结果 相较于荷瘤对照组，低剂量给药组瘤重（4.01±0.56）g有所增加，差异不具备统计学意义（P＞0.05），中剂量给药组（3.05±0.48）和高剂量给药组（2.68±0.66）g均有所下降（P＜0.05）。结论 复方藤梨汤可以对肿瘤的生长起到显著抑制作用，可作为重要的抗肿瘤血管药物，在临床上推广。

关键词：复方藤梨汤；CT26细胞；影响效果

恶性肿瘤，俗称癌症。此类疾病的预后效果较差，会危及生命安全。随着临床医学的发展，中医药成了恶性肿瘤治疗的重要思路[1]。相关资料显示，复方藤梨汤就是一种治疗方案，在消化道恶性肿瘤、结肠癌的治疗上效果显著，抗肿瘤作用值得引起临床注意[2]。本研究将以150只Balb/c实验室小鼠为研究样本，讨论复方藤梨汤对结肠癌CT26细胞的影响。

1 资料与方法

1.1 一般资料

    选择150只Balb/c实验室小鼠（雌性75只，雄性75只，7周龄），随机分成5组（空白对照组、荷瘤对照组、低、中、高剂量给药组）。小鼠体重为（18.54±2.03）g，不同组的小鼠基线资料，差异不具备统计学意义（P＞0.05），可进行对比。

1.2 实验药品

复方藤梨汤药方：藤梨根20g、甘草18g、茯苓15g、炒白术13g、虎杖根10g、薏苡仁8g、炒党参和水杨梅根均5g。将药材，放入清水中，水量要浸过药材表面1—3厘米，浸泡30分钟，先用大火烧开，再改成小火，煎煮30分钟。煎好后的200ml药液中，含药量为100ml。煎好后装到玻璃瓶中，放在4℃的环境中储存。小鼠给药剂量的标准，是5ml/g。在此基础上，5倍为低剂量，10倍为中剂量，20倍为高剂量。

    实验试剂：CD34多克隆抗体（生产公司：Bioss）、胰酶-EDTA（浓度为0.25%，生产公司：上海经科化学科技有限公司）、胎牛血清（生产公司：江苏恩莫阿赛生物技术有限公司）、RMPI-1640培养基（生产公司：北京诺为生物技术有限公司）、Super Picture 3rd Gen IHC Detection Kit 二抗（生产公司：Invitrogen公司）。

1.3 方法

选择二氧化碳培养箱，保持37℃环境，培养CT26细胞，当细胞繁殖3代之后，用浓度为0.25%的胰酶-EDTA，消化掉对数生长期细胞，经过PBS洗涤之后，制作单细胞悬液。抽取单0.2mL细胞悬液[3]，在小鼠腋部接种，大概经过14天，小鼠会长出皮下肿瘤，体积为1.5cm3，外观呈淡红色，长势较好。将其中1mm3的瘤块剪下，过滤之后，用生理盐水对悬液进行稀释，稀释浓度以1×107/mL为标准[4]。每只接种0.2mL悬液，接种位置为腋前部皮下。

将Balb/c实验室小鼠随机分成五组，其中，空白对照组不造模，其余荷瘤对照组、低剂量给药组、中剂量给药组、高剂量给药组均造模。造模之后的第二天，进行持续21天的灌胃。其中，空白对照组和荷瘤对照组的灌胃溶剂为生理盐水，生理盐水的灌胃量，根据小鼠的重量决定。具体为：9.6ml-12ml。剩余组为不同剂量的复方藤梨汤。以0.6mL/20g为标准，确定灌胃容积[5]。

1.4 观察指标

    对比不同组小鼠的瘤重。

1.5 统计学分析

本组研究采用SPSS 24.0统计学软件进行数据的分析和处理，计数资料采用（n/%）表示，采用χ2检验，计量资料采用均数±标准差（±s）表示，采用t检验，P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

    结果显示，相较于荷瘤对照组，低剂量给药组瘤重（4.01±0.56）g有所增加，差异不具备统计学意义（P＞0.05），中剂量给药组（3.05±0.48）和高剂量给药组（2.68±0.66）g均有所下降，差异具有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

表1 不同组小鼠例数与瘤重情况（±s，g）

3 讨论

临床上，肿瘤无论是形成、生成还是转移，其过程都是具备较强复杂性的，之所以会出现肿瘤，与血管促进因子、抑制因子失衡，有密切的关系，同时也和宿主功能息息相关。临床认为，患者免疫功能越强，抑制程度就会越高，就越能防止恶性肿瘤进一步转移

[6]。因此，机体免疫力的提升，就可以成为临床重要的治疗思路，从不同靶点，对肿瘤的转移，起到一定抑制作用。

临床针对恶性肿瘤给出的治疗方案，包含手术治疗、化疗、放疗等不同方向。单纯从理论角度，手术可以将肿瘤细胞全部移除，分为根治性手术和姑息性手术，后者通常是患者不能在进行根治性手术时采用的治疗方案。晚期肿瘤同样可以切除掉大部分，使瘤负荷降低，为化疗和放疗治疗打下一定基础。而化疗和放疗治疗手段，都是通过化学药物或放射线，将癌细胞杀灭，减小肿瘤体积，但是可能会产生较强毒副作用，因此患者的治疗配合度并不高。

随着医学的发展，中医药针对恶性肿瘤的治疗，同样引起了临床重视。本研究采用的复方藤梨汤，治疗思路为扶正祛邪，可以作为以结肠癌为代表的消化道恶性肿瘤的主要治疗方案。复方藤梨汤药方包含藤梨根、甘草、茯苓、炒白术、虎杖根、薏苡仁、炒党参、水杨梅根，其中水杨梅根和虎杖根可以活血化瘀，提高患者行气功能，白术、茯苓、党参、薏苡仁等药材可以补气健脾。多种药材君臣相佐，可以在清热解毒的同时，加强患者脾胃功能。药方中含有生物碱、水杨梅甲素、白藜芦醇、氨基酸、甾醇、薏苡仁油等不同成分，都可以起到抗癌的作用，实现巨噬细胞吞噬功能以及NK细胞活性的提升，对患者体内稳态平衡进行调节，从而避免复发和恶性肿瘤转移。

研究结果显示，相较于荷瘤对照组，低剂量给药组和瘤重有所增加，差异不具备统计学意义（P＞0.05），中剂量给药组和高剂量给药组均有所下降（P＜0.05）。证明复方藤梨汤可以对肿瘤的生长起到显著抑制作用，可作为重要的抗肿瘤血管药物，在临床上推广。

参考文献：

[1]方勇,秦建岭,郭勇,潘宏铭.复方藤梨根制剂抑制胃癌转移与MMP-9、TIMP-1和E-cad表达的关系研究[J].全科医学临床与教育,2010,8(1):35-38.

[2]王银辉,罗丽华,冉瑞智,张晶,江红.藤梨根制剂对卵巢癌细胞株A2780 MMP-2、MMP-9和TIMP-1表达的影响[J].临床和实验医学杂志,2018,17(18):1937-1941.

[3]甘椿椿，黄金玉，贾彬，等.藤梨根提取物抗肿瘤转移活性研究[J].中国医药科学，2020，25(15):23-26.

[4]郭洁，张晓双.太白山藤梨根提取物对喉癌干细胞侵袭和转移的影响[J].临床合理用药杂志，2020，23(12):65-66.

[5]王布江，罗远.葛根芩连汤对结肠癌大鼠病理损伤，炎症反应及肠道微生态的影响[J].现代实用医学，2020，32(10):29-32.

[6]吴幸冬，唐德才.黄芪配伍莪术对小鼠结肠癌细胞CT26黏附和迁移能力的影响[J].中医杂志，2020，61(13):77-84.

1.贵州省科技计划项目 黔科合支撑【2020】4Y076号                  

2.国家自然科学基金地区科学基金，8186150460