候选化合物对Ⅱ型胶原致Wistar大鼠关节炎模型的影响

候选化合物对Ⅱ型胶原致Wistar大鼠关节炎模型的影响

叶晓彤 郭秋平

广州医药研究总院有限公司 广东广州 510240

摘要：目的：研究候选化合物对Ⅱ型胶原导性关节炎(Collagen-induced Arthritis,CIA)模型大鼠类风湿性关节炎(Rheumatoid Arthritis,RA)，探索候选化合物HXW-1、HXW-2对Ⅱ型胶原致Wistar大鼠关节炎模型的影响，为候选化合物的临床应用提供依据。方法：本实验选取检疫合格Wistar大鼠90只，按左后足跖基础容积大小随机均衡分成阴性对照组和模型对照组，阴性对照组10只，模型对照组80只。造模测量致敏第14天的左后足足容积，计算肿胀度。根据肿胀度将模型对照组分为8组，即模型对照组HXW-1、HXW-2低、中、高剂量组甲氨蝶呤对照组，每组10只动物，全部雄性。初次致敏第15天，根据各组10mL/kg灌胃给药，每天1次，共给药14天，每天进行一般观察。测量足肿胀，并对血液学、血液生化学，组织病理学等各项检查比较。结果：（1）模型对照组造模后左后足跖容积及肿胀度明显增大，关节产生病理结构改变，提示造模成功；阳性对照药甲氨蝶呤给药后第14天大鼠的左后足肿胀度减少，并减轻关节软骨的破坏、滑膜水肿及炎症变化，提示试验系统稳定；（2）受试物HXW-2对CIA模型（Ⅱ型胶原关节炎）无治疗作用。（3）受试物HXW-1剂量为1.0mg/kg、10mg/kg时对缓解大鼠Ⅱ型胶原引起的关节炎症有一定的作用，能减轻滑膜水肿及炎症、关节周围软组织炎症，特别对关节软骨及骨质的破坏有减轻作用，减轻程度与剂量有一定的依赖关系。结论 受试物HXW-1表现出了良好的抗RA效果，具有潜在的抗RA开发利用价值，为候选化合物的临床应用提供依据。

关键词：Ⅱ型胶原诱导性关节炎；类风湿性关节炎；大鼠关节模型

1材料

1.1实验动物

雄性Wistar大鼠，体重103g~132g，由南方医科大学实验动物中心提供，实验动物生产许可证号【SCXK( 粤) 2021-0041】。大鼠饲养于 SPF 级环境，动物房环境温度 20 ～ 26 ℃，相对湿度 40% ～70%，12 h交替照明，动物自由饮水，进食，保持垫料干燥。

1.2试剂与药物

肺结核菌 H37ＲA 干粉、矿物油( Sigma 公 司 ) 、牛 Ⅱ 型 胶 原 ( Amresco 公 司 ) 、矿物油（Sigma公司）、0. 5 mol /L醋酸溶液( 广州化学试剂厂) 。动物实验仪器: 全自动血液分析仪( 2000 Ⅳ) 、血凝分 析 仪( CA-510) 均 Sysmex 公 司，足趾容积测量仪 ( PV200，成都泰盟软件有限公司) 、全自动生化分析仪( 7100，日 立 公 司 ) ，电 解 质 分 析 仪 ( Easylyte，MEDICA 公司)

2方法

2.2实验分组与给药

（1）试验共设9组，即：阴性对照组、模型对照组，HXW-1低（0.01mg/ ml）、中（0. 1mg/ ml）、高剂量组（1.0 mg/ ml）， HXW-2低（0.01mg/ ml）、中（0. 1mg/ ml）、高剂量组（1.0 mg/ ml）和阳性对照（甲氨蝶呤）组（0.1mg/ml），每组10只动物，全部雄性。各组均以10mL/kg给药，阴性对照组、模型对照组给予0.5%CNC-Na溶液。

（2）受试物和对照品的给药途径、给药频率、给药期限

受试物HXW-1、HXW-2低、中、高剂量组灌胃给药，给药容积为10mL/kg，每天一次，给药14天，阴性对照组及模型对照组给予相同体积的0.5%的CMC-Na溶液。阳性对照（甲氨蝶呤）组每周给药2次，共给药4次。

2.3模型的建立与测量方法

选取检疫合格Wistar大鼠90只，测量左、右后足足跖基础容积，按左后足基础足容积大小随机均衡分成阴性对照组10只和模型对照组80只。造模方法为在模型对照组大鼠其右后足足跖部位皮内注射6.5mg/mL自制完全弗氏佐剂0.1 mL/只，致炎第14天，测量大鼠左、右后足足跖容积，计算肿胀度。按左后足足跖肿胀度均衡分成9组，每组10只，即阴性对照组、模型对照组、HXW-1低、中、高剂量组，HXW-2低、中、高剂量组和阳性对照（甲氨蝶呤）组，全部雄性。致炎第15天根据各组要求10 mL/kg灌胃给药，每天1次，共给药14天。

2.4检查的项目、指标及要求

全身病变按5 级评分法评价：0分：无红肿；1分：趾关节红肿；2分：趾关节和足跖肿胀；3分：踝关节以下的足爪肿胀；4分：包括踝关节在内的全部足爪肿胀。每只鼠最高得分为16分，每组大鼠的平均得分为关节炎指数。

3统计分析方法

采用SPSS 18.0统计软件进行分析，数据以均数±标准差（±s）表示，进行单因素方差分析，方差齐性时，各组间两两比较采用LSD检验，方差 不齐性时，各组间两两比较采用T检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

4. 结果讨论及评价

模型对照组造模后左后足跖容积及肿胀度明显增大，关节产生病理结构改变，提示造模成功；阳性对照药甲氨蝶呤给药后第14天大鼠的左后足肿胀度减少，并减轻关节软骨的破坏、滑膜水肿及炎症变化，提示试验系统稳定。（2）AI指数造模后28天（给药后D14）关节平均分：受试物 HXW-2对CIA模型（Ⅱ型胶原关节炎）2.73±1.08**，提示无治疗作用。（3）受试物HXW-1剂量为1.0mg/kg（2.15±0.83**#）、10mg/kg（2.00±0.85**#）时对缓解大鼠Ⅱ型胶原引起的关节炎症有一定的作用，能减轻滑膜水肿及炎症、关节周围软组织炎症，特别对关节软骨及骨质的破坏有减轻作用，减轻程度与剂量有一定的依赖关系。受试物HXW-1表现出了良好的抗RA效果，具有潜在的抗RA开发利用价值，为候选化合物的临床应用提供依据。

参 考 文 献

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［2］ 陶宁，张杰．Ⅱ型胶原诱导关节炎小鼠和大鼠模型述评［J］．山 西医科大学学报，2020，51( 6) : 593-598．

［3］陈莹，杨路，冼培凤，等.不同蜂针剂量对佐剂性类风湿性 关节炎大鼠血清TNF-α、IL-1β、IL-6的影响[J].中华中医 药学刊，2017，35（5）:1151-1154.床医药文献电子杂志， 2016，3( 55) : 11022． ［16］ 韩会，程得俊．试论甲氨蝶呤及来氟米特联合应用在类风湿性 关节炎治疗中的临床效果［J］．大家健康( 学术版) ，2016，1