PCR基因扩增法检测孕妇滋养细胞中沙眼衣原体感染效果分析

PCR基因扩增法检测孕妇滋养细胞中沙眼衣原体感染效果分析

王一婷 刘红 蔡培英 

聊城市人民医院  252000

【摘要】目的 探讨聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction ._PCR)基因扩增法检测孕妇滋养细胞中沙眼衣原体感染效果。方法 选取2021年1月-2022年12月本院80例孕妇，冲洗所有孕妇宫颈内口并获得滋养细胞，同时采用PCR基因扩增法检测滋养细胞，加强对沙眼衣原体感染情况的检测，并分析不同孕期阳性率、孕妇产次、年龄与沙眼衣原体感染的相关性。结果 80例孕妇中，经检测阳性者23例，阳性率是29.00%，其中包含孕早期感染、孕中期感染、孕晚期感染分别有5例、6例、12例，占比分别是21.74%、26.08%、52.17%。23例检测为阳性孕妇中，低于25岁感染孕妇5例，25-30岁感染孕妇7例，31-35岁感染孕妇5例，35岁以上6例，占比分别是21.74%、30.43%、21.47%和26.09%。23例检测为阳性的孕妇中，产次为1次者7例，感染率是30.43%，产次为2次者8例，感染率是34.78%，产次为三次者8例，感染率是34.78%。孕妇滋养细胞中沙眼衣原体感染与孕妇孕期有关，与孕妇年龄及产次无关。结论 孕妇滋养细胞沙眼衣原体感染临床检测过程中，PCR基因扩增法的应用可明显提高诊断准确率，而且操作便捷、简单，值得采纳、推广。

【关键词】孕妇；滋养细胞；PCR基因扩增法；沙眼衣原体感染

    沙眼衣原体感染是临床常见的一种疾病，是育龄期女性性传播疾病的主要诱因，且为主要病原微生物[1]。对于伴有沙眼衣原体感染的女性而言，并发症发生率较高，常见有宫外妊娠、宫颈炎、不孕不育及尿道炎等，若妊娠后伴有沙眼衣原体感染，极易引起死产、胎膜早破及早产等；分娩期间50%左右的新生儿因产道垂直传播发生肺炎及结膜炎等疾病，对母婴身体健康及生命安全造成了严重威胁[2]。所以及早诊断和治疗尤为重要。以往，主要通过组织学检查及细菌培养等方法进行沙眼衣原体感染的检测，但是上述方法存在一定不足，比如操作复杂、繁琐，灵敏度低等，因此科学、合理的检测方法尤为重要[3]。PCR基因扩增法属于新型的分子生物学技术，在许多疾病诊断中被广泛应用。利用PCR技术扩增目标DNA片段，进行检测，能够在短时间内检出沙眼衣原体感染[4]。基于此，本文针对PCR基因扩增法检测孕妇滋养细胞中沙眼衣原体感染效果进行分析，详情如下。

1 资料与方法

1.1 资料

选取2021年1月-2022年12月本院80例孕妇，年龄：21-39岁，均值（26.34±1.47）岁；孕周：8-36周，平均（20.54±3.17）岁；产次：0-3次，平均（1.12±0.64）次。经医院医学伦理委员会批准(号)。

纳入标准：（1）自愿签署研究同意书；（2）沟通、理解及表达能力正常；（3）研究资料完整、齐全。

排除标准：（1）伴有严重心、肾、肝等器质性疾病；（2）存在凝血功能障碍、免疫系统疾病及血液系统疾病；（3）具有传染疾病史、精神疾病史；（4）合并恶性肿瘤；（5）中途选择退出。

1.2 方法

1.2.1 取材

有效冲洗子宫内口，取得孕妇滋养细胞。取材前，指导孕妇选择膀胱截石体位，采用碘伏对宫颈及阴道部位进行常规消毒。首先，在子宫探针的辅助下，确定子宫内口部位，然后采用特制塑料导管，向子宫内口下方缓慢放置，特制塑料导管除具有圆钝头外，且周围伴有侧圆孔，向特殊塑料导管中缓慢注入生理盐水（5 mL），低压注入，同时回收，其对于滋养细胞的获取有利。

1.2.2 DNA提取

试剂提取准备：采用蛋白酶k前，要求彻底混匀，放置在常温环境下保存。提取核酸：（1）选择预封装96深孔板，多次颠倒混匀，通过96孔板离心机进行1分钟离心操作，速度为500 rpm/min，目的是让磁珠及试剂可以全部抵达底部，使用期间，将封膜小心去除，避免液体溅出。（2）96深孔板的第1列、第7列中分别添加样本（200 mL）与蛋白酶k（20 mL）。在提取仪对应卡槽中放置预装板，结合磁套，程序合理选择，完成运行后，将磁套去除，并取出预装板，取出第6列及第12列对应孔中的核酸，并放置到分装好反应液的八连管中，直接进行扩增检测。

1.2.3 PCR扩增检查

检查仪器是Bio-Red CFX96实时荧光定量PCR仪。准备扩增体系试剂：自试剂盒中将Taq酶及PCR反应液取出，放置到室温中融化，均匀震荡混合，按照每分钟8000 rpm的速度进行数秒离心操作，按照相应比例将对应数量的Taq酶及PCR反应液取出，然后采用八连管装板，并根据43μL管分装反应体系进行，留置备用。将分装好反应体系的八连管中分别加入待测标本核酸与阴性质控品、阳性质控品，管盖盖紧，并放置到扩增区实施检测。电脑与扩增仪打开，采用扩增软件编辑样本名称，完成设置后，文件保存好，之后对样本进行离心操作，在仪器样品槽中放入反应管，程序启动并运行。

1.3 观察指标

观察孕妇孕期、孕妇年龄及产次与沙眼衣原体感染的相关性。

2 结果

2.1 分析孕妇孕期与沙眼衣原体感染的关系

80例孕妇中，经检测阳性者23例，阳性率是29.00%，其中包含孕早期感染、孕中期感染、孕晚期感染分别有5例、6例、12例，占比分别是21.74%、26.08%、52.17%。

2.2 分析孕妇年龄与沙眼衣原体感染的相关性

23例检测为阳性孕妇中，低于25岁感染孕妇5例，25-30岁感染孕妇7例，31-35岁感染孕妇5例，35岁以上6例，占比分别是21.74%、30.43%、21.47%和26.09%。根据上述结果分析，孕妇年龄与沙眼衣原体感染无显著关联。

2.3 分析产次与沙眼衣原体感染的相关性

23例检测为阳性的孕妇中，产次为1次者7例，感染率是30.43%，产次为2次者8例，感染率是34.78%，产次为三次者8例，感染率是34.78%。孕妇产次与沙眼衣原体感染无显著关联。

3 讨论

沙眼衣原体是导致性传播性疾病的主要病原微生物，据有关资料显示，全球范围内每年沙眼衣原体感染新发患者大约5千万。针对性旺盛阶段的男性患病率大约3-5%。相比于男性，女性患病率大约10-20%，而且很可能导致宫外妊娠、盆腔炎及不孕不育等疾病，对患者身体健康造成了严重影响。美国疾控中心血脂成沙眼衣原体感染为80年代发现的性病，并建议高危妊娠患者及早采取沙眼衣原体感染检查。针对女性而言，其他病菌或者非淋菌性感染引起的盆腔炎及宫颈炎等发生后，具有显著临床特征和症状等，但是沙眼衣原体感染的女性患者中，超过76%无明显临床症状，导致漏诊的出现。

临床上，沙眼衣原体感染诊断方法分为两类，分别是非培养法与培养法，其中培养法需要一定时间的培养，通常需要3-5日，该方法操作复杂、繁琐，且对实验有着较高的要求，进而限制了临床应用范围。非培养法包括多种，例如PCR基因扩增检查法、酶联免疫法及直接免疫荧光法等，其中PCR检测法具有检查准确度高，检查结果可靠等优势，进而被广泛应用于临床中。通过PCR法对沙眼衣原体感染进行检查过程中，通常选择宫颈分泌物、血尿等作为检测标本，尽管该检查方法操作便捷、简单，但是仅可以通过间接方法了解沙眼衣原体感染对胎儿造成的影响。本次研究中，标本提取时次采用宫颈冲洗法，进而获得滋养细胞，该方法具有如下优点：标本提取便捷，能够对胎儿预后直接预测，且对胎盘和胎儿造成的危害较小，术后感染发生率低，通过获得滋养细胞标本落实PCR检测，能够进行有效的产前检查[9]。通过本次研究发现，80例孕妇中，经检测阳性者23例，阳性率是29.00%，其中包含孕早期感染、孕中期感染、孕晚期感染分别有5例、6例、12例，占比分别是21.74%、26.08%、52.17%，孕早期、孕中期及孕晚期沙眼衣原体感染阳性率存在一定差异，而孕妇年龄、产次与沙眼衣原体感染阳性率关联并不明显，由此可见，孕妇沙眼衣原体感染与孕期存在紧密联系，但是与年龄及产次关联较小，根据研究结果分析，通过PCR基因扩增法检测孕妇滋养细胞中的沙眼衣原体感染，有助于检测准确性提高，而且具有操作便捷、简单、检测灵敏度及特异度高等优势。

PCR基因扩增法敏感度较高，可以将微量的沙眼衣原体检出。以往传统检测方法，不仅检查时间长，且样本消耗较多，但是采用PCR技术仅需要提取少量样本，便可以实施扩增反应，灵敏度较高，尽管沙眼衣原体感染程度较轻，也可以获得相对准确的检测结果，促进阳性检出率提升。同时，PCR基因扩增法特异度较高，可对沙眼衣原体与其他物质的基因序列进行鉴别诊断。除此之外，PCR基因扩增法能够在短时间内完成操作，操作相对简单，与传统培养方法比较，该检测方法仅需要数小时便可以获得相对准确的检测结果，检测时间明显缩短[10]。同时，PCR反应过程快，仅需要改变温度便可以实现扩增反应，因PCR基因扩增法具有上述优势，进而被广泛应用于临床，有助于孕妇滋养细胞中沙眼衣原体感染阳性率提升。尽管PCR基因扩增法在沙眼衣原体感染检测中具有较高的诊断准确率，但是同样存在一定不足，PCR方法需要经宫颈口获得标本，该项操作对操作人员有着较高的要求，很可能被污染，从而影响检测结果。除此之外，该方法只能对是否存在特定靶细胞进行观察，对于感染的详细信息无法提供，比如病原体菌株类型及感染程度等。因此，临床检测时需根据实际情况对检测方法进行选择，从而提高诊断准确性。

    综上所述，PCT基因扩增法在孕妇滋养细胞中沙眼衣原体感染检测中具有较高的应用价值，不仅操作便捷、简单，而且检测准确性高，值得临床采纳、推广。

参考文献

[1] 周菊梅, 雷斐, 杜文渊. HLA-DQ基因多态性与孕妇泌尿生殖道沙眼衣原体感染的关联及其对母婴结局的影响[J]. 中华医院感染学杂志, 2023, 33 (3): 448-452.

[2] 钱云芳, 徐敬轩, 周文俊. 实时荧光定量PCR技术检测妊娠晚期GBS感染的临床价值分析[J]. 系统医学, 2023, 8 (1): 70-72.

[3] 刘小琳, 杨浩, 任天凤. 荧光定量PCR法和免疫胶体金法对沙眼衣原体的检测效果对比分析[J]. 吉林医学, 2022, 43 (10): 2774-2777.

[4] 林小巧, 王洁洁. 胎膜早破孕妇B族链球菌、解脲支原体及沙眼衣原体感染影响因素分析及其不良妊娠结局[J]. 中国计划生育学杂志, 2022, 30 (10): 2358-2361.

[5] 李娜, 郭邦成, 杨丽娟, 曹守勤. 宁夏生殖道沙眼衣原体感染流行特征及基因分型分析[J]. 中国卫生检验杂志, 2022, 32 (6): 686-689.

[6] 谭放, 冯拓宇. 沙眼衣原体感染不同检测方法的对比分析[J]. 质量安全与检验检测, 2021, 31 (6): 74-76.

[7] 马倩. 实时荧光定量PCR检测妊娠晚期孕妇B族链球菌感染的临床价值分析[J]. 中国实用医药, 2021, 16 (34): 53-55.

[8] 吴英. 体外核酸扩增技术检测沙眼衣原体和淋球菌采用不同标本的比较分析[J]. 当代医学, 2021, 27 (19): 127-129.

[9] 徐宏俊, 孙毅娜, 刘全忠, 刘原君. 沙眼衣原体感染导致宿主细胞中长链非编码RNA表达谱的变化及其生物信息学分析[J]. 武警后勤学院学报(医学版), 2021, 30 (3): 7-11.

[10] 陈柳玲, 袁美英, 张志, 潘继钊. 实时荧光定量PCR检测妊娠晚期孕妇B族链球菌感染的临床分析[J]. 中国现代药物应用, 2020, 14 (7): 18-20.