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摘要:目的:实验研究蚕蛹蛋白粉增强免疫力功能。方法:以小鼠为研究对象,根据《保健食品功能检验与评价方法(2023 年版)》“一、有助于增强免疫力检验方法”,进行ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化实验、迟发型变态反应实验、抗体生成细胞检测、半数溶血值HC50的测定、小鼠碳廓清实验、小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验、NK细胞活性测定。结果:蚕蛹蛋白粉能够增强小鼠细胞免疫功能、体液免疫功能、NK细胞活性,与对照组比较有显著性差异。结论:蚕蛹蛋白粉有助于增强免疫力。
关键词:蚕蛹蛋白粉;免疫力;保健食品
蚕蛹,为蚕蛾科昆虫家蚕蛾的蛹。蚕蛹性平,味甘,无毒。《本草纲目》记载蚕蛹“为末饮服,治小儿疳瘦,长肌,退热,除蛔虫;煎汁饮,止消渴。”《医林纂要》谓蚕蛹“和脾胃,去风湿,长阳气。”可见医药著作中记载蚕蛹具有和脾胃、祛风湿、生津止渴、滋补强壮等作用。我国蚕蛹资源丰富,蚕蛹蛋白含量高,氨基酸种类丰富,且平衡性好,是一种极具经济价值和开发价值的自然资源。研究表明,蚕蛹中富含优质蛋白,占干蚕蛹质量的45%~50%。蚕蛹蛋白不仅是蚕蛹的活性成分,并且集中表现了蚕蛹的营养价值和生理功能[1]。目前,蚕蛹蛋白在食品、医药、工业、生物等领域都有广阔前景[2],具有提高免疫机能、抗疲劳、促进肝细胞再生、保护肝脏、抗癌等作用[3]。本实验以蚕蛹蛋白粉为受试物,对蚕蛹蛋白粉的增强免疫力功能进行研究,为蚕蛹蛋白粉作为保健食品的开发应用提供理论依据。
1 材料与方法
1.1受试物
本研究受试物为蚕蛹蛋白粉,是蚕蛹经干燥、粉碎、脱脂、酶解、脱色、分离、浓缩、干燥等主要工艺制得的淡黄色粉末,人体口服每日推荐用量0.9g,成人体重按60kg计算,折合剂量0.015 g/kg·bw。
1.2受试动物及分组
湖南斯莱克景达实验动物有限公司提供的SPF级ICR雌性小鼠200只,体重18g~22g。实验动物生产许可证号为SCXK(湘)2021-0002。受试动物分为A、B、C、D、E五大组,每一大组40只小鼠。A组,进行小鼠碳廓清实验;B组,进行ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化实验、NK细胞活性测定;C组,进行小鼠脏器/体重比值测定、半数溶血值HC50的测定和抗体生成细胞检测;D组,进行迟发型变态反应实验;E组,进行小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验。每大组按小鼠体重随机分为4小组,即空白对照组和低、中、高剂量组,每一小组10只小鼠。
1.3实验条件
为屏障环境,实验期间环境温度22℃~26℃,湿度45%~70%。
1.4剂量选择及样品处理
根据人体口服推荐用量,设蚕蛹蛋白粉低、中、高剂量分别为0.075 g/kg·bw、0.150 g/kg·bw、0.450 g/kg·bw(分别相当于人体推荐用量的5、10、30倍)。低、中、高剂量组受试液配制时分别取样品0.50g、1.00g、3.00g加蒸馏水定容至200mL。各组分别给予受试动物灌胃,每天灌胃一次,灌胃体积为0.2 mL/10g·bw,连续灌胃30天。空白对照组灌胃予以等体积的蒸馏水。
1.5 实验方法
根据《保健食品功能检验与评价方法(2023 年版)》“一、有助于增强免疫力检验方法”进行小鼠体重、脏器/体重比值测定、ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化实验(MTT法)、迟发型变态反应实验(足跖增厚法)、抗体生成细胞检测(Jerne改良玻片法)、半数溶血值HC50的测定、小鼠碳廓清实验、小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验(半体内法)、NK细胞活性测定(乳酸脱氢酶测定法)。
2 实验结果
2.1 小鼠体重、脏器/体重比值测定结果
与对照组比较,蚕蛹蛋白粉各剂量组小鼠实验初、中、末期体重、体重增长、脾脏/体重比值、胸腺/体重比值均无显著性差异(P>0.05),说明蚕蛹蛋白粉对受试小鼠体重、脏器/体重比值无明显影响。
2.2 小鼠细胞免疫功能、体液免疫功能测定结果
与对照组比较,蚕蛹蛋白粉低、中、高剂量组小鼠足跖肿胀度差异有显著性(P<0.05),ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化能力差异无显著性(P>0.05),说明蚕蛹蛋白粉能够提高小鼠迟发型变态反应能力,细胞免疫功能结果阳性。与对照组比较,蚕蛹蛋白粉低、中、高剂量组小鼠溶血空斑数、半数溶血值差异均有显著性(P<0.05),说明蚕蛹蛋白粉能够提高小鼠抗体生成细胞数及半数溶血值,体液免疫功能结果阳性,测定结果见表1。
表 1小鼠细胞免疫、体液免疫功能测定结果(n=10,x±s)
分组 | 细胞免疫 | 体液免疫 | ||||
足跖肿胀度/(mm) | 不加ConA的OD值 | 加ConA的OD值 | 淋巴细胞增殖能力(OD差值) | 溶血空斑数/ (个/106个脾细胞) | 半数溶血值 | |
空白对照组 | 0.38±0.24 | 0.186±0.025 | 0.214±0.017 | 0.028±0.014 | 118±35 | 130.01±26.55 |
低剂量组 | 0.66±0.23* | 0.189±0.018 | 0.220±0.015 | 0.031±0.016 | 199±61* | 164.15±30.12* |
中剂量组 | 0.69±0.20* | 0.184±0.021 | 0.219±0.019 | 0.035±0.011 | 205±50* | 173.34±29.16* |
高剂量组 | 0.78±0.25* | 0.188±0.019 | 0.225±0.022 | 0.037±0.018 | 224±46* | 180.91±27.34* |
注:“*”表示与空白对照组比较,P<0.05
2.3 小鼠单核-巨噬细胞功能、NK细胞活性测定结果
与对照组比较,蚕蛹蛋白粉各剂量组小鼠单核-巨噬细胞碳廓清吞噬指数、巨噬细胞吞噬鸡红细胞吞噬率、吞噬指数差异均无显著性(P>0.05)。与对照组比较,蚕蛹蛋白粉低、中、高剂量组小鼠NK细胞活性增强,差异均有显著性(P<0.05),测定结果见表2。
表2小鼠单核-巨噬细胞功能、NK细胞活性测定结果(n=10,x±s)
分组 | 单核-巨噬细胞功能 | NK细胞活性/(%) | ||
碳廓清指数 | 吞噬率/(%) | 吞噬指数 | ||
空白对照组 | 5.88±0.75 | 19.2±4.2 | 0.80±0.21 | 23.28±5.21 |
低剂量组 | 5.97±0.84 | 22.3±6.7 | 0.91±0.19 | 33.15±6.13* |
中剂量组 | 6.25±0.91 | 23.5±5.0 | 0.89±0.30 | 34.96±7.22* |
高剂量组 | 6.83±1.04 | 24.0±7.1 | 0.97±0.24 | 35.71±6.94* |
注:“*”表示与空白对照组比较,P<0.05
3讨论
本研究以蚕蛹蛋白粉为受试物,小鼠灌胃给予受试物30天后,可增强小鼠迟发型变态反应能力,提高小鼠溶血空斑数、半数溶血值,增强小鼠NK细胞活性,对小鼠细胞免疫功能、体液免疫功能、NK细胞活性具有显著增强作用,说明蚕蛹蛋白粉有助于增强免疫力。蚕蛹蛋白粉可作为保健食品原料开发应用。
参考文献:
[1]季晓娇,闫文杰,张婧婕,等.蚕蛹蛋白制备应用与功能特性的研究进展[J].食品与发酵工业,2019,45(18):277-283.
[2]胡建平,刘可桃.蚕蛹蛋白的提取工艺及综合利用研究进展[J].安徽农学通报(上半月刊),2011,17(11):185-186+223.
[3]施自伦,李朝品,刘群红.蚕蛹蛋白的现代研究概况[J].安徽农业科学,2009,37(07):3051-3052+3088.