石蜡切片后粘胶技术在免疫组化染色中的应用

石蜡切片后粘胶技术在免疫组化染色中的应用

黄凯林

大冶市中医院  435100

摘要：目的：研究石蜡切片后粘胶技术在免疫组化染色中的应用效果。方法：选择外院会诊待未经处理的石蜡切片白片50张，石蜡块20个（10个蜡块曾在免疫组化染色中发生脱落），按照常规石蜡切片，然后做粘胶技术进行处理，分析石蜡切片后粘胶技术在免疫组化染色中的应用效果。结果：经过石蜡切片后粘胶技术处理的切片后，不管是通过酶消化，还是通过微波处理，均未产生掉片情况的产生，通过免疫组化染色后，无非特异性的北京，染色效果和未经任何处理的切片大致相符，而未经过粘胶处理的出现部分或者全部的组织切片从载玻片上脱落。结论：在免疫组化染色中应用石蜡切片后粘胶技术进行处理，可及时补救可能发生脱落的切片，应用价值高，值得推广。

关键词：石蜡切片；粘胶技术；免疫组化染色技术；应用效果

免疫组化染色技术在病理诊断中，作用积极，该技术更多的是应用于鉴别诊断肿瘤，并且制成的良好的组织切片属于免疫组化染色的基础以及前提条件，石蜡切片属于病理检验的常规方法，常规石蜡切片可能会发生切片脱落，影响染色效果。而在石蜡切片后，从载玻片上脱落，会对诊断效果产生影响，而采用粘胶技术进行处理，可降低脱落率，保证免疫组化染色处理效果[1]。本文，作者选择外院会诊待未经处理的石蜡切片白片50张，石蜡块20个，分析石蜡切片后粘胶技术的应用效果，现做出如下阐述。

1. 资料与方法

1.1一般资料

选择外院会诊待未经处理的石蜡切片白片50张，石蜡块20个（10个蜡块曾在免疫组化染色中发生脱落），按照常规石蜡切片，切片厚度未4μm，将其附贴在没有经过粘合处理的载玻片上，在60℃的温箱中炙烤切片60min，取出备用。

1.2方法

不同的病理切片需要通过常规脱蜡至水洗，并使用丙酮洗两到三次，在配置有APES胶的立式染色杠上停留一到三分钟，取出切片，通过丙酮将多余的胶液进行清洗，再使用蒸馏水清洗三次，并将其放入在PBS液中进行洗涤，使用3%的双氧水溶液持续处理十分钟，并使用PBS液进行洗涤。

1.3抗原修复技术

1.3.1酶消化

切片使用0.05%胰酶在37摄氏度下消化十分钟，并使用蒸馏水清洗三次。

1.3.2微波修复切片需要放置在耐高温的塑料染色架上，转入含pH值为6.0的柠檬酸缓冲液中，并使用720W的微波炉进行三次照射，每次持续照射5分钟，中途需要停止2分钟。

1.4免疫组化染色技术

通过两种修复法修复的切片，并使用PBS液清洗三次，封闭正常血清，然后根据需求，向其中添加不同稀释滴度的抗体，并将其放置在4摄氏度的冰箱中放置，然后通过常规ADC技术进行处理，通过DAB进行显色，使用Mayer苏木精浅染细胞核。

2. 结果

经过石蜡切片后粘胶技术处理的切片后，不管是通过酶消化，还是通过微波处理，均未产生掉片情况的产生，通过免疫组化染色后，无非特异性的北京，染色效果和未经任何处理的切片大致相符，而未经过粘胶处理的出现部分或者全部的组织切片从载玻片上脱落。

3. 讨论

采取及时、合理、有效的固定是制作好的组织切片的基础，也是采取免疫组化染色的前提。若在处理组织时，时间过长，或者温度过高，则可能会导致抗原发生流失，我们应用快速脱水机设定的快速石蜡程序，防止组织处理时间过长、温度过高，减少对抗原的影响因素，能够将甲醛对蛋白的交联时间减少。并且免疫组化鉴别诊断技术，能够对微小病灶组织以及术中的活检组织进行鉴别。免疫组化鉴别技术的原理是通过磁力搅拌器的技术，在保持合理温度以及压力的基础上，可使溶液分子运动加快，使脱水溶液和组织内的水分交换以及透明时对组织的渗透力得到提升，并能够使组织的处理效果明显加强，使组织的固定、脱水以及透明浸蜡时间加快，极大程度的减少组织制片时间，整个程序在三个半小时内就可以完成。

免疫组织化学技术属于免疫学的方法，通过对抗体进行标记，可将组织细胞中的抗原方法进行寻找，进而对组织细胞中的化学成分的科学技术进行检测。免疫组织化学技术的优势较多，包括敏感性高、特异性强，成为现代病理诊断中不可或缺的辅助性鉴别工具。在通过快速石蜡切片进行免疫组织化学染色时，热修复技术能够更有效地修复细胞核抗原，高温高压抗原对喷气计进行修复时，在修复后2-2.5min之间，可获取最佳的修复效果[2]。抗原修复技术必须达到规定的温度，若温度过高，则会对组织结构产生破坏作用，还会引发脱片，无法充分暴露过弱的抗原，从而产生假阴性反应。在快速石蜡切片中应用免疫组织化学技术，可以使制片时间明显缩短，工作效率显著提升，病理诊断依据的准确性也更高，能够为临床手术的快速诊断提供有力依据。

对于防脱片的处理，一般是通过在切片前预先使用放脱片的胶液浸泡载玻片，该方法虽然可以避免切片脱落，但因为会诊的组织块以及切片仍然可能会发生脱片情况，该情况可能和组织的处理不当有一定关系，尤其是在未使用浸胶处理的切片，减少会诊的切片数量，发生脱片后，会增加诊断难度，并且无法成功补救。采取粘胶技术，在切片通过脱蜡至水后，再做粘胶处理，可及时补救可能发生脱落的切片，同时，成功配置的胶液可以直接滴加在组织切片周围，可使胶液的用量减少，同时，可避免在载玻片上的胶不均匀引发脱片

[3]。

值得注意的是，在实际操作中需要注意：①取材时，组织块的体积最好保持在1cm×1cm×0.2cm，但厚度需要得到控制，若组织过后，无法有效并充分的固定，进而对染色结果以及诊断效果产生影响；②脱水透明时需要掌握好脱水时间、浸蜡时间以及温度，若过高在，则会发生脱片情况，并且会严重破坏组织中的抗原性；③需要严格按照免疫组化染色操作，使用PBS缓冲液进行充分冲洗，修复组织抗原，能够将背景着色以及非特异性着色量减少，同时，能够将染色的敏感性提升。

综上所述，在免疫组化染色技术中应用石蜡切片后粘胶技术处理，可避免脱片，或者及时补救脱片。

参考文献

[1]弓玉祥, 陈平圣, 杨旻宇. 石蜡切片免疫组化套染PAS在肾活检组织病理诊断中的应用[J]. 临床与实验病理学杂志, 2020, 36(1):108-110.

[2]李丽, 陈菲, 包春娟,等. TRAP染色与免疫组化套染技术在骨组织损伤修复染色中的应用[J]. 临床与实验病理学杂志, 2021, 37(5):622-623.

[3]李贤龙, 王鹏. 细胞块切片免疫组化染色技术在对胸腔积液进行病理诊断中的应用[J]. 当代医药论丛, 2021, 19(16):121-123.