应用荧光定量PCR检测乙型肝炎DNA的临床分析

应用荧光定量PCR检测乙型肝炎DNA的临床分析

 崔紫云   孟营

呼伦贝尔市第四人民医院检验科   内蒙古 呼伦贝尔  021000

【摘要】目的：研究荧光定量PCR检测乙型肝炎DNA的效果。方法：纳入169例HBV感染者和31例正常人，使用荧光定量PCR法对其血清HBV-DNA含量进行检测，研究时间是2023年3月-5月。结果：对比HBsAg、HBeAg阴性组，HBsAg、HBeAg阳性组具有更高的HBV-DNA检出率与含量。虽然HBV感染者的类型不同，但是都可检出HBV-DNA。结论：荧光定量PCR检测可以将HBV感染、复制与病程改变准确呈现出来，有利于诊断和治疗乙型肝炎。

【关键词】荧光定量PCR；乙型肝炎；DNA

引言：从全球看，乙型肝炎患者已经超过3.5亿人，我国属于乙型肝炎高发区，本文应用的荧光定量PCR检测法优势众多，比如，高度准确率、快速检测、重复检测等，现报道如下[1]。

1资料与方法

1.1一般资料

在2023年3月-2023年5月来我院诊治乙型肝炎患者中，选择169例，再选取31例正常人，利用荧光定量PCR检测其血清HBV-DNA含量。

1.2方法

1.2.1 仪器与试剂

扩增仪型号是博日的EQD-96A，采取北京博奥快速核酸提取仪，提取与扩增试剂均为艾康试剂；
1.2.2 方法
（1）提取HBV-DNA
    采取手工提取法，在100ml血清中加入等量DNA浓缩液，均匀震荡5秒;以每分钟12000rpm的速度进行十分钟离心操作；舍弃上清液，将20ul提取液加入沉淀中，利用核酸提取仪振摇十分钟，调节温度到100℃，加热9-11分钟；以同样速度再进行十分钟离心操作。
（2）扩增PCR
    930℃2min；930℃45s;550℃60s;10个循环；930℃30s；550℃45s；30个循环；采集荧光点，550℃45秒。

1.3观察指标

  HBV-DNA含量与各类型感染者关系；S系统与HBV-DNA关系；e系统与HBV-DNA关系

1.4统计学分析

HBV-DNA平均拷贝数应用求对数平均值法进行计算，阴性结果不参与统计。

2结果

2.1 各类型HBV感染者血清HBV-DNA水平对比

表1.HBV-DNA含量与各类型感染者关系

2.2 169例HBV感染血清S系统改变与HBV-DNA水平对比

表2.S系统与HBV-DNA关系

2.3 169例HBV感染者血清e系统改变与HBV-DNA水平比较

表3.e系统与HBV-DNA关系

3讨论

过去经常应用ELISA诊断HBV感染，人体对乙型肝炎病毒免疫反应表现出不同状态，此法以此为依据，在ng水平对DNA表达产物和抗体应答系统进行检测，间接呈现HBV-DNA复制状况[2]。免疫荧光定量PCR法可以对乙型肝炎病毒量进行检测，实现对乙型肝炎病毒自身的直接检测，可以将人体携带病毒量的状态高度准确反映出来[3]。
    本次研究结果表明，122例HBsAg（＋）患者中HBV-DNA阳性率是60.66%（74/122），平均拷贝数105.74±1.73/ml，34例HBsAg（＋），HBeAg（＋），HBcAb（＋）患者血清中，检出31例HBV-DNA，阳性率91.18%，平均拷贝数106.78±1.17，对比其余组有显著差异，表明HBV具有较强的活跃度和感染性，此时血清有高滴度的病毒量。结合以上数据可知，阳性患者HBV-DNA含量比阴性患者高，说明评判HBV复制的重要指标是HBeAg。另外，HBeAg阴性、HBeAb阳性或阴性患者，均有高滴度HBV-DNA存在于其血清中。应当关注HBeAb阳性HBV-DNA含量高水平患者，监测其病情变化，第一时间给予抗病毒治疗。

研究肝癌、肝硬化、肝炎中HBV-DNA含量，组间差异显著（P＜0.05），乙型肝脏损害加重后，反而降低乙肝病毒复制率，乙型肝炎复制受到肝脏纤维化与占位性病变影响，可能关联病毒前C区基因突变[4]。

综上所述，荧光定量PCR检测乙型肝炎DNA与血清免疫学检查联合，能够对疾病严重程度和传染性进行判断，有利于诊断和治疗此疾病。

【参考文献】

[1]赵云,刘兴祥,徐云芳,王莉娟,堵妍,崔婷.标本不同状态对荧光定量PCR检测乙型肝炎病毒DNA的影响[J].中国卫生检验杂志,2019,29(18):2254-2256+2259.

[2]李泽锐,高静.荧光定量PCR检测HBV-DNA与化学发光酶免疫法检测乙型肝炎五项的相关性研究[J].中国医药指南,2018,16(26):161-162.

[3]吴晓利. 实时荧光定量PCR与PCR-ELISA在乙型肝炎病毒DNA定量检测中的应用比较[J]. 生物化工,2021,7(3):97-98,101. 

[4]陈亘志. 荧光定量PCR仪检测HBV DNA结果比对分析[J]. 医疗装备,2017,30(8):36-37.