2.山东第一医科大学临床与基础医学院组织学与胚胎学系 山东 济南250000
【摘要】 目的 探究灵归方对环磷酰胺诱导弱精症小鼠的干预治疗作用及机制。方法 40只雄性小鼠随机分为五组:对照组、模型组、灵归方低、中、高剂量组,对后四组小鼠腹腔注射环磷酰胺建立弱精症小鼠模型,灵归方组小鼠进行灵归方灌胃4周,末次给药24h后称重麻醉取小鼠睾丸组织制作病理切片、计算小鼠精子畸形率、活动率,进行统计学分析,评价灵归方对弱精症小鼠的治疗作用。结果 模型组小鼠睾丸组织生精小管内精子数目显著减少,各级生精小管排列紊乱,精子畸形率及活动率明显下降。与模型组相比,灵归方组精子数目增多,生精小管结构规则,精子畸形率及活动率显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 灵归方通过补肾益精对环磷酰胺诱导的小鼠弱精症有治疗作用。
关键词:弱精症;环磷酰胺;灵归方
中图分类号: Q813.7 文献标识码:A
第一作者:孙明玉,2019级临床医学本科专业在读本科生
通讯作者: 隋宏书,Tel:18668956682 ,E-mail:hongshusui@163.com
基金资助:山东第一医科大学校级大学生创新创业训练计划项目(No.2022104391195)
弱精症表现为精子活力低下,已成为影响男性不育的最主要因素之一。近年来,有学者从病因入手探究治疗弱精症的方法[1],但尚无进展。灵归方是由枸杞子、菟丝子、红景天等组成的配方中药,研究表明灵归方在补肾活血、提高精子活力方面具有明显的功效[2]。因此本研究以灵归方为切入点,通过腹腔注射环磷酰胺建立小鼠弱精症模型,检测各项相关指标探究灵归方对小鼠弱精症的治疗作用。
2.材料与方法
2.1实验材料
2.1.1实验动物
40只雄性清洁级KM小鼠(济南朋悦实验动物繁育有限公司),9-10周龄,体重20±1.5g。动物房室温21-25℃,相对湿度50-60%,小鼠自由饮水采食。
2.1.2实验试剂
环磷酰胺粉剂(济南药店);灵归方配方颗粒(济南药店)。
2.2弱精症模型建立
40只雄性小鼠随机均分为5组,分别为对照组、模型组、灵归方低、中、高剂量组,模型组、灵归方组腹腔注射环磷酰胺,每天1次,共14天。
2.3治疗弱精症小鼠
弱精症小鼠模型建立后进行灵归方灌胃治疗。灵归方低、中、高剂量组分别以8g/kg、14g/kg、20g/kg剂量灌胃,对照组和模型组灌胃等量生理盐水,每天一次,共4周。
2.4检测指标
2.4.1小鼠睾丸组织病理检测
末次给药后禁食24小时,取小鼠左侧睾丸组织制作病理切片,苏木素-伊红(HE)染色于显微镜下观察睾丸组织形态变化。
2.4.2小鼠精子畸形率检测
取小鼠右侧附睾尾部放入培养皿,制成精子悬液,取20l制成临时装片,油镜下观察计数精子畸形数并计算畸形率。
2.4.3小鼠精子活动率检测
取10l精子悬液加到37℃预热的精子计数板上,选取6个清晰视野计数精子数并计算活动率。
2.5数据统计学分析
实验数据处理均由SPSS27.0软件分析,作图软件选用 GraphPad Prism 8.0绘制,P<0.05有统计学意义。
3 结果
3.1 小鼠睾丸组织病理变化
图1. 各组小鼠睾丸组织病理变化(H&E染色,A. 对照组;B. 模型组;C.灵归方组)
对照组生精小管形态结构正常,充满精子细胞;模型组小鼠精子细胞数目明显减少,生精细胞排列不齐,生精小管内可见脱落的生精细胞,睾丸间质增生明显;灵归方组生精小管排列整齐,生精小管内可见较多精子。
3.2 小鼠精子畸形率的变化
图2. 各组小鼠精子畸形率的检测
与对照组小鼠相比,模型组小鼠精子畸形率升高明显;与模型组小鼠相比,灵归方组小鼠精子畸形率下降(P<0.05),较对照组升高。
3.3 小鼠精子活动率
图3. 各组小鼠精子活动率的检测
与对照组小鼠相比,模型组小鼠精子活动率明显下降,灵归方组小鼠精子活动率较模型组明显升高(P<0.05),较对照组小鼠降低。
4.讨论
现代医学认为弱精症的发生与生殖道感染、遗传性疾病等诸多因素有关,具体分子机制尚未清楚[3]。西医对于弱精症的疗效不够满意[4],根据中医学观点,弱精症多为肾精气阳衰,血瘀造成睾丸、附睾等微循环障碍,进而出现弱精症[5],因此从补肾益精活血方面入手是治疗弱精症的重要方法。研究表明,灵归方配方成分菟丝子对下丘脑-垂体-性腺轴有兴奋作用,显著提高精子活力等,枸杞多糖可改善精子细胞内线粒体活性[6]。
本实验严格按照随机化、对照重复的原则,对5组小鼠进行了模型评价,肯定了腹腔注射环磷酰胺诱导的小鼠弱精症模型的建立。灵归方组小鼠经过4周灵归方灌胃处理,生精小管内精子数目明显增加,各级生精小管形态规则,未见明显的间质增生,证明了灵归方对弱精症小鼠的干预治疗作用,治疗机制可能是通过改善肾功能,益气补精来实现的。本项目将继续深入研究其具体分子机制,为弱精症的发病机制、干预措施等研究提供新思路。
参考文献
[1]Zhang HL, Zhao LM, Mao JM, et al.Sperm retrieval rates and clinical outcomes for patients with different causes of azoospermia who undergo microdissection testicular sperm extraction-intracytoplasmic sperm injection. Asian J Androl. 2021 Jan-Feb;23(1):59-63.
[2]杜冠潮,郭俊,郭军,等.郭军教授针药并用治疗特发性少弱精子症临床经验[J].中国医药导报,2021,18(22):133-136.
[3]Schuppe HC, Pilatz A, Hossain H, et al. Urogenital Infection as a Risk Factor for Male Infertility. Dtsch Arztebl Int. 2017 May 12;114(19):339-346.
[4]罗丽燕, 史莉. 无精子症患者生育压力对生活质量的影响及相关性 研究 [J] . 中华男科学杂志, 2018, 24 (5) : 425-430.
[5]李茂林,吴桂杰,周振环,等.颐和春胶囊对少弱精子症治疗效果的临床观察[J].中华男科学杂志,2020,26(06):543-546.
[6]仇雯丽,杨凤莲.治疗少弱精子症常用中药分子机制研究新进展[J].医学理论与实践,2021,34(20):3529-3531.
基金资助:山东第一医科大学校级大学生创新创业训练计划项目(No.2022104391195)