海伦市人民医院 黑龙江 海伦 152300
摘要:目的:通过研究找出磁珠式提取仪(下文称“提取仪”)污染后最佳处理方式。方法:将实验室中被严重污染的所有提取仪分两种方式处理,一种通过紫外线、化学消毒剂方法处理,对污染的提取仪紫外线照射2h后,喷洒核酸清除剂,擦净后用1000mg/L含氯消毒剂擦拭提取仪内各个部件;另一种通过物理方法处理,将提取仪打开后置于室外通风处或用较大功率风扇进行通风。通过两种不同处理方式的比较,观察对提取仪核酸污染的处理效果。结果:通过两种不同处理方式的比较,室外通风或用较大功率风扇通风处理提取仪污染比紫外线、化学消毒剂处理更有效。结论:提取仪污染可以通过室外通风或者用较大功率风扇进行处理。
关键词:新型冠状病毒,提取仪,污染
Comparisonof different treatmentsfornucleicacid pollution in 2019-nCoV
He Hao,Zhao Liying
People’s Hospital of Hailun, Heilongjiang Province,152300
Abstract: Objective: The purpose of this syudy is to find out the best treatment of nucleic pollution in 2019-nCoV. Method: All the polluted extractors in the laboratory were treated in two methods. One method was treated with ultraviolet light and chemical disinfectant, The other method was treated by physical method. By comparing the two different methods, we will observed the effect of the two methods. Results: Through the comparison of the two different methods, outdoor ventilation was more effective than ultraviolet radiation and chemical disinfectant. Conclusion: Extractor's pollution can be handled by outdoor ventilation.
Key words: 2019-nCoV, extractor, pollution
核酸检测技术是临床上常用的一种病原学检测技术,因其灵敏度高、特异性强的特点而被用于新型冠状病毒肺炎确诊,由于核酸检测技术有着超高的灵敏度,临床核酸检测实验室很难避免污染的发生。2020年6月按照国务院《关于加快推进新冠病毒核酸检测的实施意见》的要求,二级以上医院全面建设核酸检测实验室并逐步达到新型冠状病毒核酸检测要求。全自动磁珠式核酸提取仪(下文称“提取仪”)因其操作方便、提取效率高,被绝大多数实验室使用。相较于核酸扩增实验室内其它设备,全自动磁珠式核酸提取仪结构较为复杂,仪器内空腔较多,工作过程中需产生频率较高震荡,一旦发生严重污染,处理起来较为复杂,甚至可能导致实验室瘫痪。因此,核酸检测实验室迫切需要有效的清除提取仪污染的方案。本研究旨在观察本实验室实践过程中对提取仪污染不同处理方式的效果,为可能出现的提取仪污染提供参考。
1、材料与方法
1.1、试剂与仪器
2019-nCoV核酸检测试剂盒购自上海伯杰生物科技有限公司;金迪安自动核酸提取仪(型号EB-1000)购自杭州迪安生物技术有限公司;全自动荧光定量PCR仪购自杭州博日科技有限公司;核酸清除剂购自济南鑫贝西科学仪器有限公司;健之素消毒泡腾片购自北京长江脉医药科技有限责任公司。
1.2、不同处理方式清除污染方法
1.2.1、紫外线、化学消毒剂:对1台发生严重污染的提取仪将提取仪后、左、右侧挡板拆除,紫外线照射2h后,喷洒核酸清除剂,擦净后用1000mg/L含氯消毒剂擦拭提取仪内各个部件。
1.2.2、物理方法:对另外1台发生严重污染的提取仪将提取仪后、左、右挡板打开后,置于空旷处通风处理。
1.2.3、采样:空运行1次提取仪提取程序后静置1h,用棉拭子擦拭提取仪底、左、右侧表面,然后将棉拭子置于装有100ul ddH2O的EP管内。紫外线、化学消毒剂处理分别在空运行程序后、紫外线照射2h后、核酸清除剂处理后、含氯消毒剂擦拭后分别采样,分别为第1次、第2次、第3次和第4次;物理方法处理分别在空运行程序后、通风处理24h、48h后分别采样,分别为第1次、第2次和第3次。
1.2.4、扩增:将装有棉拭子的EP管使用涡旋仪充分震荡混匀后,按照伯杰2019 -nCoV核酸检测试剂盒说明书加入反应体系中,上机扩增。
2、结果
2.1、紫外线、化学消毒剂处理提取仪污染效果
ORF1ab、N基因不同采样时机Ct值比较:第1次=第2次=第3次<第4次(见表1)。
表1.紫外线、化学消毒剂处理提取仪后Ct值(n=2)
检测基因 | 紫外线、化学消毒剂处理 | |||
第1次 | 第2次 | 第3次 | 第4次 | |
N | 31.53±0.54 | 31.22±0.06 | 31.51±0.64 | 33.25±0.29 |
ORF1ab | 30.24±0.19 | 30.90±0.63 | 30.95±0.14 | 33.29±0.17 |
2.2、物理方式处理提取仪污染效果
ORF1ab、N基因不同采样时机Ct值比较:第1次<第2次<第3次(见表2)。
表2.物理通风处理提取仪后Ct值(n=2)
检测基因 | 物理通风 | ||
第1次 | 第2次 | 第3次 | |
N | 31.51±0.60 | 35.70±0.33 | 37.03±0.24 |
ORF1ab | 30.26±0.33 | 34.77±0.14 | 36.88±0.91 |
2.3、两种不同处理方式的比较
两种不同处理方式处理后,ORF1ab、N基因Ct值比较:紫外线、化学消毒剂<物理方式,且两者之间存在统计学意义(P<0.05)。
3、讨论
核酸实验室在运行过程中不可避免的会发生污染,轻微的污染通过紫外线照射、70%乙醇擦拭、核酸清除剂喷洒和含氯消毒剂擦拭等方式清除[1][2];但是一旦发生严重污染,如产物扩增区扩增产物溢出,将会造成实验室的严重污染,影响检测质量和检测时效。当发生严重实验室污染时,实验室通常将已经拆封的一次性使用物品丢弃,可回收物品放入含氯消毒剂内浸泡,台面、生物安全柜、洁净工作台等通过含氯消毒剂擦拭,空气污染可通过紫外线照射消除[3][4]。但是提取仪污染消除一直是处理严重污染的难题,磁珠式核酸提取仪一旦发生严重污染,由于提取仪的工作特性,污染的核酸片段将通过孔隙等进入舱内,当再次使用提取仪时,舱内的核酸片段重新通过孔隙进入提取仓,造成正在提取的标本污染,出现假阳性结果。因此,核酸实验室需要一种处理提取仪污染的有效方式。
本研究选取了两种本院核酸检测实验室处理提取仪核酸污染的两种处理方式,一种是用紫外线、化学消毒剂处理的方式消除,另一种是直接物理通风的方式消除。通过两种方式的比较,发生严重污染后,使用紫外线照射和核酸清除剂并不能有效清除提取仪产生的污染,使用1000mg/L含氯消毒剂后,提取仪污染程度降低,但是并不能确定是否是由于多增加的擦拭次数产生的清除效果。使用物理通风的方式清除提取仪核酸污染有较好的效果,且通风时间越长清除效果越好。两种处理方式综合比较后发现,物理通风方式处理提取仪核酸污染效果优于紫外线、化学消毒剂方式处理效果。综上所述,当提取仪出现严重感染时,可以将核酸提取仪搬到室外空旷处通风处理。
参考文献
[1]庞宏兵,丁鑫泽,王万绪。不同消毒方式对现场DNA检出影响研究[J]。中国法医学杂志,2021,36(1):78-81.
[2]徐英春,胡继红,王瑶,等。新型冠状病毒实验室检测专家共识[J]。协和医学杂志,2021,12(1):18-26.
[3]陈茂义,胡捷,毛春林,等。含氯消毒剂对新型冠状病毒核酸破坏效果研究[J]。公共卫生与预防医学,2020,31(3):22-24.
[4]李云龙,张健,魏艳秋,等。分子诊断实验室去除核酸污染的方法学研究[J]。生物工程学报,2021,37(2):673-679.