溶出度方法验证浅析

溶出度方法验证浅析

黄凤鸣

浙江海正动物保健品有限公司 浙江 杭州   311400

摘要：根据美国药典<1092>章节溶出度方法的开发和验证，结合FDA、ICH指南和中国药典方法验证指导原则，对溶出度方法验证需要研究的项目、操作要求和认可标准进行了探讨。

关键词：溶出度；方法验证

Validation of dissolution procedure

Huang Fengming (Zhejiang Hisun Animal Healthcare pharmaceutical (Hangzhou) Co., Ltd, Hangzhou 311400)

ABSTRACT: Discussed the validation characteristics, operation requirements and acceptance criteria for dissolution procedure according to USP <1092> general chapter combined with FDA and ICH guidelines and ChP general chapter.

KEY WORDS: dissolution, method validation

关于分析方法验证相关指南在以下文献中有描述：中国药典2020年版附录9101[1]、美国药典通则<1225> Validation of Compendial Procedure[2]、FDA工业指南：Analytical Procedures and Methods Validation for Drugs and Biologics[3]、ICHQ2: VALIDATION OF ANALYTICAL PROCEDURES: TEXT AND METHODOLOGY[4]。由于溶出度分析方法验证对制剂样品质量要求比较高，例如含量均匀度要求窄，溶出行为均一，在使用到制剂样品的验证项目中需要特别注意，制剂样品质量会成为影响溶出度分析方法验证成败的关键。关于溶出度分析方法验证指导原则在美国药典通则<1092>THE DISSOLUTION PROCEDURE: DEVELOPMENT AND VALIDATION[5]中有相关介绍。

1. 专属性

专属性系指在其他成分(如杂质、降解产物、辅料等）存在下，采用的分析方法能正确测定被测物的能力。溶出度专属性应考察安慰剂、其它活性成分或降解产物的影响。安慰剂应包括除活性成分外所有的辅料和包衣材料。与标准溶液的响应值比较，干扰应不超过2%。

如果安慰剂干扰超过2%，分析方法需要做些改变，例如选择其它检测波长、扣除参比波长吸收、改变数据处理方式（例如一阶微分）、采用其它分析技术（例如HPLC）、去除干扰物。

2. 线性和范围

线性系指在设计的范围内，测定响应值与试样中被测物浓度呈比例关系的程度。

应在规定的范围内测定线性关系。可用同一对照品贮备液经精密稀释，或分别精密称取对照品，制备一系列对照品溶液的方法进行测定，至少制备5 份不同浓度的对照品溶液。范围应包括药物释放的最低浓度和最高浓度。浓度范围应不超过方法和仪器的线性范围。配制线性标准溶液时可采用有机溶剂来提高药物溶解度，但最终溶液中有机溶剂的比例不能超过5%（v/v）[5]。以测得的响应信号对被测物的浓度作图，观察是否呈线性，再用最小二乘法进行线性回归。通常，线性相关系数的平方r2应不超过0.98，截距应接近0[5]。

3. 准确度/回收率

准确度系指采用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度，一般用回收率（％ )表示。准确度应在规定的范围内测定。

准确度/回收率研究通常是通过配制包含药物活性成分和其它成分（例如辅料、包衣材料，胶囊壳）样品进行的，范围包含药物释放的最低浓度和最高浓度。准确度/回收率溶液可以直接采用溶媒配制。为了提高难溶药物的溶解度，可以在溶解活性成分时加入少量有机溶剂（通常不超过最终溶媒体积的5%）。对于小规格样品，可采用相当于目标标示量的储备液来代替活性成分的称量。通常回收率范围应在95%-105%之间。

4. 精密度

精密度系指在规定的条件下，同一份均匀供试品，经多次取样测定所得结果之间的接近程度。精密度一般用偏差、标准偏差或相对标准偏差表示。

在相同条件下，由同一个分析人员测定所得结果的精密度称为重复性；在同一个实验室，不同时间由不同分析人员用不同设备测定结果之间的精密度，称为中间精密度；在不同实验室由不同分析人员测定结果之间的精密度，称为重现性。

4.1重复性

应采用同一批性质均一的制剂样品进行溶出度重复性，典型的接受标准为RSD<5%。如果没有这种均一的制剂样品，也可以采用活性成分加入安慰剂进行溶出重复性（重复配制6份），典型的接受标准为RSD<2%

[5]。

4.2中间精密度

同一实验室的两名分析员采用同一批性质均一的制剂样品进行溶出中间精密度，如果没有这种制剂样品，可以采用活性成分中加入安慰剂进行中间精密度。每名分析单独配制标准溶液、溶媒，按照方法中的规定配制样品/计算含量。两名分析员应采用不同的溶出装置、分光光度计、HPLC仪（包括色谱柱）、进样器在不同日期进行实验。应评估所有与产品相关的时间点。

典型的接受标准是通过两名分析员溶出度结果平均值的差值进行的：<85%溶出量的时间点差值应不超过10%；>85%溶出量的时间点差值应不超过5%[5]。接受标准根据具体产品设定，也可采用其它统计学方法和限度。

4.3重现性

重现性与中间精密度操作和接收标准一致，不同之处是由不同实验室的不同分析员进行实验。已进行重现性研究的，不需要再进行中间精密度研究。

5. 耐用性

耐用性是通过故意微小改变溶出条件来评估对结果的影响，在溶出度方法开发和方法全验证时需要研究。应采用性质均一的制剂进行，通常选用6片进行溶出度测试。应对质量标准所有检测点进行考察。

考察因素包括溶出因素和分析方法因素。溶出因素包括溶媒的组成（例如缓冲盐和表面活性剂浓度、pH、脱气）、溶媒体积、转速、取样时间和水浴温度。HPLC分析因素包括流动相组成（有机相比例、缓冲盐浓度、pH）、流速、检测波长、色谱柱温度和同品牌不同色谱柱。

6. 溶液稳定性

标准溶液和样品溶液储存条件应合适，每隔一段时间用新鲜配制的标准溶液来分析储存的标准溶液和样品溶液含量，储存时间至少覆盖最后溶出时间点。典型的接受标准：存放的标准溶液和样品溶液在每个时间点的含量应在最初含量的98%-102%。

如果溶液不稳定，应考虑溶液是否需要冷藏、避光、更换容器材质（塑料或玻璃）。

7. 再验证

当分析方法改变、或被新方法替代、或方法转移到一个新的实验室时，分析方法需要再验证。有时，当药物活性成分或制剂生产工艺改变时，分析方法也需要再验证。再验证的原则和全验证一致。当分析方法发生改变（例如仪器、试剂改变、或由生产工艺或处方改变引起的），分析方法应部分或者全面再验证。分析方法再验证是为了确保分析方法仍能维持它的关键性能特点（例如专属性、精密性、准确定）。分析方法再验证的程度取决于分析方法改变的程度。

8. 讨论：
   1. 溶出度准确度

目前，溶出度准确度有两种做法。第一种做法是直接将活性成分粉末/储备液和安慰剂配制在容量瓶中，用溶媒稀释成测试浓度。第二种做法是将药物活性成分和安慰剂放入溶出杯中（37℃水浴），在规定时间内取样，按照溶出度方法配制准确度样品。第二种做法应该更能体现溶出度准确度，能考察药物活性成分在37℃水浴的稳定性情况。但应注意活性成分和其它成分不应漂浮在溶出杯水面上。

8.2溶出度精密度

通常测试方法为：取6个制剂投入溶出杯中，按照溶出度方法取样、稀释、测定。认可标准一般可定为RSD<5%。对于含量均匀度范围窄但溶出性能不均一的样品，可在较长时间点取样，从而避免由于样品本身的原因影响分析方法的重复性。由于制剂个体间的差异，有的厂家也会采用一个制剂在规定时间点重复取样6次来进行重复性研究，此时RSD<2%应可以接受。延长取样时间和重复取样虽然不太符合溶出度分析方法的规定，但在制剂均一性不好的情况下，还是可以证明溶出度分析方法精密度。

参考文献：

[1] 中国药典2020年版，四部，附录9101

[2] USP-NF 2023，General Chapter，Validation of Compendial Procedure <1225>

[3] FDA工业指南：Analytical Procedures and Methods Validation for Drugs and Biologics

[4] ICH guideline Q2：VALIDATION OF ANALYTICAL PROCEDURES: TEXT AND METHODOLOGY

[5] USP-NF 2023，General Chapter，Dissolution procedure：development and validation<1092>