成都市HBsAg阳性孕妇乙型肝炎病毒DNA检测研究

成都市HBsAg阳性孕妇乙型肝炎病毒DNA检测研究

郑忠菊,韦永琼,杨淑哲,王秦＊

电子科技大学医学院附属妇女儿童医院 成都市妇女儿童中心医院检验科，四川成都6[1]0091

【摘要】目的分析成都市孕妇乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）DNA（HBVDNA）现状，探讨乙型肝炎病毒标志物（Hepatitis B Virus Markers, HBVM）模式与HBVDNA载量之间的关系。方法选取2012-2018年首次在成都市妇女儿童中心医院产科就诊进行HBV表面抗原(Hepatitis B Surface Antigen，HBsAg)筛查孕妇，对HBsAg阳性者再采用荧光定量PCR法检测血清标本中的HBVDNA量。结果HBsAg筛查阳性并同时进行HBV DNA定量检测者共3451例，HBV感染模式有9种，HBVDNA阳性者1111例，占32.19%。HBsAg、HBeAg、HBcAb阳性（“大三阳”）和HBsAg、HBeAb、HBcAb阳性（“小三阳”）占总孕妇的90.52%，“大三阳”孕妇HBVDNA阳性检出率最高,为89.63%，与其他HBVM模式比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 HBVDNA定量检测能真实反映体内HBV复制情况，HBsAg、HBeAg双阳性者是HBV母婴传播的防控重点。围产期应密切监测HBVDNA载量，及时提供抗病毒治疗，预防宫内感染和垂直传播。

【关键词】乙型肝炎病毒; 孕妇; HBV标志物模式; HBV DNA

Study on hepatitis B virus DNA detection among HbsAg-positive

pregnant women in Chengducity

Zheng zhongju，Wei Yongqiong，Yang Shuzhe，Wang Qing

Department of Laboratory, Women and Children′s Hospital Affiliated to Medical College of Electronic Science and Technology University Chengdu Women′s and Children′s Central Hospital, Sichuan Province, Chengdu 610091, China

【Abstract】 Objective: To analyze hepatitis B virus ( HBV) DNA positive rates among pregnant women in Chengdu city and explore the relationship of hepatitis B virus markers (HBVM) and HBVDNA levels. Methods:Hepatitis B Surface Antigen (HBsAg) screening was performed among the pregnant women in the obstetrics department of Chengdu Women,s and Children,s Central Hospital from 2012 to 2018; HBsAg-positive pregnant women for HBV DNA levels were further tested by real-time PCR. Results: A total of 3451 pregnant women with HBsAg-positive and simultaneous HBV DNA quantification were selected，and 9 combinations of HBVM (HBsAg, HBsAb, HBcAb, HBeAg and HBeAb) were found. 90.52% of the total were positive in the combination of HBsAg, HBeAg, HBcAb and in the combination of HBsAg, HBeAb, HBcAb. The total positive rate of HBVDNA was 32.19%. The positive rate of HBVDNA in pregnant women with combination of HBsAg, HBeAg, HBcAb were 89.63%，respectively higher than those of other HBVM. the difference was statistically significant (P<0.05).

Conclusion: Quantitative detection of HBV DNA in pregnant women can truly reflect HBV replication status，pregnant women of both HBsAg and HBeAg-positive are the key population of prevention of HBV intrauterine infection. During perinatal period, HBVDNA load should be closely monitored and antiviral treatment should be provided timely to prevent HBV intrauterine infection.

【Key words】Hepatitis B virus；Pregnant woman；HBV marker model; HBV DNA

乙型病毒性肝炎(简称乙肝)是由乙型肝炎病毒( hepatitis B virus，HBV) 引起的传染性疾病，在世界范围内均有发病及传播，是严重危害人类健康的公共卫生问题。其主要传染源为HBV携带者和慢性乙肝患者。HBV主要通过血液、性、密切接触及母婴垂直传播。研究显示，40%~50%HBV由母婴传播所致，也是引起HBV慢性感染的主要途径[1-2]。全球大约有2. 4亿慢性乙型肝炎患者，而1/3的HBV感染发生在中国[3-4]。我国虽然对新生儿实行了乙肝疫苗接种，但育龄妇女HBV感染率较高，可通过母婴传播引起新生儿感染[5-6]。因此，控制HBV感染的重要途径是阻断HBV母婴垂直传播。为了解成都地区孕妇HBVDNA载量现状，探讨孕妇HBVM模式与HBV-DNA载量之间的关系，为成都市防控HBV母婴垂直传播提供依据，本文对2012-2018年于我院产科就诊孕妇HBsAg筛查阳性者，再进行HBV DNA的检测，现将结果报道如下。

1  资料与方法

1.1临床资料  选取2012年1月-2018年12月于成都市妇女儿童中心医院产科就诊孕妇进行HBV标志物筛查（均为首次进行乙肝相关项目检测，无合并恶性肿瘤及其他严重内外科疾病，孕期未使用过影响本结果的药物），将HBsAg筛查阳性并且同时进行了HBV DNA定量检测的3451名孕妇作为研究对象。

1.2检测方法  采集研究对象静脉血2ml，常规分离血清后，采用荧光探针定量PCR技术，检测标本中HBV DNA含量。PCR诊断试剂盒由中山大学达安基因股份有限公司提供，仪器为罗氏Cobas z 480实时荧光PCR定量仪。HBVDNA定量检测严格按试剂盒要求设阴性对照、临界阳性质控品( 3.0×102～1.0×104IU/mL)、强阳性质控品（2.0×105～8.0×106 IU/mL）对照。标准曲线由四点形成，标准品含量分别为2×103IU/mL、2×104 IU/mL、2×105IU/mL、2×106IU/mL，测定循环数CT为40。

1.3统计分析 采用Excel 2007对数据进行整理，相关数据用SPSS19.0统计软件进行分析，计数资料采用百分率表示，采用χ2检验，P＜0. 05表示差异有统计学意义。

2结果

2.1HBsAg阳性孕妇HBVDNA阳性率  HBsAg筛查阳性孕妇中，同时进行了HBV DNA定量检测者共3451例，HBV DNA阳性1111名，阳性率32.19%；其中HBV DNA载量≥106IU/ml 651名，占HBV DNA阳性孕妇的58.60%。

2.2HBsAg阳性孕妇HBVDNA阳性率与年份的关系  我市HBsAg阳性孕妇的HBV DNA总阳性率为32.19%；2012年-2018年HBV DNA阳性率分别为40.00%、28.82%、35.06%、28.19%、32.32%、31.56%、31.02%，与2012年相比有下降的趋势，差异有统计学意义(χ2=14.423，P=0.025)，见图１。

图1 不同年份之间HBV DNA阳性率的比较                     

2.3HBsAg阳性孕妇HBVM模式 3451名孕妇HBVM模式有9种，其中模式1、2、3、4有3419例，占99.07%，为孕妇HBVM的主要模式。HBeAg阳性者754例，占22.05%，主要有“大三阳”（HBsAg /HBeAg /HBcAb三项阳性）和模式4两种，见表1。

表1 成都市孕妇HBVM模式构成比（%）

2.4孕妇HBVM主要模式HBVDNA阳性率及其载量 3451例孕妇中，共1111例HBVDNA载量＞103 IU/ml（阳性），占32.19%，其中“大三阳”和“小三阳”1044例，占HBVDNA阳性孕妇的93.97%。754例HBsAg、HBeAg双阳性孕妇中，HBVDNA阳性674例，阳性率89.39%。4种HBVM主要模孕妇HBVDNA阳性率为16.19%～89.63%，不同模式阳性率差异有统计学意义（χ2=1431.929，P＜0.001）。HBsAg、HBeAg阳性的“大三阳”、模式4的HBVDNA阳性检出率较高，分别为89.63%、85.71%，见表2。

表2 成都市孕妇HBVM模式及HBVDNA载量和阳性率

2. 5 孕妇HBVM主要模式与HBVDNA载量及构成比 4种HBVM主要模式孕妇的HBVDNA

高、中、低载量组构成比见表3，其差异有统计学意义（χ2=1216.324，P＜0.001；χ2=9.055，P=0.029；χ2=382.546，P＜0.001），HBeAg阳性孕妇（主要是“大三阳”和模式4）的HBVDNA在高载量组比例较高，分别为79.95%、78.57%；“小三阳”孕妇HBVDNA高载量组构成比例较低，仅1.80%。

表3 成都市孕妇HBVM主要模式与HBVDNA载量构成比

3讨论

乙肝标志物（HBVM）检测是目前临床上筛查乙肝感染的主要方法，其结果可间接提供HBV感染的依据。乙肝病毒DNA直接反映病毒复制情况，是HBV感染和判断传染性的最佳指标，其定量检测能直接反映病毒在体内存在的数量、复制程度、是否传染，是临床确诊乙肝、指导用药及评估疗效的重要手段。开展孕妇HBVDNA定量检测，同时探讨HBVM不同模式与HBVDNA的关系，不仅对孕妇的临床早期诊断、用药治疗有重要的参考价值，还对判断是否可造成母婴垂直传播以及筛选出重点防控人群有十分重要的意义[7-8]。

本研究发现3451名受检孕妇HBVM模式共9种，其中模式1、2、3、4有3419例，占所有模式的99.07%，为孕妇HBVM的主要模式。HBVDNA载量＞103 IU/ml（阳性）者共1111名，总阳性率32.19%，其中“大、小三阳”1044例，占HBVDNA阳性孕妇的93.97%。4种HBVM主要模式孕妇HBVDNA阳性率为16.19%～89.63%，以HBsAg、HBeAg双阳性的“大三阳”HBVDNA阳性率最高，占89.63%，不同模式HBVDNA阳性率差异有统计学意义（P＜0.001）。表3显示4种HBVM主要模式HBVDNA高载量组构成为1.80%～79.95%，中载量组5.00%～16.67%，低载量组10.37%～95.00%，差异有统计学意义（P＜0.05）。HBsAg、HBeAg双阳孕妇的HBVDNA在高载量组构成比例较高，分别为79.95%、78.57%。表明HBsAg、HBeAg双阳性代表病毒复制活跃，载量高，传染性强，该类孕妇不仅可通过水平传播导致周围人群感染，还能通过垂直传播导致其婴幼儿感染[9]。本研究发现孕妇HBVM结果与HBVDNA定量结果相符，即孕妇HBsAg、HBeAg双阳性者，其HBVDNA载量也处于高水平，HBeAg阳性孕妇HBV DNA≥106 IU/ml的占79.58%，高于HBeAg阴性孕妇的1.89%，说明HBeAg阳性与HBVDNA≥106 IU/ml具有一定相关性。杜二球[10]等发现孕妇HBVDNA>106 IU/ml与<106 IU/ml时HBV宫内感染有明显差异，HBV病毒高载量是发生宫内感染的重要因素。因此，母体HBeAg阳性和HBV DNA高载量一样，可作为评价HBV母婴传播的重要危险因素[11-12]，此类人群也是HBV母婴垂直传播的防控重点。目前，多数认为母体HBVDNA≥10

6IU/mll或≥107IU/ml是HBV母婴传播的阈值，高于在此阈值需进行乙肝免疫球蛋白被动免疫和乙肝疫苗主动免疫，或使用抗病毒药物进行母婴阻断[13-14]。对于预防宫内感染，国际上推荐孕妇抗病毒治疗[15]。我国专家共识是HBV DNA>106 IU/ml的慢性HBV携带孕妇在妊娠24～28周开始抗病毒治疗[12]。本研究中有16.20%的HBeAg阴性孕妇血清中仍检出1.89%的高载量HBVDNA，表明HBeAg阴性孕妇体内仍有病毒复制，HBeAg阴性并不代表HBV的清除或复制水平低。

因此，为从根本上降低孕妇HBV的传播，有条件者应对HBsAg筛查阳性的所有孕妇都开展HBVDNA定量检测，对高载量者积极抗病毒治疗。但病毒定量检测对实验室要求较高，很多基层难以开展。血清HBeAg能一定程度反映肝细胞HBV DNA水平[16]，可将HBsAg、HBeAg双阳孕妇作为高危人群，重点防控，最大限度降低母婴传播。

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基金项目：2021年四川省妇幼医学科技创新课题（编号：21FX026）

作者简介：郑忠菊（1978.5-），女，主管技师；研究方向：临床检验诊断学。

通讯作者：王秦，女，博士，邮箱：314306221@qq.com。