血清分离胶对生化检验指标的影响

血清分离胶对生化检验指标的影响

祁洪锋

（平顶山市第二人民医院检验科， 河南 平顶山 467000）

血清分离以往主要是使用手工操作，不仅步骤多，并且工作量非常大，需要较长时间。同时血清中常常悬浮小的凝丝或是蛋白凝块，从而影响了生活检验的结果。随着技术不断发展，血清分离的方法在不断增加，其中分离胶真空采血管就是其中一种。血清分离凝胶是一种粘性液体，其结构中含有许多氢键。网络的结构由氢键的结合形成。在离心力的作用下，网络结构被破坏并转化为低粘度液体。当离心力消失之后，将会形成网状结构，然后重新变成高粘度流体。这一特性被称之为触变性，并且还会产生血清分离胶。当分离胶与凝固的血液在同一管中进行离心时，分离凝胶在血清和血凝块之间形成交替绝缘层，以分离血清和血凝块。增加血清产量，保持原始样本，简化临床检查流程，提高工作效率。

血清分离胶采血管的检查

   在生化测试前12小时禁食，在第二天清晨抽取5ml空腹静脉血，并使用血清凝胶采集血样。将静脉内血液样品在室温下保持20分钟后以3000r/min离心10分钟以分离升上层血清。在取样后0和24小时检测血清钾（K+），尿素氮（BUN），谷氨酰胺氧合转氨酶（AST），葡萄糖（GLU），肌酸激酶（CK），总蛋白（TP），总胆红素（TBIL）。

血清分离胶采血管对激素分析结果的影响

从0 d到第5 d时，采血管中雄烯二酮浓度会发生逐渐降低。与第0天相比，第5天的睾酮、17α-羟基孕酮和雌二醇浓度也有所下降。相反，随着时间的推移，常规采血管中雌二醇和睾酮水平较高。由于这些变化的可能临床效应，血清管中存在雄烯二酮，所以还需要使用标准血清收集管收集雄烯二酮类，在需要雌二醇、睾酮时将血清快速从细胞中分离。

血清分离胶采血管对药物分析结果的影响

凝胶具有高度疏水性的特点，而这一特点意味着其能够与亲水性生物化学参数进行相互作用，如电解质、肽或蛋白质等，从而实现最小化。但因为治疗药物也可能是疏水性，所以与凝胶会相互作用，受到凝胶的影响。疏水分离胶可以在凝结的血浆预全血中将血清分离出来，同时吸附苯妥英、奎尼丁、氨基甲酰松、苯巴比妥、利多卡因等疏水性药物，并且24小时后血清药物浓度可以显着降低20-50%，多氯联苯和黄体酮的水平也是如此。

血清分离胶采血管对血糖及蛋白质分析结果的影响

胆固醇、白蛋白、总蛋白、肌酐、TG、Alt、CK、LDH、GGT、ALP等在72小时后，大部分可以在分离和收集管中保持稳定。在普通采血管中储存1小时后，血糖水平会发生显著下降；而在分离胶采血管内，TBIL、尿素氮、葡萄糖、尿酸在4°C下表现出最大稳定性，AST活性在48小时内显著增加；当HDL-C在4°C下储存时，在两个血管中的浓度在36小时保持稳定。在室温下储存12小时之后，普通采血管的HDL浓度明显上升。

血清分离胶采血管对C反应蛋白分析结果的影响

C反应蛋白（CRP）是典型的急性反应蛋白，它可以激活经典补体途径与外源和自体含磷酰胆碱分子的钙依赖性结合，同时还具备重要的宿主防御、清除以及代谢功能。不同类型的炎性疾病患者样本中，BD分离胶血管中的CRP明显要比普通血管中的血清CRP高，其原因可能是由于BD分离胶机中的凝胶会吸附磷酰胆碱等内源性大分子，其与CRP形成复合物，在血清中加入凝胶可以从这些复合物中释放CRP分子。所以，在抗原体反应中，许多的CRP均可以和抗体反应。但是还需要进一步研究凝胶作用的确切机制来详细阐明。

造成血清分离胶在临床检验效果不佳的原因

1.分离胶质量

分离胶主要是由粘性液体、填料等作为胶凝剂的增粘剂。分离胶的比重在血清和血细胞之间，这是分离凝胶和血清回收的物理基础。如果采血血管中的分离凝胶质量差，比重不能满足要求，则会破坏血清的分离效果，分离凝胶与血清容易结合。

2. 血液凝固不完全

离心后，有时不能从血清和血块中完全分离出一层单独的凝胶，血清中出现纤维蛋白线。通常原因是血液在离心之前没有完全凝固。分离过程中，不完全的凝血会导致纤维蛋白混合物。

3. 离心操作

离心是制备高质量血清样本的一个重要步骤。如果离心力过低，则影响分离胶的力较弱，导致分离凝胶的反转性较差，将会导致纤维蛋白储存在血清或胶体层中，从而对自动分析仪的自动分析仪样本针造成阻塞。相反，如果离心时间过长，则在切断氢键后，很难在凝胶冷凝液中形成网状结构，从而丧失触变性。

4. 离心温度

血清分离效果由离心温度产生直接影响。使用普通离心机分离的惰性分离胶促凝管，血清清晰，但是会有部分样品中出现大小不同的油性小珠。但是在低温离心机下进行离心的试管中，所分离出来的血清不会出现油性小珠。所以，当温度超过分离胶管要求的温度之后，惰性分离胶将会在血清中发生溶解反应。

5. 血清/血浆的密度

分离胶之所以发生漂浮其原因并不是黏度，而是血清密度。任何导致血清（血浆）密度增加并超过分离胶密度的因素，也同样会导致分离胶反转性异常。

6. 采血管材质

    玻璃采血管收集血样后会释放微量元素，而塑料采血管能够避免破损影响，增加离心速度容限，提高抗冲击性，并且还可以减轻运输重量。但是塑料采血管中，疏水性塑料表面导致血样无法平滑流过，所以管壁会黏附血小板、纤维蛋白等。