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摘要：将伊维菌素放入含有H2O2的甲醛中进行加速溶解，能够获得伊维菌素氧化降解杂质粗品，通过色谱纯化技术针对形成的杂质粗品进行分离，然后通过MS和NMR技术进行结构的鉴定，从而确证溶解反应后形成的伊维菌素氧化降解杂质粗品为8a-oxo-H2B1a。将阿维菌素为原料，甲苯作为溶剂，通过催化加氢的反应后可以获得伊维菌素粗粉，在通过重结晶纯化处理后可以得到伊维菌素精粉。伊维菌素属于阿维菌素的衍生物，是一种半合成的广谱抗寄生虫药物，对于线虫、节肢动物等体内外寄生虫都有极高的消灭作用。
关键词：伊维菌素；氧化降解杂质；分离；鉴定
伊维菌素作为新型的抗寄生虫药物，具有低毒性、广谱、有效的特点，对消灭动物体内外寄生虫都有积极的作用，还具有预防寄生虫形成的效果。伊维菌素为十六元环结构的大环内酯类抗生素，通过伊维菌素B1a的C22、C23位中的双键加氢还原形成，相比阿维菌素的结构更加稳定且更具有安全性，作用持续时间更长，因此在目前国内外市场上依然具有极高的竞争力。药物质量的重要检验标准就是杂质含量，药物杂质是否得到合理、有效的控制，直接影响了药物质量的管控水平和药物安全性。为了有效的提高伊维菌素的药物质量、满足高端客户的需求，将伊维菌素原粉放入H2O2的甲醛中进行加入溶解，从而获得了伊维菌素氧化降解杂质粗品，并且针对其进行分离和鉴定，评估伊维菌素的药物质量。
一、实验研究
（一）选用的试剂和仪器
准备99.1%纯度的伊维菌素、乙腈、甲醇，采用美国Merck公司的色谱级，纯化水为自制。选用日本岛津生产的分析型液相色谱仪，采用北京创新通恒的制备型液相色谱仪，采用T-1000型电子天平、AVVANCEIII-500型核磁共振波谱仪、Loborata400型旋转蒸发器[1]。
（二）伊维菌素的加速降解过程
取10g伊维菌素原粉，将其放入到80%浓度的甲醛溶液500ml中降解，并且加入10ml的H2O2，充分摇匀放置在25℃的环境下产生氧化降解反应，定期进行反应液检测，若是反应液中的目标杂质达到了一定的要求，就可以进行反应液的加压浓缩和干燥，由此获得伊维菌素氧化降解杂质粗品[2]。
（三）进行伊维菌素氧化降解杂质粗品的分离
将伊维菌素氧化降解杂质粗品通过甲醛进行溶解，用中压柱进行层析分离，洗脱机为甲醛和水以70:30的比例配比，冲洗流速为10ml·min-1，根据洗脱峰的不同分段收集洗脱液，采用HPLC进行在线检测，检测波长为280nm，收集目标杂质纯度在70%以上的洗脱液，进行压缩浓缩至干燥，获得氧化降解杂质粗品，将粗品采用制备型液相色谱仪的高压色谱纯化技术进行纯化处理，根据色谱峰收集相应目标进行馏分，将纯度高于95%的馏分合并起来，在50℃的环境下进行减压浓缩处理去除溶剂，最终获得2.1g伊维菌素氧化降解杂质纯品[3]。
（四）检测环境
制备型色谱的条件为：采用UniSilC18柱，洗脱剂为乙腈、甲醛和水按照50:15:35的比例配备而成，洗脱流速为16ml·min-1，检测波长为280nm。
质谱条件：ESI进行正负离子的检测，离子源的温度控制在150℃，电压为3kV，电喷雾接口的N2流速为600L·h-1，锥孔电压设置为30V，脱溶剂气温为350℃。
二、实验结果分析
（一）分析加速降解条件
伊维菌素加速降解的过程中不难发现，伊维菌素的氧化降解程度与H2O2的加量以及反应时间有密切的关系，呈正相关。不过，若是H2O2过量也会造成剧烈的反应，最终形成多个降解产物，导致目标杂质的分离纯化难度增加，综合分析可知，选用H2O2加量为2%，HPLC检测目标杂质比例在达到10%的时候为反应终点[4]，HPLV图谱见图1。
图1 伊维菌素氧化降解杂质粗品和纯品的HPLC图谱
（二）伊维菌素氧化降解杂质的结构特点分析
第一，关于伊维菌素氧化降解杂质的质谱见图2。第二，采用核磁共振波谱针对伊维菌素氧化降解杂质进行分析，具体数据见表1。
图2 伊维菌素氧化降解杂质的质谱图
序号 | 13CNMR | 1HNMR | 序号 | 13CNMR | 1HNMR |
1 | 172.19 | — | 25 | 77.74 | 3.26（1H，m） |
2 | 48.56 | 3.4（1H） | 26 | 36.72 | 1.60（1H，m） |
3 | 123.35 | 5.75（1H，brs） | 27 | 28.33 | 1.52（1H，m）1.44（1H，m） |
4 | 137.62 | — | 28 | 12.57 | 0.97（3H，t，J=7Hz） |
5 | 67.55 | 4.35（1H，d，J=5.5Hz） | 1′ | 96.33 | 4.82（1H，d，J=3Hz） |
6 | 84.16 | 4.25（1H，d，J=5.5Hz） | 1″ | 99.78 | 5.33（1H，d，J=3Hz） |
7 | 79.12 | — | 12a | 20.12 | 1.19（3H，t，J=7Hz） |
8 | 129.07 | — | 14a | 15.08 | 1.58（3H，s） |
9 | 142.64 | 6.65（1H，d，J=11.5Hz） | 2′ | 36.05 | 2.30（1H，m）1.57（1H，m） |
10 | 125.97 | 7.22（1H，d，J=5.5Hz） | 2″ | 36.05 | 2.30（1H，m）1.51（1H，m） |
11 | 149.43 | 6.27（1H，d，J=9.5Hz） | 24a | 17.78 | 0.82（3H，t，J=5Hz） |
12 | 41.24 | 2.83（1H，m） | 26a | 12.75 | 0.89（3H，t，J=7Hz） |
13 | 82.55 | 4.05（1H，brs） | 3′ | 80.65 | 3.65（1H，m） |
14 | 136.47 | — | 3′a | 56.82 | 3.4（3H，s） |
15 | 120.28 | 5.23（1H，m） | 3″ | 78.52 | 3.25（1H，m） |
16 | 34.68 | 2.3（2H，m） | 3″a | 56.82 | 3.44（3H，s） |
17 | 68.81 | 3.72（1H，m） | 4′ | 81.82 | 3.2（1H，t，J=9HZ） |
18 | 37.85 | 1.89（H，m）0.87（1H，m） | 4″ | 77.52 | 3.25（1H，t，J=9HZ） |
19 | 70.05 | 5.17（1H，m） | 4a | 20.75 | 1.88（3H，s） |
20 | 42.58 | 2.12（1H，d，J=5.5Hz） | 5′ | 68.52 | 3.75（1H，m） |
21 | 99.01 | 5″ | 69.85 | 3.71（1H，m） | |
22 | 36.77 | 1.64（1H，m）1.48（1H，m） | 6′ | 18.52 | 1.25（3H，t，J=6.5Hz） |
23 | 29.24 | 1.54（2H，m） | 6″ | 18.52 | 1.21（3H，t，J=7Hz） |
24 | 32.44 | 1.54（1H，m） | 8a | 168.56 | — |
三、小结
伊维菌素具有高效、成分低、安全性高的特点，因此常用于牛、羊、马、猪等胃肠道线虫、寄生节肢动物，犬类肠道线虫、疥螨、心丝虫等防治。伊维菌素是目前应用最广泛也最受重视的动物健康药物，在国内外市场有极高的竞争实力。强制降解实验作为药物稳定性研究的重要内容，能够将药物的稳定性和降级途径呈现出来，因此在药物质量管控中发挥积极的作用。
参考文献：
[1] 马志珺,胡晓敏,李晓露,等. 伊维菌素制备工艺研究[J]. 化学与生物工程,2021,38(3):51-54.
[2] 马志珺,王克华,任风芝,等. 伊维菌素氧化降解杂质的分离与鉴定[J]. 化学与生物工程,2022,39(7):17-20.
[3] 高月麒,王克华,马志珺,等. 伊维菌素合成产物中杂质的分离与鉴定[J]. 化学与生物工程,2022,39(5):26-31.
[4] 李晓露,任风芝,高月麒,等. 伊维菌素光降解杂质的分离与鉴定[J]. 中国抗生素杂志,2021,46(5):412-415.
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