一款防治斑秃的酵素洗发液制备工艺研究[1]

一款防治斑秃的酵素洗发液制备工艺研究[1]

字玺仲,郭普刚,程书贵,杨翔,党泽帅,彭修娟*

 陕西国际商贸学院  陕西咸阳 712046

摘  要：本文以汉中镇巴地区一位民间中医大夫的秘方为研究对象，以方中总多酚含量为指标，在单因素实验基础上，采用正交试验法优化该方的发酵工艺参数，即红糖浓度为25%、水杨酸钠浓度为1.5mmol/L、水杨酸钠倍数为2.5倍、发酵天数为5日。研究结果表明，本方法具有操作简便、效率高等优点，为进一步实现工业化生产奠定了基础。

关键词：斑秃；酵素；制备工艺

斑秃，也叫“鬼剃头”，是一种突然发生的损容性脱发，主要有单造型斑秃、多造型斑秃、全秃、普秃、弥漫性斑秃、网状斑秃、蛇形斑秃、马蹄形斑秃等八种类型[1]，据相关报道，斑秃约占皮肤科门诊患者的2%[2]。斑秃会严重影响患者的情绪、生活、社交、外貌。但目前为止并没有治疗斑秃的通用疗法，FDA也没有批准任何治疗斑秃的药物[3]。本文研究对象来源于陕西汉中镇巴一李姓中医世家祖传秘方，该方经发酵后治疗斑秃疗效显著，但由于其发酵工艺参数不明（主要靠经验判断）、无质量控制标准且发酵时间较长，需对其工艺改进以利于产业化推广。

1 实验仪器与材料

TU-1810型紫外分光光度计；SQP型电子天平；DHP-9160B型电热恒温培养箱。没食子酸（批号：110831-201906）；碳酸钠、福林酚等试剂均为分析纯；水为超纯水。原料药由李姓中医世家提供，主要由侧柏、生姜等组成。

2.1含量测定

2.1.1供试品溶液制备

样品（粗粉）→加菌种 →发酵→发酵液

2.1.2对照品溶液制备

没食子酸对照品溶液的配制：将40mg没食子酸置入100mL容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，即得到0.4 mg/mL的没食子酸液。

2.1.3含量测定方法及工作曲线绘制

精密移取1 mL发酵液，加10 mL水稀释，照文献方法[4]绘制工作曲线，并进行含量测定。没食子酸的回归方程为y=0.0023x-0.0011，R2=0.9905。表明没食子酸在40~240μg/mL范围内线形良好。

2.2工艺优化

采用单因素实验分别考察了红糖浓度、SYS浓度、SYS倍数以及发酵时间对总多酚提取率的影响。

2.2.1单因素实验方案

称取样品粗粉50g，加0.3g碳酸钙（0.6%）混匀加数倍SYS及红糖水活化菌种发酵7天，因素水平见表1。

表1单因素实验因素水平表

2.2.2实验结果

（1）红糖浓度对多酚提取得率的影响

起初，随着红糖浓度的增加，多酚的提取含量逐渐增大，当浓度为25%时多酚提取得率最高，随着浓度继续增加多酚的得率逐渐保持平稳而不再增加。由此可知，当浓度达到25%时多酚提取效果最好。

（2）SYS浓度对多酚提取得率的影响

随着SYS浓度升高，多酚的含量略有提高，在浓度1.5mmol/L时提取率最高；继续增大浓度多酚提取得率减小。由此可知，浓度达到1.5mmol/L时多酚提取效果最好。

（3）SYS倍数对多酚提取得率的影响

随着SYS用量增加，多酚提取得率呈逐步增大趋势，倍数2.5倍时，多酚提取率达到最大；继续增大时，多酚提取得率减小。由此可知，SYS倍数2.5倍时多酚提取效果最好。

（4）发酵天数的考察

随着发酵时间的增加，多酚提取得率呈先增大后降低的趋势，5天的时候多酚提取率最高。

综上所述，得出最佳发酵条件为：红糖浓度为25%、水杨酸钠浓度为1.5mmol/L、水杨酸钠倍数为2.5倍、发酵天数为5日。

2.3验证试验

按照2.2项下所得最佳提取工艺条件，完成三批药材的醇提，验证提取工艺条件的稳定性和可靠性。得3批发酵液中多酚含量分别为0.13%、0.14%、0.14%，含量为0.14%，RSD为4.22%，这说明该实验具有较高的稳定性及可行性。

参考文献

[1]安佳旭,王雅清,张洲,吴英楠,白美娇,于希军. 斑秃发病机制及治疗的研究进展[J]. 疾病监测与控制,2020,14(04):333-336.

[2]McDonagh AJ,Messenger AG.The pathogenesis of alopecia areata.Dermatol Clin,

1996,14(4):661-670.

[3]医药观澜.秃如其来!新药获批临床试验，斑秃有望成为首个被攻克的脱发难题[R].CDE官网:“e药环球”,2019.

[4]许海燕,赵明光,彭修娟,刘艳红,侯敏娜. 微波辅助提取秦岭龙胆多酚的工艺优化[J]. 化学与生物工程,2019,36(01):31-35+46.

基金项目：2022年陕西省大学生创新创业训练计划项目（编号：S202213123023）

作者简介：字玺仲，男，陕西国际商贸学院医药学院2020级药学拔尖班，E-mail:14468906462@qq.com

*指导教师简介：彭修娟（1981-）,女（汉），副教授，硕士，主要研究方向：中药药效物质基础研究，E-mail:610348434@qq.com