清热解毒颗粒薄层鉴别优化研究

清热解毒颗粒薄层鉴别优化研究

王小伟 ,滕健 ,黄宇明 ,仇萍*

湖南正清制药集团股份有公司  湖南  怀化  418000

《中华医学信息导报》

【摘要】：目的研究清热解毒颗粒药物，分析薄层鉴别方法，为药物的使用提供参考。方法优化处方中的相关成分，包括栀子苷、绿原酸等，应用薄层色谱鉴别方法，另外需要增加麦冬薄层色谱鉴别。结果此鉴别方法操作非常简单，且鉴别中发现斑点清晰，阴性无干扰。结论薄层鉴别操作简单，用于清热解毒颗粒药物中助于控制质量，为后期用药的有效性提供保障。

【关键词】：清热解毒颗粒；薄层色谱法；质量控制

清热解毒颗粒是湖南正清制药集团股份有限公司生产的中药4类新药，处方来源于清代名医余霖所著《疫疹一得》“清瘟败毒饮”。产品由16味中药材组成。其中，石膏、知母：清热泻火，除烦止渴，重在解气分实热；玄参、地黄：凉血解毒，重在清血分之热；金银花、连翘：疏散表热，清热解毒，兼以透散营分之热；栀子：性苦寒，泻三焦之火；黄芩：清上焦邪热；龙胆：泻下焦肝胆实火；甜地丁、板蓝根：增强清热解毒利咽之功；玄参、地黄、知母、麦冬：养阴生津，解除烦渴。该药品试行标准中薄层色谱鉴别存在实验方法较为繁琐，供试品制备过程复杂，样品信息量单一等问题。 为了更好地控制产品质量，有必要对薄层色谱鉴别进行优化提高，便于更好的控制产品质量。

一、仪器与试药

（一）仪器：电子天平，电热鼓风干燥箱

（二）试药：硅胶G薄层板；栀子苷对照品，批号(110749-201319);绿原酸对照品，批号（110753-201319）；连翘苷对照品，批号（110821-201317）；龙胆对照药材，批号（121530-201302）；麦冬对照药材，批号（121013-201311）；检验用对照品由药品生物制品鉴定所提供。清热解毒颗粒为公司上市产品，批号（1306505、1308501、1308502）；其他试剂为分析纯。

二、薄层鉴别

（一）栀子苷的鉴别

原供试品制备方法：取本品2g，研细，加丙酮20ml，加热回流1小时，滤过，滤液浓缩至约1ml，作为供试品溶液。

修改后供试品制备方法：取本品2g，研细，加甲醇20ml，加热回流30分钟，滤过，滤液浓缩至约2ml，作为供试品溶液。相对于原方法，用极性更大的甲醇提取，缩短了回流时间，节约了时间成本。

对照品溶液的制备：1、根据药品处方比例，剔除栀子药材外，再次以同样方法制成阴性对照品溶液。2、栀子苷对照品，加甲醇制成溶液作对照，对应比例1ml含1mg。

照薄层色谱法试验，供试品与对照品溶液分别取5ul、10ul，点于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷-甲醇（3:1)展开，而后取出、晾干。喷硫酸乙醇溶液（10%），而后进行热烘处理，温度110℃，时间为5min。供试品色谱中，对照品色谱相应位置，显相同颜色斑点；阴性对照色谱，未显相同颜色斑点。取连续生产的三批样品进行检测，均符合规定。见图一。

10%硫酸乙醇溶液与原显色剂硫酸溶液（1→2）比较。具有亦挥发，显色快的特点，所以将显色剂修改为10%硫酸乙醇溶液。

图一：

1、栀子苷对照品

2、阴性对照

3、供试品1306505

4、供试品1308501

5、供试品1308502

T：22.2℃      RH：83.5%

展距：13cm

检视：日光

（二）绿原酸的鉴别

供试品制备方法：

原方法：取本品2g，研细，加甲醇20ml，放置12小时，滤过，滤液浓缩至5ml，作为供试品溶液。

修改后方法：同栀子苷鉴别下供试品制备方法，加甲醇放置12小时改成加甲醇加热回流30分钟，加热更有利于绿原酸的提取，并且甲醇沸点约64.7℃，绿原酸200℃以上才会分解，所以该制备方法不会对有效成分产生影响。修改后可共用供试品溶液，极大的缩短了样品配置时间，提高了检验效率。

对照品溶液制备：1、处方比例与之前相同，去除金银花药材，制成阴性对照品溶液。2、绿原酸对照品，加甲醇制对照品溶液，比例是1ml含1mg。

照薄层色谱法试验，吸取栀子苷鉴别供试品与对照品溶液10u1，点于同一硅胶G薄层板上，乙酸丁酯一水一甲酸(8:3:3)上层溶液展开取出、晾干，喷硫酸乙醇溶液（10%），同样进行烘干处理，温度与时间与上述研究相同。供试品与对照品色谱显相同颜色斑点；阴性对照色谱未显相同颜色斑点。取连续生产的三批样品进行检测，均符合规定。见图二。

图二：

1、绿原酸对照品

2、阴性对照

3、供试品1306505

4、供试品1308501

5、供试品1308502

T：22.5℃      RH：83.6%

展距：13cm

检视：日光

（三）龙胆的鉴别

供试品制备：取本品2g，研细，加甲醇20ml，加热回流30分钟，滤过，滤液浓缩至约2ml，原方法为浓缩至5ml，为统一供试品制备方法，方便检测，改为浓缩至2ml。修改后方法同栀子苷鉴别供试品制备方法，可共用供试品溶液，简化了操作程序。

对照品溶液的制备：取龙胆对照药材0.5g，研细，加甲醇20m，加热回流30分钟，滤过，滤液浓缩至2m1.作为对照药材溶液。

照薄层色谱法试验，吸取栀子苷鉴别供试品溶液10u1、对照药材溶液10u1，点于同一硅胶G薄层板上，乙酸乙酯-甲酸(7:2)展开、取出、晾干，喷硫酸乙醇溶液（10%），并进行热烘处理，温度与时间与上述相同。供试品与对照品色谱，显相同颜色斑点；阴性对照色谱未显相同颜色斑点。取连续生产的三批样品进行检测，均符合规定。见图三。

图三：

1、龙胆对照药材

2、供试品1306505

3、供试品1308501

4、供试品1308502

T：22.2℃      RH：83.5%

展距：13cm

检视：日光

（四）连翘苷的鉴别

供试品溶液的制备：取本品2g，研细，加甲醇20ml，加热回流30分钟，滤过，滤液浓缩至约2ml，原方法取本品3.5g，为统一供试品制备方法，方便检测，改为取本品2g，其他方法不变。修改后方法同栀子苷鉴别供试品制备方法，本鉴别为定性检测，减少样品量同样可以提取出有效成分，还可以共用供试品溶液，简化了操作程序。

对照品溶液的制备：另取连翘苷对照品，加甲醇制成1ml含1mg的溶液作为对照品溶液。

照薄层色谱法(中国药典2020年版四部通则0502)试验，吸取栀子苷鉴别项下的供试品溶液及上述对照品溶液各10u1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷-甲醇(5:1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃烘约5分钟。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。取连续生产的三批样品进行检测，均符合规定。见图四。

图四：

1、连翘苷对照品

2、供试品1306505

3、供试品1308501

4、供试品1308502

T：216℃      RH：80.4%

展距：13cm

检视：日光

（五）麦冬的鉴别

供试品溶液的制备：取本品2g，研细.加水30ml，加盐酸2ml，加热回流1小时，放冷，滤过，滤液用二氯甲烷振摇提取3次，每次30ml，合并二氯甲烷提取液，回收溶剂至干，残渣加二氯甲烷1ml溶解，作为供试品溶液。

对照品溶液的制备：1、按上述处方比例，除去麦冬药材以同样的方法制成阴性对照品溶液。2、另取麦冬对照药材0。5g，自“加水30m1”起，同法制成对照药材溶液。

照薄层色谱法((中国药典2020年版四部通则0502))试验吸取供试品溶液10u1、对照药材溶液5u1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以二氢甲烷-丙酮(4:1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇试液，105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；阴性对照色谱相应位置上，未显相同颜色的斑点。取连续生产的三批样品进行检测，均符合规定。见图五。

图五：

1、麦冬对照品

2、阴性对照

3、供试品1306505

4、供试品1308501

5、供试品1308502

T：22.5℃      RH：83.6%

展距：13cm

检视：日光

三、讨论

（一）对原标准栀子苷、连翘苷、绿原酸、龙胆供试品溶液制备方法进行了简化和统一，将丙酮改成极性更大的甲醇，能更好的提取出有效成分，并且可以缩短提取时间，简化了检验程序，提高了检验效率。

（二）显色剂由原显色剂硫酸溶液（1→2）统一成10%硫酸乙醇溶液，该显色剂具有亦挥发，显色快的特点，对以上成分均有很好的显色作用，进一步简化了检验程序，提高了检验效率。

（三）栀子苷、绿原酸、药材鉴别供试品制备方法有变化，故增加了阴性对照试验，更科学的验证了其专属性、准确鉴别的目的。

（四）参考《中国药典》同处方品种清热解毒口服液的标准，增加了麦冬的鉴别方法，通过阴性对照、供试品以及对照品的相互比较说明了其专属性，达到进一步严格控制制剂质量的目的。

（五）通过对连续生产的三批产品鉴别检验结果，证明了改进后的鉴别方法更方便操作，节约时间，专属性强，能更好的保证药品质量。

参考文献：

［１］中华人民共和国药典委员会．中国药典［Ｍ］．北京：中国医药科技出版社，2020：一部、四部通则0502．

［２]李焕荣，崔健，宋玉环．不同产地的金银忍冬中绿原酸、异 绿原酸的含量测定———双波长薄层扫描法［Ｊ］．吉林中医 药，１９８９，９（２）：２１．

［３］廖婉，傅超美，李瑶，等．清热解毒口服液质量标准的研究 ［Ｊ］．成都中医药大学学报，２００８，３１（２）：３９４２．