藿桂羌仁合剂中枳壳薄层鉴别方法研究

藿桂羌仁合剂中枳壳薄层鉴别方法研究

闫壮壮 ,尹亮洁 ,龙园

云南白药集团股份有限公司，云南昆明650500

【摘要】目的：建立藿桂羌仁合剂薄层鉴别的方法。方法：采用薄层方法对藿桂羌仁合剂中枳壳进行鉴别。结果：建立的方法专属性强、耐用性好，可作为藿桂羌仁合剂的薄层鉴别。

【关键词】藿桂羌仁合剂、薄层色谱、枳壳、柚皮苷、新橙皮苷。

1、新修订质量标准草案实验方案研究

1.1．仪器与材料

藿桂羌仁合剂批号（20210513)，柚皮苷对照品的批号（110722-202116）来源于中国食品药品检定研究院，新橙皮苷对照品的批号（111857-201804）来源于中国食品药品检定研究院。

1.2. 方法选择

参照《中国药典》2020年版一部枳壳检测方法进行改进，《中国药典》2020年版四部通则0502薄层色谱法。

1.3. 方法与结果

1.3.1供试品溶液的制备进行了以下几种比较：

1.3.1.1方法一：取本品40ml，蒸干，加甲醇10ml溶解，滤过，滤液作为供试品溶液。另取柚皮苷对照品、新橙皮苷对照品，加甲醇制成每1ml各含0.5mg的混合溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法（通则0502）试验，吸取上述供试品溶液10μl、对照品溶液20μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水（13∶6∶2）下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以3%三氯化铝乙醇溶液，在105℃加热约5分钟，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。结果见图1。点样量：供试品溶液10μl、对照品溶液20μl，薄层板：硅胶G薄层板，品牌：默克  批号：HX03747226，展开剂：三氯甲烷-甲醇-水（13∶6∶2）下层溶液，显色剂：3%三氯化铝乙醇溶液，在105℃加热约5分钟，其中：S1为藿桂羌仁合剂，S2为柚皮苷、新橙皮苷对照品。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。说明该方法可行。

2、新质量标准草案的检测方法的方法验证

为确保该方法的有效可行，按照《中国药典》2020年版四部9101分析方法验证指导原则，对新修订方法的专属性、重现性、耐用性进行验证，以保证检测方法合理可行。

2.1. 专属性

2.1.1方法要求：应能区分可能共存的物质或结构相似的化合物。不含被测成分的供试品，以及结构相似或组分中的有关化合物，应均呈阴性反应。存在其他成分的情况下，薄层色谱中对照斑点应能清晰分离出来。

2.1.2取方法一中3批藿桂羌仁合剂供试品溶液与阴性样品供试品溶液、柚皮苷、新橙皮苷对照品溶液进行实验，结果见图2。方法一柚皮苷、新橙皮苷对照品专属性的薄层色谱图;点样量：供试品溶液、阴性样品供试品溶液各10μl、对照品溶液20μl,薄层板：硅胶G薄层板，品牌：默克  批号：HX03747226,展开剂：三氯甲烷-甲醇-水（13∶6∶2）下层溶液,显色剂：3%三氯化铝乙醇溶液，在105℃加热约5分钟,其中： S1、S2、S3为藿桂羌仁合剂，S4为阴性样品，S5为柚皮苷、新橙皮苷对照品。供试品色谱中斑点清晰，显与柚皮苷、新橙皮苷对照品一致的斑点；阴性样品在柚皮苷、新橙皮苷位置无斑点，其余斑点与供试品一致，说明阴性无干扰，方法专属性好。结论：该方法分离度较好，供试品及对照品斑点清晰，无背景干扰，阴性样品无干扰斑点，系统适用性良好，专属性满足要求。

2.2. 重现性

取藿桂羌仁合剂3批，按方法三进行测试，结果见图3。方法一柚皮苷、新橙皮苷对照品重现性的薄层色谱图；点样量：供试品溶液、阴性样品供试品溶液各10μl、对照品溶液20μl，薄层板：硅胶G薄层板，品牌：默克  批号：HX03747226，展开剂：三氯甲烷-甲醇-水（13∶6∶2）下层溶液，显色剂：3%三氯化铝乙醇溶液，在105℃加热约5分钟，其中： S1、S2、S3为藿桂羌仁合剂，S4为阴性样品，S5为柚皮苷、新橙皮苷对照品。供试品色谱中，在与柚皮苷、新橙皮苷对照品相应的位置上，3批样品均显相同颜色的荧光斑点，阴性无干扰。背景干扰较小。说明该方法可适用于不同批次样品。

2.3. 方法耐用性

2.3.1考察不同展开剂比例对结果的影响

取3批供试品溶液、柚皮苷、新橙皮苷对照品溶液、阴性样品溶液，点于同一硅胶G薄层板上。标准展开剂为：三氯甲烷-甲醇-水（13∶6∶2）下层溶液，结果见图3。调整展开剂比例，做2组实验，考察耐用性。展开剂1：三氯甲烷-甲醇-水（11∶6∶2）下层溶液，结果见图4。方法一调整为展开剂1的薄层色谱图，点样量：供试品溶液、阴性样品供试品溶液各10μl、对照品溶液20μl，薄层板：硅胶G薄层板，品牌：默克  批号：HX03747226，展开剂：三氯甲烷-甲醇-水（11∶6∶2）下层溶液，显色剂：3%三氯化铝乙醇溶液，在105℃加热约5分钟。其中： S1、S2、S3为藿桂羌仁合剂，S4为柚皮苷、新橙皮苷对照品。展开剂2：三氯甲烷-甲醇-水（15∶6∶2）下层溶液，结果见图5。方法一调整为展开剂2的薄层色谱图;点样量：供试品溶液、阴性样品供试品溶液各10μl、对照品溶液20μl，薄层板：硅胶G薄层板，品牌：默克  批号：HX03747226，展开剂：三氯甲烷-甲醇-水（15∶6∶2）下层溶液，显色剂：3%三氯化铝乙醇溶液，在105℃加热约5分钟。其中： S1、S2、S3为藿桂羌仁合剂，S4为柚皮苷、新橙皮苷对照品。试验结果：三种比例的展开剂检测结果Rf值略不同，但三批供试品色谱在与柚皮苷、新橙皮苷对照品相应的位置上，均显相同颜色的荧光斑点，阴性无干扰。背景干扰较小。说明稍微调整展开剂比例对结果无影响。

2.3.2更换不同品牌薄层板;上薄层色谱法实验均采用默克公司硅胶G板，根据市面上用量较多的两家厂商，现分别更换为青岛海洋化工有限公司硅胶G板、百灵威公司硅胶G板进行测试。参照方法一，结果见图6、图7。图6   方法一采用青岛海洋化工有限公司硅胶G板的薄层色谱图；点样量：供试品溶液10μl、对照品溶液20μl，薄层板：硅胶G薄层板，品牌：青岛海洋  批号：20220408，展开剂：三氯甲烷-甲醇-水（13∶6∶2）下层溶液，显色剂：3%三氯化铝乙醇溶液，在105℃加热约5分钟，其中： S1、S2、S3为藿桂羌仁合剂，S4为柚皮苷、新橙皮苷对照品。图7 方法一采用百灵威公司硅胶G板的薄层色谱图；点样量：供试品溶液10μl、对照品溶液20μl，薄层板：硅胶G薄层板，品牌：百灵威  批号：L9C0U08，展开剂：三氯甲烷-甲醇-水（13∶6∶2）下层溶液，显色剂：3%三氯化铝乙醇溶液，在105℃加热约5分钟，其中： S1、S2、S3为藿桂羌仁合剂，S4为柚皮苷、新橙皮苷对照品。试验结果：更换不同品牌薄层板，Rf值略不同；供试品色谱中，在与柚皮苷、新橙皮苷对照品相应的位置上，3批样品均显相同颜色的荧光斑点，斑点清晰，阴性无干扰，背景干扰较小。说明该方法可适用于不同品牌硅胶G薄层板。

2.4附图：

   S1 S2           S1 S2 S3 S4 S5          S1 S2 S3 S4 S5        S1 S2 S3 S4       S1 S2 S3 S4

图1            图2              图3            图4            图5

 S1 S2 S3 S4       S1 S2 S3 S4

图6          图7

3. 结论

通过对新修订方法进行专属性、重现性、耐用性（不同展开剂比例、不同品牌薄层板）验证，结果表明：斑点清晰，分离效果好，批间重现性好，方法耐用性好，说明方法合理可行，可以用该方法对藿桂羌仁合剂进行枳壳组分的质量控制。

参考文献

〖1〗《中国药典》2020年版一部枳壳检测方法

〖2〗《中国药典》2020年版四部通则0502薄层色谱法

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