HPLC法测定美洛昔康片的含量及含量均匀度

HPLC法测定美洛昔康片的含量及含量均匀度

1邢增浩,2李丹香

澳美制药（海南）有限公司 海南省海口市 570100

摘要：建立高效液相色谱法测定美洛昔康片含量及含量均匀度的方法。方法：用十八烷基键合硅胶为填充剂。以溶液A（取磷酸氢二铵2.0g加水1000ml溶解，用磷酸调节pH至7.0）-溶液B（甲醇：异丙醇（650:100）（63:37）为流动相；以碱性甲醇溶液（取40%甲醇溶液100ml，加0.4mol/L氢氧化钠溶液6ml，混匀）为稀释剂；检测波长为254nm；柱温：40℃；流速：1.0ml/min；进样体积25μl。结果：美洛昔康在0.0448mg/ml～0.1344mg/ml范围内呈良好的线性关系，r=1.0000（n=5）；平均回收率为99.4%，RSD=0.5%。结论：该方法准确、快速、简便，且不受辅料干扰。

关键词：美洛昔康片、高效液相色谱法

引言

美洛昔康（Meloxicam）为新型的非甾体消炎镇痛药（NSAIDS），临床上主要用于治疗类风湿、风湿性关节炎、疼痛性骨关节炎和肌肉骨骼疾患（包括腱鞘炎、肩周炎、扭伤及各种劳损和腰痛）【1】。其结构名称为2-甲基-4羟基-N-（5-甲基-2-噻唑基）-2H-1,2-苯并噻嗪-3-甲酰胺1,1-二氧化物。目前，用于美洛昔康含量测定的方法主要有紫外分光光度法【2-4】、单扫示波极谱法【5】、高效液相色谱法【6~8】、RP-HPLC法【9-10】等，本文通过BP2018/USP40收载的美洛昔康片含量测定方法【11~12】对比及优化，建立了更简便、快捷、准确、重现性好的测定美洛昔康含量的高效液相色谱法。

1 仪器与试药

仪器：高效液相色谱仪（Waters E2695-2998 PDADetector/EmpowerTM3）；

美洛昔康片（规格：15mg）；美洛昔康对照品（含量：99.99%）均由本公司提供。磷酸二氢铵、氢氧化钠为分析纯；甲醇、异丙醇为色谱纯。

2 方法对比及优化

2.1方法对比

比较美洛昔康片含量测定HPLC法（BP2018/USP40），BP2018收载的美洛昔康片质量标准含量测定方法为梯度洗脱，但运行时间较长；USP40为等度洗脱，运行时间较短，但样品处理比较繁琐。综合考虑选择USP40收载的美洛昔康片含量测定方法，并对该方法进行优化。

2.2 流速考察

采用同一色谱柱，相同方法配制的同一浓度对照品溶液对色谱条件不同流速进行对比，由结果可知，1.0 ml/min流速出峰时间更早，拖尾因子有所改善，理论塔板数差异不大，故选择1.0ml/min流速。试验结果见表1。

表1色谱条件-流速考察结果

2.3 稀释剂和样品配制方法考察

2.3.1 USP原方法

稀释剂：1mol/L氢氧化钠溶液、甲醇、水。

供试品溶液：取2片样品置200ml容量瓶中，加入1mol/L氢氧化钠溶液约20ml，摇动使片剂分散，并加入160ml甲醇。超声处理约15分钟，振摇30分钟。用甲醇稀释至刻度，摇匀，过滤，精密量取续滤液3ml至5ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

2.3.2 优化方法

稀释剂：碱性甲醇溶液【13】（甲醇：水=40:60，加入0.4mol/L NaOH溶液6ml，混匀）。

供试品溶液：取本品20片，精密称定，研细，精密称取细粉（约相当于美洛昔康9mg），置100ml量瓶中，加稀释剂适量超声30min使溶解，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，过滤，取续滤液作为供试品溶液。

2.3.3试验结果

表2稀释剂与样品配制结果

试验结果显示，两种样品配制方法的含量测定结果无明显差异。优化方法易于操作且成本较少，故选用碱性甲醇溶液作为本品含量测定的稀释剂。

2.4 检测波长的选择

参照USP美洛昔康片质量标准中含量测定方法，在210nm～400nm范围内采用HPLC法和紫外吸光光度法考察美洛昔康的最大吸收波长，特征吸收波长，实验结果见表3。

表3波长选择测定结果

试验结果显示：美洛昔康在约270nm、362nm附近有最大紫外吸收，在254nm处有较大紫外吸收（峰面积约2774755），且空白溶剂及辅料在254nm处对样品的测定无干扰，参照USP含量测定法确定检测波长为254nm。

3 含量测定方法的确立

色谱条件与系统适用性用十八烷基键合硅胶为填充剂。以溶液A（取磷酸氢二铵2.0g加水1000ml溶解，用磷酸调节pH至7.0）-溶液B（甲醇：异丙醇（650:100）（63:37）为流动相；以碱性甲醇溶液（取40%甲醇溶液100ml，加0.4mol/L氢氧化钠溶液6ml，混匀）为稀释剂；检测波长为254nm；柱温：40℃；流速：1.0ml/min；进样体积25μl。美洛昔康峰的拖尾因子不大于2.0。

测定法  取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于美洛昔康9mg)，用稀释剂溶解制成每1ml约含美洛昔康0.09mg的溶液；另取美洛昔康对照品适量，精密称定，同法溶解并定量稀释制成每lml中约含0.09mg 的溶液，作为对照品溶液。精密量取供试品溶液与对照品溶液各25μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。

4方法可行性研究

4.1 干扰性试验

    取本品空白辅料，照含量测定项下方法进行测定，结果表明辅料对本品含量测定无干扰（见图1）。

图1干扰试验叠加图

4.2线性关系考察

取美洛昔康对照品适量，精密称定，用稀释剂制成约0.36mg/ml的溶液，精密量取2.5、4、5、6、7.5ml，分别置20ml量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀。精密量取25μl，注入液相色谱仪，测定各浓度溶液峰面积，以样品浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，进行线性回归分析，求出美洛昔康的线性方程及相关系数r，见表4。

表4 浓度与峰面积线性关系

经线性回归，线性方程为y=29056.7826x-3152.5483，相关系数r=1.0000。可见美洛昔康在浓度为0.0448～0.1344mg/ml的范围内，线性关系良好。

4.3精密度考察

依法平行制备6份供试品溶液。照含量测定项下方法进行测定，作为重复性结果。同时由另一名操作者，在不同日期，使用不同的仪器依法进行测定，将测得的结果与重复性试验结果进行统计（见表5）。

表5 精密度试验结果

试验结果显示：重复性6份和中间精密度12份供试品溶液的RSD为0.7%，含量测定方法的中间精密度良好。

4.4准确度

含量测定工作浓度为0.09mg/mL，制备工作浓度70%、100%、130%的溶液，分别对低、中、高不同浓度的回收率进行考察。每个浓度上平行制备3份供试品溶液。照含量测定项下的方法测定，计算回收率（表7）。

表6溶液配制

表7准确度测定结果

试验结果显示：各浓度水平回收率均在98.0%-101.0%，9个样品平均回收率为99.4%，RSD为0.5%。表明本方法回收率试验良好，准确度高。

4.5溶液的稳定性

取含量测定项下的对照品溶液和供试品溶液，在室温下放置0、8、16、24、32、36h，照含量测定方法进行测定。与初始时间点相比，计算对照品溶液/供试品溶液在不同时间点峰面积的变化值（见表8）。

表8液稳定性试验结果

试验结果显示，不同时间点峰面积无明显变化，故本品对照品溶液和供试品溶液36小时内稳定性良好。

5 样品的测定

5.1

含量测定

依法配制样品溶液和对照品溶液，分别取25μl注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法计算，结果见表11。

表11 美洛昔康片含量测定结果/以标示量计

5.2 含量均匀度测定

取本品1片，置50ml量瓶中，加稀释剂适量，超声30min使溶解，放冷，用稀释剂稀释制成每1ml中约含美洛昔康0.09mg的溶液。照含量测定项依法测定（见表12)。

表12 美洛昔康片（15mg）含量均匀度测定结果

参考文献

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【3】张玲雅.紫外分光光度法测定美洛昔康片的含量及含量均匀度[J].海峡药学，2004，16（3）：70-71；

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【12】美国药典委员会.美国药典USP40.美国，2016，Meloxicam Teblets(Assay)：4996；

【13】国家药典委员会.中华人民共和国药典2015年版二部. 北京：化学工业出版社，2015,美洛昔康片（有关物质）：846。