食品微生物检验菌落总数测定方法的效果观察

食品微生物检验菌落总数测定方法的效果观察

马丽丽，林叶

大连市沙河口区疾病预防控制中心 辽宁 大连  116021

【摘要】目的 探究食品微生物检验菌落总数测定方法的效果观察。方法 选择大连市沙河口区疾病预防控制中心2020年1月~2021年12月期间收到的180份食品样品开展研究，按照不同检测法分为A组（n＝90份，采用计数琼脂平板法）、B组（n＝90份，采用PCR技术），比较两组微生物检验菌落总数。结果 B组微生物检验菌落总数检出率较A组高，比较差异显著（P＜0.05）。结果: PCR技术的检出效果更高，可满足食品微生物检验需求，以提高食品合格率，值得优选。

【关键词】食品微生物；菌落总数；测定方法

作为重要的“民生工程”，食品安全直接关系到广大群众的机体健康及生命安全，乃至社会经济的稳定发展。食品安全，是指食品无毒无害，与营养要求符合，且对人体不会造成急性、亚急性/慢性危害[1]。目前，食品卫生已成为我国重要的公共医疗卫生管理问题之一。微生物菌落总数的检验是保证食品安全的重要环节之一。因此，选择一项相对操作简便、价格适中、安全可靠的检验方法已成为保证检验结果准确性的关键。本研究针对大连市沙河口区疾病预防控制中心2020年1月~2021年12月期间收到的180份食品样品开展研究，对其微生物菌落总数检出情况进行探究，旨在选出合适的检测方法，如下。

1.1临床资料

1材料与方法

本研究入组对象为大连市沙河口区疾病预防控制中心2020年1月~2021年12月期间收到的180份食品样品，

1.2方法

B组：进行计数琼脂平板法，如下：（1）在无菌条件下，准备25g样品，装入含有225mL生理盐水的无菌锥形瓶内，充分混匀，备用；（2）使用1mL无菌吸管按照1:10比例吸取品稀释液1mL，再缓慢注射入含有9mL生理盐水的无菌试管内充分混匀，得到1:100样品稀释液。依照此方法，制作1:1000比例、10000比例的样品稀释液。（3）根据样品受污染状况，选择2/3个梯度合适的样品稀释液，各取1mL注入无菌平皿，另外在两个无菌平皿内分别取1mL生理盐水稀释液为空白对照，取46℃计数琼脂培养基15mL注入平皿，使样品液、培养基充分混匀，确定琼脂凝固，再置入36℃恒温培养箱内，倒平板培养48h。

A组进行PCR技术检测，如下：参照PCR检测步骤，对食品样品微生物进行检测，严格遵操作原则，减少误差。

1.3观察指标

比较两组微生物菌落总数检出情况。

总菌落检出数的判定：依照上述2种菌落计数法，测定食品样品的总菌落数（），菌落种类包括金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌、沙门氏菌、艾滋病病毒抗体、志贺氏菌。

总菌落数超标率的判定：依照《食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数测定》，样本检验总菌落数>1500个/g。

1.4统计学处理

选择SPSS25.0软件为工具，计量资料表示为“（±s）”，组间差异行t检验；计数资料表示为“n（%）”，数据组间行2检验。以P＜0.05为检验标准。

2结果

两组微生物检出总数的比较：B组对食品微生物菌落超标检出率为21.10±4.05%，明显高于A组10.19±2.10%，比较差异有显著性（t＝22.687，P＜0.05）。

3讨论

食品安全是我国重要的公共卫生问题之一。食品加工过程中因金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、沙门氏菌等影响，易产生传染性疾病，危及食用者机体健康安全。因此，加强做好食品的微生物检验工作已成为保证食品安全的关键所在。

计数琼脂平板法是食品微生物检验中的常用方法，虽然能够取得一定的检出效果，但是操作过于繁琐，延长检查用时，加上颗粒物、固体残渣、计数精度等影响，直接降低菌落总数检出准确度。

PCR技术作为新型检测技术之一，可通过三个步骤（变性、退火、延伸）获取大量的DNA片段，以分析微生物菌落情况。总体来讲，该项技术具有以下优势：（1）方便性，仅需一人操作即可，提高工作效率；（2）迅速性，因传统检测技术检测流程较繁琐，需3d左右方能完成检测工作。而PCR技术可通过检测微生物，减少上述问题，仅需1d即可确定微生物数量，以保证工作效率，满足食品生产需求；（3）准确性，PCR技术可根据不同类型食品采取不同的检测方式，如常规检测、多重检测、逆转录PCR检测等，以弱势菌群为例，可采用多重检测准确判定微生物数量。

总菌落数是用于评价食品质量的重要指标之一[2]。该研究结果显示B组对食品微生物菌落超标检出率为21.10±4.05%，明显高于A组10.19±2.10%，说明PCR技术对食品微生物菌落的检出率较高，原因如下：大肠埃希菌为肠道正常菌群的重要部分，不仅繁殖能力强，而且对人体的危害较严重。针对大肠埃希菌的检测，采用PCR技术可借助多重筛选方式中的基因序列靶向定位病菌的溶血细胞，再借助免疫反应确定微生物数量。与计数琼脂平板法比较，PCR技术充分体现出操作简便、高效德国忒安，以明确鉴别大肠杆菌，获取更为精准的检测结果。金黄色葡萄球菌属于革兰氏阳性菌，也是一种具有侵袭性特点的细菌，可通过产生毒素破坏肠道菌群，引发腹痛、腹泻，甚至造成食物中毒。研究中，采用

PCR技术检测食品样品中的金黄色葡萄球菌，借助特异引物扩增DNA，获取大量的DNA片段，再进行分析，即可判断金黄色葡萄球菌的数量。研究指出，PCR技术可在1d以内明确金黄色葡萄球菌的SEB基因，以保证检测的时效性。沙门氏菌作为食物中毒发生的重要致病菌之一，广泛分布在温、冷血动物的肠道菌，具有较强的危害性、感染性。一旦食品中检出沙门氏菌，直接影响食品质量，危害人们健康安全。为此，加强重视食品中微生物-沙门氏菌的检测。以往采用传统方式检测沙门氏菌，虽然能够取得一定的检测结果，但是操作步骤较繁琐，难以在短时间内获取准确的检测结果。而PCT技术可有效避免常规检测方法存在的问题，尤其是多重PCR技术的运用，可有效检测到沙门氏菌对食品的污染状况，还可判断沙门氏菌有无突变。为此，可以在操作期间结合DNA片段的扩增、测序分析片段，即可鉴别区分沙门氏菌种类。此外，常规PCR技术、半套式1'CR技术的有效结合可进一步提高食品微生物菌落的检测准确率，以保障食品安全。值得注意的是，在进行PCR检测过程中应当做好以下事项：（1）现场采样时，应当使用经过高压灭菌处理的采样工具，同时保持容器内清洁、干燥，严格遵守相关规范操作流程；（2）在食品生产过程中可随机性取样[3]。

  综上所述，在食品微生物菌落检测中运用PCR技术、计数琼脂平板法，均可获取到一定的检测结果，但是PCR技术检出率更高，可作为食品样品微生物菌落检测中的理想技术，值得进行大力推广、宣传。介于相关报道较少，再加上本次研究样本量不足等方面的局限性，建议今后继续探究PCR技术的应用价值，以期丰富研究成果，为后续相关报道的顺利开展提供重要的理论依据，以及为我国食品安全提供有力保障。

参考文献

[1]邹雨虹,杨丹妮,张晓金.PCR技术在食品微生物检测中的运用[J].食品安全导刊,2021(09):187-188.

[2]范鑫,张彦斌,张宏博,朱叶青,罗海涛.分子生物学方法在食品微生物检测中的应用[J].食品安全导刊,2019(27):110-111.

[3]吴宪.PCR技术在食品微生物检测中的应用探究[J].粮食科技与经济,2019,44(01):47-50.