干混悬剂中抑菌剂浓度筛选及抑菌效力研究

干混悬剂中抑菌剂浓度筛选及抑菌效力研究

作者：牟芳,焦美侠

单位：青岛科创质量检测有限公司

摘要：本研究根据药物特性，对5种不同浓度苯甲酸钠（0.1%，0.2%，0.3%，0.4%，0.5%）的干混悬剂进行抑菌效力研究，来确定干混悬剂中抑菌剂的合理添加量。结果表明，干混悬剂中苯甲酸钠的最低有效剂量为0.2%-0.4%。

关键词：干混悬剂 抑菌剂 抑菌效力 苯甲酸钠

引言

干混悬剂作为一种口服制剂形式，一般以粉末形式存在，服用时直接加水，摇匀制成悬混液。干混悬剂一般用于儿童、老人或者吞咽困难的病人。干混剂不含水分，携带方便。在临床上应用比较广泛。为保证制剂有效期内的微生物安全，需要添加一定的抑菌剂。为保证用药安全，在药品研发阶段需对制剂中的抑菌剂进行浓度筛选，保证抑菌剂添加量为最低的有效浓度1，本研究以含苯甲酸钠的干混悬剂做为研究对象，对5种抑菌剂浓度（0.1%，0.2%，0.3%，0.4%，0.5%）的干混悬剂进行抑菌效力研究，确定干混悬剂中抑菌剂的合理添加量。

1 实验部分

1.1仪器

LT-CPS80C立式压力蒸汽灭菌器（上海博迅医疗生物仪器股份有限公司）； BSC-1604ⅡA2生物安全柜（苏州安泰空气技术有限公司）；DHP-9272电热恒温培养箱（上海一恒科学仪器有限公司）； MJ-250-Ⅱ霉菌培养箱（上海一恒科学仪器有限公司）。

1.2菌种

铜绿假单胞菌CMCC(B)10104、金黄色葡萄球菌CMCC(B)26003、大肠埃希菌CMCC(B)44102、黑曲霉CMCC(F)98003、白色念珠菌CMCC(F)98001均来自中国医学细菌保藏中心，工作菌种为3代传代菌种。

1.3培养基与试剂

沙氏葡萄糖琼脂培养基（批号：20210517）、胰酪大豆胨琼脂培养基（批号：20210707）              均来自青岛高科技工业园海博生物技术有限公司；聚山梨酯80（批号：2009281）来自西陇科学股份有限公司；0.9%无菌氯化钠溶液（批号：2020101001）来自成都市科隆化学品有限公司。

1.4供试品

0.1%，0.2%，0.3%，0.4%，0.5%苯甲酸钠的干混悬剂（模拟处方进行配置）。

2 方法与结果

2.1菌液的制备

金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌接种至胰酪大豆胨琼脂培养基中，经30-35℃培养24h，用0.9%无菌氯化钠溶液制成菌悬液。分别取上述3种菌悬液用适量的0.9%无菌氯化钠溶液稀释并制成每1ml含菌数约为103cfu的菌悬液。

白色念珠菌接种至沙氏葡萄糖琼脂培养基中，经20-25℃培养48h，用0.9%无菌氯化钠溶液制成菌悬液。取菌悬液用适量的0.9%无菌氯化钠溶液稀释并制成每1ml含菌数约为103cfu的菌悬液。

取黑曲霉菌接种至沙氏葡萄糖琼脂斜面培养基中，经20-25℃培养6-10天，用含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱，吸出孢子悬液至无菌试管中，用含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液制成黑曲霉孢子悬液，取菌悬液用适量含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液稀释并制成每1ml含菌数约为103cfu的菌悬液。

2.2抑菌效力方法适用性研究

2.2.1存活菌数测定方法适用性

供试液配制：取含5%苯甲酸钠的干混悬剂供试品于无菌瓶中，用55ml水溶解，作为供试液。

试验组：取供试液10ml于无菌均质袋中，加入含0.5%聚山梨酯80的0.9%氯化钠溶液至100ml，充分混匀，制成1:10供试液。取5份10ml 1:10供试液，分别加入0.1ml金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、白色念珠菌、黑曲霉试验菌液（菌含量不超过104cfu/ml），混匀，取混合液1ml置于无菌平皿中，金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌注入胰酪大豆胨琼脂培养基，33℃条件下倒置培养3天；白色念珠菌、黑曲霉注入沙氏葡萄糖琼脂培养基，23℃条件下倒置培养5天。同法配制三份。

菌液对照组：取0.9%氯化钠溶液替代供试液，同试验组操作。同法配制三份。

供试品对照组：以含0.5%聚山梨酯80的0.9%氯化钠溶液代替试验菌，同试验组操作。同法配制三份。

阴性对照：取含0.5%聚山梨酯80的0.9%氯化钠溶液1ml，置于无菌平皿中，分别注入胰酪大豆胨琼脂和沙氏葡萄糖琼脂培养基，倒置培养。培养条件同试验组。同法配制三份。

2.2.2验证结果

采用稀释法对五种试验菌进行回收实验，回收率均可达到50%以上，阴性对照组均无菌生长。具体数据见表1。表明稀释法可用于干混悬剂抑菌效力的检查。

表1. 计数方法验证结果

Tab.1 Results of aerobic microbial count in mmethod validationtest

2.3抑菌效力测定

取含5%苯甲酸钠的干混悬剂供试品于无菌瓶中，用55ml水溶解作为供试液，分取5份，分别将0.1ml大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、黑曲霉试验菌液接种于供试液中，充分混合，使1ml供试品中接菌量为105~106cfu，接种菌液的体积不得超过供试品体积的1%。盖上盖子，用封口膜封口，置20~25℃避光贮存。培养过程中分别在14d、28d从上述容器中取供试品lml，用经过验证的测定方法测定每份供试品中所含的菌数，测定细菌用胰酪大豆胨琼脂培养基，测定真菌用沙氏葡萄糖琼脂培养基。另取含0.1%，0.2%，0.3%，0.4%苯甲酸钠的干混悬剂的供试品同法测试，结果见表2，抑菌效力判断标准见表3。

表2抑菌效力结果

Tab.2 Results of bacteriostatic efficacy

表3抑菌效力判断标准

Tab.3  Criteria for bacteriostatic efficacy

注：NI代表未增加，是指对前一个测定时间，试验菌增加的数量不超过0.5lg。

3总结

由表2中的结果可知，0.1%的苯甲酸钠的干混悬剂的抑菌效力不符合要求，0.2%-0.5%的苯甲酸钠的干混悬剂的抑菌效力均符合要求，考虑到生产过程中的误差，因此确定干混悬剂中苯甲酸钠的最低有效剂量为0.2%-0.4%。

参考文献

1国家药典委员会.《中国药典》2020年版 四部 通则1121 抑菌效力检查法