达格列净片有关物质的测定

达格列净片有关物质的测定

楼金萍 黄俊飞 吴佩玲 陈方琴

杭州华东医药集团浙江华义制药有限公司 322000

摘要：建立达格列净片有关物质的高效液相色谱法（HPLC）测定方法。方法采用以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；以水-乙腈为流动相梯度洗脱，检测波长为220nm，流速为1.0ml/min，柱温30℃，进行达格列净片有关物质的测定。结果在本色谱条件下具有良好的专属性、精密度、准确度。杂质与达格列净在0.02%~0.3%范围内线性良好。各杂质具有较低的检测限和定量限；供试液液在55h内稳定。

关键词：达格列净 有关物质 高效液相色谱法

达格列净是一种钠-葡萄糖协同转运蛋白2（SGLT2）抑制剂，SGLT2是负责肾脏葡萄糖重吸收的主要转运体，它通过抑制表达于肾脏的SGLT2，减少肾脏对葡萄糖的重吸收，增加尿液中葡萄糖的排泄，从而降低血浆葡萄糖的水平。美国糖尿病协会（ADA）发布了《2021年新版糖尿病的诊疗标准》^[1]。标准指出，对于合并动脉粥样硬化性心血管疾病、肾脏疾病、心力衰竭等高风险因素的患者，推荐使用新型降糖药，如钠-葡萄糖协同转运蛋白-2抑制剂（SGLT-2i）或胰高血糖素样肽-1（GLP-1）受体激动剂。达格列净对于糖尿病患者具有保护心血管和肾脏的作用。达格列净有关物质的测定方法文献资料不多，故亟需建立一种简便可靠、灵敏度高的检测方法。

1材料

1.1试药 达格列净片：杭州华东医药集团浙江华义制药有限公司，批号220301，规格：10mg。

1.2对照品 达格列净原料药：杭州华东医药集团浙江华义制药有限公司，批号202203；杂质1：山东沃德森生物科技有限公司，批号WDSDGLJ-01；杂质2（批号20210601）、杂质3（批号20211101）：深圳市恒丰万达医药科技有限公司；杂质4：深圳市华信医药科技有限公司，批号HST-D629025-202009。

达格列净原料药结构式 杂质1结构式

杂质2结构式 杂质3结构式

杂质4结构式

1.3试剂 乙腈：赛默飞世尔科技有限公司，批号F22M2A201。

1.4仪器 ACQUITY Arc 高效液相色谱仪（Waters）；XSE205DU型十万分之一分析天平（METTLER），Milli-Q Direct 16纯水仪（Merck Millipore）。

2方法与结果

2.1色谱条件

色谱柱XBridge C18 （150mm×4.6mm，3.5μm），流动相为水-乙腈梯度洗脱，流速为1.0ml/min，柱温为30℃，检测波长为220nm。

流动相梯度：时间min（水：乙腈） 0min(70:30)；5min(70:30)；30min(20:80)；40min(70:30)；50min（70:30）。

2.2溶液配制

溶剂：乙腈-水（3:7）

供试品溶液：取达格列净片适量，加溶剂制成每1ml含达格列净500μg的溶液。

专属性混合溶液：分别取各杂质，达格列净片适量，加溶剂制成每1ml含各杂质1μg,达格列净500μg的溶液。

重复性测试液：分别取各杂质，达格列净片适量，加溶剂制成每1ml含各杂质1μg,达格列净500μg的溶液，平行配制6份。

线性和范围测试液：分别取各杂质、达格列净原料药适量，加溶剂逐步稀释成从LOQ起至150%相对浓度的溶液。

准确度测试液：分别取各杂质、达格列净片适量，加溶剂制成每1ml含各杂质0.5μg、1μg和1.5μg，达格列净500μg，每个浓度点配制三份。

2.3方法学考察

2.3.1专属性考察 将“2.2”溶液配制项下专属性混合溶液依法测定，结果见图1。由图可知各杂质与达格列净之间的分离情况良好（分离度均大于2），且空白对检测无干扰。

图1 专属性性混合溶液色谱图

2.3.2重复性考察 将“2.2”溶液配制项下6份精密度测试液依法测试，计算各杂质含量的RSD，结果均小于2.0%，表明方法精密度良好。

2.3.3稳定性考察 取将“2.2”溶液配制项下第一份重复性测试液在0h、13h、21h、32h、55h进样检测，计算各杂质含量变化值，结果溶液放置55h后各杂质含量变化值相对0时刻杂质含量均小于1.0%，表明溶液在55h内稳定。

2.3.4线性与范围考察 将“2.2”溶液配制项下线性和范围各浓度点的测试液依法检测，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线，得各杂质的线性回归方程。结果见表1，杂质在各自范围线性关系良好，灵敏度高。

表1 各杂质线性回归方程、相关系数、线性范围、LOD

2.3.5准确度考察 将“2.2”溶液配制项下供试品溶液和准确度测试液依法进样测定，计算回收率，各杂质回收率均良好。

3讨论

对于流动相的选择，本实验分别考察了乙腈-水、乙腈-0.1%磷酸、乙腈-0.05%三氟乙酸，结果表明采用乙腈-水时空白图谱对各杂质无影响，且配制简单；对于色谱柱的选择，本实验分别考察了Shim-pack VP-ODS、Waters Xselect HSS CN、Waters XBridge C18，结果表明Waters XBridge C18色谱柱对各杂质的分离效果、分型及保留时间等综合因素上更具优势，因此确定了正文选用的色谱条件。

建立了达格列净片有关物质的HPLC方法。结果显示该方法具有良好专属性、重复性、检测限较低，线性关系和回收率均良好，供试液在55h内稳定，能够满足达格列净片的日常检测要求。