注射用雷贝拉唑钠的含量测定方法学研究

注射用雷贝拉唑钠的含量测定方法学研究

齐鹤

黑龙江省药品审核查验中心，黑龙江 哈尔滨 150076

摘要  目的：建立HPLC法检查注射用雷贝拉唑钠的含量测定方法。方法：采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以 0.01mol/L 磷酸二氢钾溶液（用氢氧化钾试液调节pH值至 6.0）：乙腈（65:35）为流动相；检测波长为280nm；柱温为35℃；进样体积 5µl。结果：方法的专属性、准确度、精密度及耐用性良好；在雷贝拉唑钠的进样量为0.2μg～0.7μg范围内，雷贝拉唑钠进样量与色谱峰面积线性关系良好，平均回收率为100.88%，RSD为0.77%（n=9）。结论：本方法简便、快速、灵敏，可有效检测雷贝拉唑钠的含量。

关键词：雷贝拉唑钠；含量；HPLC

出血性胃病是临床常见的危重症疾病，质子泵抑制剂是治疗胃酸分泌过量等相关性疾病的首选药物^[1]。雷贝拉唑是由日本卫材开发，1998年首次在日本上市，临床用于治疗十二指肠溃疡与胃溃疡、反流性食管炎，与同类药物相比雷贝拉唑钠作用部位的药物累积浓度高，起效快，持续时间长，抑酸作用可逆^[2]。

中国药典2020年版二部收录了雷贝拉唑钠原料、肠溶片和肠溶胶囊三个标准，现国家药典委员会发布了注射用雷贝拉唑钠的标准征求意见稿^[3]，采用高效液相色谱法检测雷贝拉唑钠的含量，本研究将对该方法进行详细的方法学研究，以判断该方法是否适合于注射用雷贝拉唑钠产品质量控制。

1 仪器与试药

高效液相色谱仪（岛津2010）；色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶柱；注射用雷贝拉唑钠（批号：211101、211102、211103，实验室自制）；雷贝拉唑钠对照品(批号：100658-202006)，购自中国食品药品检定研究院。

乙腈为色谱级；其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

本品含量检查方法参照国家药典委员发布的注射用雷贝拉唑钠标准征求意见稿中色谱条件进行。

2.1 色谱条件

色谱柱：

十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.01mol/L磷酸二氢钾溶液（用氢氧化钾试液调节pH值至6.0）-乙腈（65：35）为流动相；检测波长为280nm；柱温为35℃；进样体积5µl。

2.2 溶剂的制备

0.1mol/L磷酸氢二钾溶液（用氢氧化钾试液调节pH值至11.3）-乙腈（80:20）。

2.3 供试品溶液的制备

取本品5瓶，加溶剂溶解并定量转移至同一100ml量瓶中，用溶剂稀释至刻度，摇匀，精密量取适量，用溶剂定量稀释制成每1ml中约含雷贝拉唑钠0.1mg的溶液。（溶剂 0.1mol/L 磷酸氢二钾溶液（用氢氧化钾试液调节 pH 值至 11.3） -乙腈（80:20）。）

2.4 对照品溶液的制备

取雷贝拉唑钠对照品适量，精密称定，加溶剂溶解并定量稀释制成每1ml中约含0.1mg 的溶液。

2.5 系统适用性试验

取雷贝拉唑钠约20mg，置20ml 量瓶中，加3%过氧化氢溶液1ml，静置10分钟，用溶剂稀释至刻度，摇匀，精密量取5µl注入液相色谱仪，记录色谱图。

结果：雷贝拉唑峰与氧化降解杂质峰（相对保留时间约为 1.1）之间的分离度为2.3，符合要求。

2.6 专属性实验

取空白辅料适量，用溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5µl注入色谱仪，记录色谱图。

结果：溶剂和辅料在雷贝拉唑峰处无干扰。

2.7 溶液稳定性试验

取供试品溶液分别于0、1、2、3、4小时进样，考察雷贝拉唑峰各个时间峰面积的RSD%，验证溶液的稳定性。

结果：雷贝拉唑峰面积4小时内RSD为1.1%。结果表明雷贝拉唑钠溶液在4小时内稳定性良好。

2.8 雷贝拉唑钠线性试验

精密称取雷贝拉唑钠对照品适量，分别用溶剂溶解并稀释制成每1ml分别含雷贝拉唑钠浓度为40μg、80μg、100μg、120μg、140μg的对照品溶液，分别进样5μl，记录谱图。以峰面积为纵坐标，以对照品进样量为横坐标，进行线性回归。

结果：雷贝拉唑钠线性方程为：y=7628.3x+37.802，r=0.9999；表明该方法雷贝拉唑钠进样量在0.2μg～0.7μg范围内线性关系良好。标准曲线见图1。

图1 雷贝拉唑标准曲线

2.9 定量限试验

用2.8项下浓度最低的对照品溶液进一步稀释进行，以信噪比10：1时浓度计算进样量为检测限。

结果：将2.8项下浓度最低的对照品溶液稀释100倍后注入液相色谱仪，其色谱峰信噪比为11.8：1时，因此得知雷贝拉唑钠的检测限为2.004ng。

2.10 回收率试验

取本品211101批样品9份各相当于雷贝拉唑钠约80mg置100ml容量瓶内，分成3组，每组分别精密加入雷贝拉唑钠对照品约为16mg、20mg、24mg，按照供试品溶液稀释方法配制，另精密称取雷贝拉唑钠对照品适量，用溶剂溶解并稀释制成每1ml含雷贝拉唑钠浓度为100μg的对照品溶液，量取以上各溶液5μl，按照以上检测条件分别进样检测，记录谱图，计算回收率。

结果：平均回收率为100.88%，RSD为0.77%，说明本方法精密度较好。

2.11 中间精密度试验

取本品211101批样品，按照规定配制方法配制对照品溶液和供试品溶液，分别由不同人员、不同仪器、不同日期按照规定的检测条进样检测，记录谱图，计算RSD%。

结果：不同人员、不同仪器、不同日期分别检测雷贝拉唑钠含量结果间RSD为1.22%，表明本方法中间精密度良好。

2.12 重复性试验

取本品211101批样品，精密称取内容物粉末适量各9份，分成三组，按照供试品溶液配制方法制备成每1ml中含雷贝拉唑钠分别为80μg、100μg、120μg的供试品溶液，另精密称取雷贝拉唑钠对照品适量，用溶剂溶解并稀释制成每1ml含雷贝拉唑钠浓度为100μg的对照品溶液，按照规定的检测条进样检测，记录谱图，计算RSD%。

结果：注射用雷贝拉唑钠9份含量测定结果间RSD为1.07%，表明本方法重复性良好。

2.13 耐用性试验

取本品211101批样品，按照规定配制方法配制系统适用性溶液、对照品溶液和供试品溶液，分别调整流速为1.0ml/分、0.8ml/分、1.2ml/分；调整流动相pH值范围应为5.5，6.0，6.5；柱温分别为35℃、30℃、40℃；流动相比例分别问60:40、65:35、70:30，分别精密量取以上各溶液5μl，按照以上检测条件分别进样检测，记录谱图，考察耐用性。

结果：液相各检测条件轻微改变后，雷贝拉唑峰与氧化降解杂质峰分离度均符合规定，雷贝拉唑钠含量检测结果无明显差异，说明本方法耐用性较好。

2.14 注射用雷贝拉唑钠含量测定

取三批样品，按照规定的方法检查含量。

结果：见表1。

表1 含量测定结果表

3 讨论

本品的含量测定参照国家药典委员会注射用雷贝拉唑钠标准征求意见稿中方法进行检查。方法学验证结果表明，方法的专属性、准确度、中间精密度、重复性、耐用性较好，检测灵敏度较高。该方法简便、快捷，可准确检测注射用雷贝拉唑钠的含量。

参考文献

[1] 李建一. 雷贝拉唑在出血性胃病中的应用进展. 中国处方药, 2022,20（2）：187～188.

[2] 孟正丽. 高效液相色谱法测定人血浆中雷贝拉唑钠浓度及其应用.中国医院药学杂志, 2014,34（8）：643～646.

[3] 国家药典委员会，注射用雷贝拉唑钠标准征求意见稿.