解脲支原体、人型支原体感染与男性不育的相关性和药敏情况分析

解脲支原体、人型支原体感染与男性不育的相关性和药敏情况分析

罗慈雁 1，王锦华 2，肖光文 3

1.嘉应学院医学院附属医院检验科 广东梅州 514031， 2.梅州市人民医院生殖科 广东梅州 514031， 3嘉应学院医学院基础部 广东梅州 514031

【摘要】目的 探讨解脲脲原体（Uu）和人型支原体(Mh)的感染与男性不育症的相关性和了解它们对常用抗菌药物的药敏情况。方法 收集男性不育患者和同期健康男性精液标本，采用Uu、Mh培养鉴定及药物敏感试剂盒进行鉴定和药敏试验，按照世界卫生组织推荐的方法进行精液相关参数指标的检测和采用精子染色质扩散实验检测精子核DNA完整性。结果 男性不育人群支原体的检出率为37.8%（262/694），健康男性人群支原体的检出率为27.1%（153/565）；两组人群在支原体总阳性率、Uu阳性率、Uu和Mh混合感染阳性比较，差异均有统计学意义(均P＜0.05 )，而Mh阳性率差异无统计学意义（P＞0.05）；在男性不育人群中，Uu感染组与支原体阴性组在液化时间、PR前向运动精子百分率、（PR+NR）精子活力百分率、精子正常形态率和DFI指数上均存在统计学差异性，Uu感染组与Mh感染组分别在精子正常形态率和DFI指数上存在统计学差异性（均P＜0.05 )；抗菌药物交沙霉素、美满霉素和多西环素分别对3种感染模式敏感率均高于或接近90%。结论 Uu与男性不育密切相关并对精液质量参数指标产生了影响，而Mh与男性不育的相关性相对较小；交沙霉素、美满霉素和多西环素对于Uu和Mh单独或者混合感染都具有良好的敏感度。

【关键词】解脲支原体；人型支原体；男性不育；药物敏感

目前全球约有15～20%的育龄夫妇受到不孕不育症的影响，而约有8～35%的男性不育症与生殖道感染有关^[1]。病原体通过干扰精子发生、影响精子代谢和精卵结合、生殖道局部免疫等机制来影响生育能力。解脲支原体（Ureaplasma urealyticum，Uu）、人型支原体（Mycoplasma hominis,Mh）和沙眼衣原体等都是最常见的病原体之一。Uu和Mh是健康成人泌尿生殖道中的常见的定植微生物之一，可以通过性接触而引起感染，其在男性不育症中的作用一直都是存在争议的。一些研究^[2]表明，它们特别是Uu的感染会改变精液的各种参数，如精子的密度和运动性等；而另一些研究^[3]则认为它们的感染没有影响精液的质量和男性不育。所以本文旨在通过不育和可生育男性中Uu和Mh的流行情况分析其与男性不育的相关性和药敏情况，为男性不育因素中病原体感染方面和临床男性生殖道支原体治疗提供资料。

1 对象与方法

1.1 研究对象 2017年7月到2019年6月于我院生殖中心就诊和体检并经诊断为男性不育的患者和同期健康男性，经我院医学伦理委员会批准，入选的所有男性不育患者均签署知情同意书。男性不育的纳入标准为：婚后同居1年或以上、性生活正常、非女方不孕因素而不育者。健康男性纳入标准为：与妻子有非人工方式的怀孕史且无临床症状,精液常规分析正常者。最终有694例男性不育患者纳入研究，年龄为年龄介于22～46 ( 33.6±7.5)岁，同期纳入健康男性565例，年龄为年龄介于21～42 ( 31.6±6.5)岁。在年龄上，两组之间差异无统计学意义（t=1.452, P＞0.05）。

1.2 标本的采集与处理禁欲3～5天后，收集前要求所有受试者用肥皂和清水洗净双手并用手淫法采取精液,将留取精液标本置于一干净的、广口玻璃容器中,置于37°C水浴箱中液化。

1.3 支原体的分离和培养 采用购自珠海市迪尔生物工程有限公司的支原体培养鉴定及药物敏感试剂盒，严格按照试剂盒说明书进行操作。药敏主要检测四环素、环丙沙星、克拉霉素、罗红霉素、红霉素、交沙霉素、左氧氟沙星、强力霉素、阿奇霉素、氧氟沙星、司帕沙星和美满霉素。Ｕｕ和 Ｍｈ判读时间为４８ｈ，培养基由黄色变为红色且清亮即为Ｕｕ或Ｍｈ阳性,变浑浊或颜色不变即为Ｕｕ和 Ｍｈ阴性。药敏结果的判读：当药物高、低浓度双孔均由黄色变为红色则为耐药，高浓度孔黄色不变，而低浓度孔由黄色变为红色则为中介，高、低双孔均黄色不变则为敏感。对于精液细菌培养和沙眼衣原体检测呈阳性的结果予以排除。

1.4 精液参数的分析 严格按照世界卫生组织《人类精液检查与处理实验室手册》推荐的方法^[6]进行检测，检测的主要参数包括液化时间、PH值、精液体积、精液浓度、PR前向运动精子百分率、（PR+NR）精子活力百分率和精子正常形态百分率等指标, 精液分析所用仪器为以色列SQA_V精液全自动分析仪。

1.5 精子核DNA损伤分析 采用精子染色质扩散实验（Sperm Chromatin Dispersion， SCD）进行精子核DNA完整性检测，结果以 DNA 碎片指数（DFI）表示，试剂盒由深圳华康生物医学工程有限公司提供，严格按照说明书进行操作。

1.6 统计学处理

采用 SPSS21. 0 软件进行统计和分析，计数资料以例数或百分率表示，采用卡方检验分析，计量资料以均数±标准差(x±s )表示，计量资料的比较根据方差是否齐性，分别采用T检验或Dunnett’s T₃ 检验，以P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 Uu和Mh的检出情况 694例男性不育人群检出Uu阳性164例，Mh阳性42例，Uu和Mh混合感染58例；565例健康男性人群检出Uu阳性94例，Mh阳性29例，Uu和Mh混合感染30例；两组人群在支原体总阳性率、Uu阳性率、Uu和Mh混合感染阳性率比较，差异均有统计学意义(均P＜0.05 )；而Mh阳性率差异无统计学意义（P＞0.05）;详见表1。

表1男性不育与健康男性Uu和Mh 的感染情况比较[n(%)]

2.2 男性不育人群精液参数指标和精子核DNA损伤分析 在男性不育人群中，Uu感染组与支原体阴性组比较，分别在液化时间、PR前向运动精子百分率、（PR+NR）精子活力百分率、精子正常形态率和DFI指数上存在统计学差异性（均P＜0.05 )，其他精液参数指标均无差异（均P＞0.05 )；Uu感染组与Mh感染组比较，分别在精子正常形态率和DFI指数上存在统计学差异性（均P＜0.05 )，其他精液参数指标均无差异（均P＞0.05 )；Uu和Mh混合感染组与支原体阴性组比较，分别在液化时间、（PR+NR）精子活力百分率、精子正常形态率和DFI指数上存在统计学差异性（均P＜0.05 )，其他精液参数指标均无差异（均P＞0.05 )；Mh感染组与支原体阴性组在所有精液参数指标和DFI指数上均无差异（均P＞0.05 )；详见表2。

表2 Uu和Mh感染不同结果的男性不育人群精液参数和精子核DNA损伤的情况

注：^*与阴性相比，P＜0.05；^#与Mh阳性比较，P＜0.05

2.3 支原体体外药敏情况 抗菌药物交沙霉素、美满霉素和多西环素分别对3种感染模式敏感率均高于或接近90%；Mh单独或与Uu混合感染时，对于大环内酯类药物中的红霉素、罗红霉素、阿奇霉素和克拉霉素耐药率均接近或超过90%；Uu单独或与Mh混合感染对环丙沙星的耐药率较高，超过70%；三种支原体感染模式对抗菌药物的药敏情况详见表 3。

表3 支原体阳性标本对常用抗菌药物体外药敏试验情况（%）

3 讨论

Uu和Mh是定植于女性和男性泌尿生殖系统中的最小的能自我复制的生物体，可以在射精期间污染精液而引起相应的病理反应。目前怀疑它们参与了男性不育，但仍然存在争议。有很多临床对照研究^[2-3]证实，不育个体和对照之间的患病率存在显著性的差异，还有研究^[9]观察到它们可以黏附于精子的头部和尾部从而严重影响到精子的运动，更有较多研究报道^[2-3]了有或没有解脲支原体感染的不育个体的精液参数如：前向运动，总运动活力和正常形态等存在明显差异性。但是也有像Gdoura等^[4]的研究却未能证明Uu和Mh在精液中的存在使精液的参数发生了改变。不同的研究可能因为所研究的样本量的差异以及研究人群的生活习惯、经济水平和性生活等方面的差异，得出了不同的结论。从我们的研究看，男性不育患者的支原体总阳性率、Uu阳性率、Uu和Mh混合感染阳性率明显高于健康男性人群，Mh虽然也使不育组更高，但是差异不明显。这与大多数的同类研究结论是相似的，进一步证实了生殖道感染的支原体和男性不育存在相关性，同时还表明Uu可能是比Mh更加密切相关的物种。

在我们对男性不育人群精液参数指标和精子核DNA损伤的研究中，Uu感染者相比支原体阴性者液化时间和DFI指数明显升高了，而PR前向运动精子百分率、（PR+NR）精子活力百分率和精子正常形态率等指标则明显降低了，这表明Uu在精液中的存在还是对精子本身或其所处的环境造成了影响的。有研究^[5]表明，Uu感染后导致患者出现的慢性前列腺炎可使前列腺特异性抗原等与精液液化相关的因子缺乏，这可能是Uu感染组液化时间延长的原因之一。Gallegos等^[6]研究显示Uu感染后会导致患者精子DNA碎片率增加从而使精子DNA完整性出现了不同程度的损伤，这与本研究DFI指数明显升高的结论类似。而Uu感染可能导致患者出现附睾炎而造成附睾组织出现氧化和抗氧化平衡紊乱，从而出现的大量活性氧造成精子的损害和死亡，以及Uu对精子的黏附效应可能是造成精子运动能力下降、形态畸形率增加的主要原因。我们的研究中，Mh感染组的上述指标与支原体阴性组比较也存在和Uu相同变化方向量的改变，但是差异是无统计学意义的。另外Uu感染者相比Mh感染者精子正常形态率明显下降和DFI指数明显升高，这都表明Mh对精液参数指标的影响相比Uu是相对较小的，这可能也是不育人群与可育人群比较Uu的感染率相差幅度比Mh要大的原因之一。

因为支原体缺乏细胞壁而对β-内酰胺类药物是天然耐药的，所以治疗支原体的感染临床常用的药物类型主要包括喹诺酮类、大环内酯类和四环素类。从本研究中Uu和Mh对常用抗菌药物的药敏试验结果来看，本地区男性人群中Uu和Mh的药敏情况还是有比较大的差异的。Uu对本组抗菌药物中的大环内酯类和四环素类具有较好的敏感度，除红霉素（54.3%）外基本都保持在85%以上，而对喹诺酮类效果相对较差，敏感度均在40%以下，特别是四环素的耐药达到了71.9%。Mh对大环内酯类药物中的红霉素、罗红霉素、阿奇霉素和克拉霉素耐药率均接近或超过90%，但对交沙霉素却有很好的敏感性(97.2%)；Mh对于喹诺酮类的敏感度也不高，除司帕沙星(47.9)外，其余均低于30%；但是Mh对于四环素类药物敏感度还是不错的，对美满霉素和多西环素均超过94%，四环素也达到了69%。Uu和Mh的混合感染相比单独感染，对药物的敏感度出现了下降，可能是因为混合感染增强了对药物的耐受性从而增强了耐药范围。但对于两类支原体单独感染都具有较好敏感度的交沙霉素、美满霉素和多西环素，混合感染的敏感度均高于或接近90%。因此这3种药物可以作为该地区男性泌尿生殖道感染的经验治疗首选药物。当然，对于患者我们是不建议推行经验治疗的，而应该根据药敏试验的结果来选择药物。

综上所述，Uu与男性不育密切相关并对精液质量参数指标产生了影响，而Mh与男性不育的相关性相对较小。交沙霉素、美满霉素和多西环素对于Uu和Mh单独或者混合感染都具有良好的敏感度，可以作为在该地区治疗支原体泌尿生殖道感染治疗的首选药物。

参考文献

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[3] 刘淳,卢美松.男性不育症患者的精液各项参数与解脲支原体感染相关性分析[J].中国性科学, 2017, 26(09): 108-110.

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[6] 卢文红,梁小薇.《WHO人类精液检查与处理实验室手册(第五版)》修订版及标准化操作培训视频光盘首发仪式暨精液分析质量控制培训班纪实[J].生殖医学杂志, 2014, 23(08): 648.