ELISA联合NAT检测在降低输血传播乙型肝炎病毒的作用研究

ELISA联合 NAT检测在降低输血传播乙型肝炎病毒的作用研究

张西雪

菏泽市中心血站 山东 菏泽 274000

摘要 目的：探讨ELISA（酶联免疫检测）联合NAT（核酸检测）检测在降低输血传播乙型肝炎病毒的作用。方法：本次研究选取血站2018年1月开始至2021年1月期间采集的献血者标本15.5万例作为研究对象，所有献血者标本先做两次ELISA检测，两遍结果都是阴性的标本，再做一次NAT检测。结果：15.5万例献血者标本中第一次ELISA检测检查出乙肝表面抗原（HBsAg）阳性7755例，阳性检出率5%，第二次ELISA检测检查出乙肝表面抗原（HBsAg）阳性7868例，阳性检出率5.08%，147132例献血者标本再做一次NAT检测检查出乙肝病毒基因（HBV-DNA）538例，阳性检出率0.037%。结论：两次ELISA检测与一次NAT检测对比发现ELISA检测存在漏诊情况，ELISA联合NAT检测检出率更高，能有效减低乙型肝炎病毒（HBV）输血感染，保证患者的用血安全。

关键词：酶联免疫检测；核酸检测

乙型肝炎是指由乙型肝炎病毒引起的，以肝脏损伤为主的一种传染性疾病，患者主要临床表现为乏力、恶心、食欲减退、上腹部不适、肝区疼痛等^[1]。乙肝的传染源主要是急性慢性乙肝患者和病毒携带者，传播途径主要包括母婴传播、性接触传播、血液和体液传播。我国是肝病大国，目前乙型肝炎的发病率为5%-6%^[2]。因此针对献血者需加强乙肝检测，降低输血感染的风险。本次研究主要分析ELISA联合NAT检测在降低输血传播乙型肝炎病毒的作用，报告如下。

1 资料与方法

1. 1. 一般资料

本次研究选取血站2018年1月开始至2021年1月期间采集的献血者标本15.5万例作为研究对象，其中男性7.76万例，女性7.74万例，18岁至55岁为该组献血者的年龄范围，均值（30.36±2.64）岁。

1. 2. 方法

标本采集：所有献血者先留取静脉血5ml，使用含有惰性分离胶的EDTA-K2抗凝管留取，用于NAT检测。再留取两份静脉血标本各5ml，使用EDTA-K2抗凝管留取，用于酶联免疫检测，两次酶联免疫检测均为阴性献血者标本再进行核酸检测。

ELISA检测：仪器为奥斯邦全自动酶免分析仪（STAR-FAME），HBsAg ELISA初检和复检试剂购自珠海丽珠生物科技有限公司、美国Epitope Diagnostics公司。将采集的装于EDTA抗凝管的血标本离心（离心力2000g，离心时间15 min）分离血浆，采用两种不同厂家ELISA试剂进行HBsAg检测。每批试验均设立空白对照样本、阴性对照样本，以吸光度/临界值（S/CO）进行结果判定，S/CO≥1.0为阳性，0.7≤S/CO＜1.0为灰区，S/CO＜0.7为阴性。

NAT检测方法：仪器为ChiTas 1200 核酸血液筛查系统（上海浩源生物科技有限公司），试剂盒购自上海浩源生物科技有限公司。将装在惰性分离胶EDTA-K2抗凝管的血标本离心（离心温度20 °C，离心力1800g，离心时间15 min，）分离血浆。将血液标本选取8个标本为一个混样池，混样测定阴性为阴性，混样测定阳性予以拆分检测，拆分阴性者判为阴性，拆分后阳性者判为阳性。

1. 3. 观察指标

观察献血者两次ELISA检测结果和NAT检测结果

2 结果

第一次ELISA检测（n=15.5万）：HBsAg阳性7755例，阳性检出率5%。

第二次ELISA检测（n=15.5万）：HBsAg阳性7868例，阳性检出率5.08%。

NAT检测（n=147132）:HBV-DNA 538例，检出率0.037%。

3. 讨论

ELISA（酶联免疫）检测是利用抗原抗体结合专一性，进行免疫反应的定性和定量测量方法。通过免疫吸附剂、结合物、酶反应的底物可设计出各种不同类型的检测方法^[2]。ELISA检测有双抗体夹心法测抗体、竞争法测抗原、间接法测抗体等多种类型。其中间接法测抗体主要用于对病原体抗体的检测，进行传染病的诊断^[3]。

乙肝病毒NAT检测是DNA检测乙型肝炎病毒的一种技术方法，是对乙肝病毒的复制性和传染性的主要判断依据，HBV-DNA即乙肝病毒核酸，可以反映乙肝病毒在人体内复制程度的强弱^[4]。一般认为值大于10的三次方为阳性，3-5次方是低量复制，5-7考虑中等量，大于7次方则为大量复制。ELISA检测灵敏度可达（0.05-0.5）ng/mL，操作相对简单，且检测快、费用低等优点，但是ELISA检测还是存在很多不足，其中重要的一点是不能准确判断病毒的复制，而乙肝NAT检测刚好可以弥补了这一缺陷，ELISA联合NAT检测能有效提高乙型肝炎病毒的诊断率更高，为治疗提供依据

^[5]。

本次研究选取15.5万例献血者标本，每一位献血者留取3份静脉血标本，第一次ELISA检测阳性7755例，第二次ELISA检测阳性7868例，再将147132例两遍酶联免疫检查均为阴性的献血者再取一份静脉血标本NAT检测HBV-DNA 538例，ELISA联合NAT检测能有效提高乙型肝炎病毒的检出率，准确度更高。

综上所述，两次ELISA检测与一次NAT检测对比发现ELISA检测存在漏诊情况，ELISA联合NAT检测检出率更高，能有效减低乙型肝炎病毒（HBV）输血感染，保证患者的用血安全，值得临床推广。

参考文献

[1]李宽,宁会彬,尚佳.乙型肝炎病毒感染与肝癌临床研究最新进展[J].西南医科大学学报,2021,44(06):607-611.

[2]张晓荣,李微.乙型肝炎相关肝细胞癌患者血清AFP、VEGF、AFU水平与微血管侵犯的相关性分析[J].检验医学与临床,2021,18(22):3294-3297.

[3]米咏梅,权力,李泽华等.2010—2020年孟州市乙型肝炎流行病学特征分析[J].中国医学工程,2021,29(11):84-86.DOI:10.19338/j.issn.1672-2019.2021.11.021.

[4]黄戌燕.ELISA联合NAT检测在降低输血传播乙型肝炎病毒效果分析[J].临床医药文献电子杂志,2019,6(51):131-132.DOI:10.16281/j.cnki.jocml.2019.51.106.

[5]马艳华.酶联免疫吸附试验对乙型肝炎表面抗原阴性献血者核酸筛查及降低输血传播乙型肝炎病毒效果分析[J].中国医学工程,2017,25(10):40-42.DOI:10.19338/j.issn.1672-2019.2017.10.013.