HPLC测定注射用兰索拉唑中兰索拉唑的含量以及有关物质

HPLC测定注射用兰索拉唑中兰索拉唑的含量以及有关物质

符土青 于辉

北京鑫开元医药科技有限公司海南分公司， 海南 海口 570311

摘要：目的：建立高效液相色谱法测定注射用兰索拉唑的有关物质。方法:采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（SymmetryShield^TM RP C18，4.6mm×150mm，5μm）色谱柱，以水-三乙胺（60:1）(用磷酸调pH值至pH6.2) ，将该溶液与40体积的乙腈混合为流动相，检测波长为285nm，流速为1.2ml/min。研究了有关物质检查方法的特异性，考察了已知杂质的线性、精密度、溶液稳定性和回收率。结果:所有杂质峰和主峰均能很好地分离，空白辅料溶液保留3min后无色谱峰出现。杂质A～E的定量限分别为0.0170.016、0.019、0.023和0.009g/ml。杂质A～E的检出限分别为0.006、0.005、0.006、0.008和0.003 g/ml。杂质A～E在三种浓度下的平均回收率分别为97.7%、98.2%、100.4%、102.4%和97.0%，均在97.0%至103.0%之间，相对标准偏差分别为2.8%、2.0%、2.5%、2.1%和3.0%。杂质A的峰面积(y)为0.017～3.27μg/ml，杂质B为0.016～12.97μg/ml，杂质C为0.019～4.09μg/ml，杂质D为0.023～4.40μg/ml，杂质E为0.009～3.20μg/ml。结论:该方法专属性强，辅料对有关物质的测定无干扰。该方法灵敏、简便、可靠、准确、重现性好，适用于注射用兰索拉唑中有关物质的测定。

关键词：HPLC测定；注射用兰索拉唑；兰索拉唑；含量；有关物质

引言

兰索拉唑和右旋兰索拉唑是一类苯并咪唑类质子泵抑制剂，广泛用于治疗反流性食管炎和佐林格-埃利森综合征。质子泵抑制剂兰索拉唑是日本武田公司成功开发的Ogilvy & Mather的改进产品。5月份录取后，在美国上市。在世界七大医药市场中，武田公司、公嘉制药公司、Wyeth和Abbott在世界七大医药市场的销售额达数十亿美元。在中，被美国福布斯杂志评为世界十大畅销药物之一。兰索拉唑是抑制胃酸分泌的新药。其结构特点是氟被引入侧链，因此其生物利用率高于奥美拉唑，其抗幽门螺杆菌的抗菌活性是奥美拉唑的两倍。兰索拉唑不耐酸。目前，口服兰索拉唑片常用于耐胃药涂层和耐胃药胶囊，效果缓慢。但是，静脉兰萨唑给药途径的改变提高了该产品的生物利用率，缩短了作用时间，满足了不同患者的临床需要。为保证产品质量，采用高效液相色谱法对薪资确定方法进行了研究。

1资料

1.1仪器

电子天平；高效液相色谱仪，色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（SymmetryShield^TM RP C18，4.6mm×150mm，5μm）。

1.2 试药

注射用兰索拉唑；乙腈；水；甲醇，三乙胺；磷酸。

2方法

2.1色谱条件

(1)色谱柱: 十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（SymmetryShield^TM RP C18，4.6mm×150mm，5μm）；(2)流动相: 水-三乙胺（60:1）（用磷酸调pH值至pH6.2） ，将该溶液与40体积的乙腈混合，流速为每分钟1.0ml；(3)检测波长:284nm；(4)进样量为20uL。理论板数应大于1500，具体计算应严格按照兰索拉唑峰进行。

2.2线性关系

参考解决方案分别为0.5ml、2.0ml、4.0ml、5.0ml、6.0ml和10.0ml，把它们放入棕色25ml容量瓶中，用溶剂稀释至刻度，摇匀，得到相应的溶解度系列，然后将它们注射20uL到液相色谱仪中，详细记录色谱图。绘制预设曲线，以浓度（µg/ml）为横坐标，峰面积为纵坐标，求得线性回归方程。结果表明，16～320 ug/ml范围内浓度与色谱峰面积的线性关系符合相关要求。

3结果

3.1专属性试验

见图１。

3.1.1空白辅料干扰试验

精密称取空白辅料适量，置于10ml量瓶中，加稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取20μl注入液相色谱仪。空白辅料溶液在保留时间3min后无色谱峰出现，不干扰本品的有关物质测定。见图２。

3.1.2供试品溶液

取注射用右兰索拉唑适量，精密称定，用稀释剂溶解并稀释制成每1ml中含右兰索拉唑1mg的溶液，作为供试品溶液。在“２．１”的色谱条件下进样，记录色谱图。见图３。

3.1.3已知杂质对照品混合溶液

精密称取右兰索拉唑、起始物料（氯化物，见图４“６”注释）、杂质Ａ～Ｅ对照品适量，分别加少量稀释剂超声溶解并用稀释剂稀释至刻度，摇匀，作为储备液；精密移取各储备液1ml置同一10ml量瓶中，加稀释剂稀释至刻度，摇匀，作为混合对照品溶液，取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图。结果显示，各杂质峰、起始物料峰、右兰索拉唑峰之间的分离度均＞１．５，达到系统适用性要求。见图４。

3.2重复性试验

在同一批注射剂和胃药中准确称重。对于溶液的制备，必须严格遵循试验样品1和2的方法，并按照相同的控制方案方法工作。注入20uL样品，仔细记录色度图，并用外部标准方法计算内容。注射药物和口服胃液耐药片的RSD分别为0.83%、0.83%和0.90%。结合结果表明试验是有效的。

3.3回收率试验

称量10瓶处方量的辅料，放入研磨碗中均匀搅拌，磨成细粉，然后加入80%、100%和120%的处方量10瓶，制成不同浓度(低、中、高)的模拟样品。取适量以上细粉，放入棕色25ml容量瓶中，通过添加适量甲醇和搅拌溶解主要指标，稀释后均匀缩放和搅拌。此外，10片胃药被放入同一恢复试验为注射准备的砂浆中。从上述两种解决方案中各取20uL，条件的确定应严格根据内容，回收率计算，平均回收率为100.0%，RSD为1.08%，胃计算膜尾99.63%，RSD为1.03%。

3.4精密度试验

兰索拉唑无菌冷冻干燥产品连续注射5次测定。分别计算了公共峰的停留时间和峰面积，并计算了RSD值。结果表明其相对标准偏差(RSD)低于2%。因此，结果表明该仪器具有良好的精密度。

3.5稳定性试验

采用兰索拉唑参考溶液(1.0mg/ml)、兰索拉唑杂质A参考溶液(0.01mg/ ml)、兰索拉唑杂质B参考溶液(0.01 mg/ml)和兰索拉唑杂质C参考溶液(0.01mg/ ml)，分别采用上述参考溶液20μl。兰索拉唑峰面积的RSD为0.17%，杂质A的RSD峰面积为0.09%，杂质B的RSD峰面积为0.16%，杂质C的RSD峰面积为0.06%。测试结果表明，兰索拉唑和各杂质参考溶液在12小时内稳定。

3.6有关物质和含量测定

避光操作，精密称取注射用兰索拉唑适量(相当于兰索拉唑50mg)，置于棕色25ml容量瓶中，加入流动相溶解，稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。精密量取1ml的贮备液液，置于100ml容量瓶中，用流动相稀释至刻度，作为对照溶液，精密量取供试品溶液与对照溶液，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。

结束语

概括地说，HPLC在测定注射用兰索拉唑中的应用具有准确性、简便性和良好重现性等优点，值得推广应用。

参考文献

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