肠道传染性致病菌的实验室检测

肠道传染性致病菌的实验室检测

江泽兰

泸州市江阳区疾病预防控制中心 四川 泸州 646000

随着社会经济快速发展，人们的饮食结构开始变化，逐渐转变为多样化饮食，结合当下情况来看，饮食的多元化使得肠道传染性疾病事件频发。近年来，各类集体食物中毒事件发生率上升，对传染病的控制提出了更高的要求，尤其在诊断和控制上，如何有效、快速的对肠道致病菌进行诊断，进一步实施控制，是当下关注的热点。随着检验技术的进步，各类肠道传染性致病菌检测措施应用于临床，各种方式具有独特的优势，在传染性肠道疾病的诊断中发挥了显著的效果。

一、肠道传染性致病菌的检测方法介绍

1. 抗血清凝集技术

近年来，抗体制备技术不断进步，特别是单克隆抗体的制备，有效加强了细菌凝集试验的特异性，并且更多的应用于细菌的分型和鉴定。经过相关研究显示，肠道菌共同抗原（ECA）免疫兔制备兔抗ECA抗血清，辅助间接血凝实验，在大肠埃希氏菌、沙门氏菌以及志贺氏菌中均表现出了强特异性，在保证结果准确的同时，显著缩短了检验周期。

2. 荧光抗体检测技术

该方式可以实现快速检验，同时根据方式的差异也分为直接法和间接法。前者是在样本上加入已知特异性荧光标记的抗血清，经过处理后通过显微镜的观察获取结果。后者是在样本上加入已知的细菌特异性抗体，经过处理后，再加入荧光标记的第二抗体。经过相关资料显示，荧光抗体检测技术在鱼类的致病菌检验中，较之其它血清诊断方式，速度更快，操作相对快捷。

3. 酶联免疫技术

这种方式在当下临床中更多的对病原微生物进行检验，在对李斯特菌的检验中，可以在短期内获取结果，并且可以分辨单增李斯特菌和非病原性李斯特菌。在单抗夹心酶联免疫法辅助选择性增菌培养法中对大肠埃希氏菌进行检验，表现出了理想的敏感度。

4. 免疫磁珠技术

该方式是选择样本和具有抗目标微生物抗体的磁珠相结合，将微生物和免疫磁珠结合，使用磁场将微生物分离，将其置入鉴定培养基进行检测。免疫磁珠技术省略了培养细菌的环节，其检测的敏感性受到了广泛的关注。有实验证明，该方式在李斯特菌的检验中，具有更高的检出率，同时配合免疫电化学发光法，缩短了检验时间，敏感性理想。

5. 噬菌体鉴定法

细菌噬菌体寄主的范围较窄，一般情况下只能侵袭亲缘关系较近的菌种，所以更多应用在同类但不同品系的菌种检测。该方式适用于某些致病菌的检验，例如金黄色葡萄球菌、肠杆菌科细菌等，并且发挥了明显效果，其优势在于操作便捷、高检出率等，常用于食品和餐具的检测，实施于沙门氏菌以及志贺氏菌的检测中，效率明显。

6. PCR技术

PCR的检验方法，在国内外受到了广泛的应用，且已经开发出了多种试剂盒，例如志贺氏菌、绿脓杆菌、沙门氏菌、病原性大肠埃希菌等试剂盒，一些试剂盒获得了AOAC的认可。同时，荧光定量PCR技术在食品的检测中应用广泛，且已有了新突破，当下已经开始开发相关的检测试剂盒。其中PCR联合探针杂交技术、多重PCR联合酶联微孔板杂交技术，更多的应用于食源性致病菌的检验中。

7. 免疫层析法

该方式是在90年代初，建立在免疫渗滤基础上的一种快速检验方式，并且该方式适用于体液中不存在的物质或正常含量极低而特殊情况下异常升高的物质，其特点在于灵敏度、多元化检验以及定量半定量检验。但是这种方式的缺陷同时较为明显，只能作为阴性对照和试验有效的指示，对于阳性敏感性的质控则需要在同一试剂上再次测试。这种方式因为适用范围较广，被更多的使用在传染性肝病、性病以及寄生虫的检验中。

二、肠道传染性致病菌的质量控制

在应用ELISA检验方法时，前期在细菌培养的环节中，样本处理方式以及污染等情况影响了检验的准确度，同时该方式因为自身灵敏度的原因，对低灵敏度的样本频发漏检情况，导致结果呈现假阴性。因为肠道致病菌的变异广泛存在，经过变异后的致病菌结构会发生变化，并且药物的应用也会改变细胞的结构，对细胞壁造成损伤，在ELISA的检验中，上述因素均会影响检验结果。

PCR检验方式较之其他技术，具有极高的灵敏度，操作便捷被广泛应用，但是该方式对检验人员以及仪器的要求较高，易产生假阳性结果，对低致病菌载量的样品依旧需要短期培养才能保证质量和灵敏度。

现目前，多数实验室都选择成品培养基，但成品培养基的市场产品质量参差不齐，可能会对检验结果产生一定影响。因此，合理选择质量理想的培养基以及诊断试剂可以有效提升检验质量。同时，在病原微生物实验中，检验人员必须建立严格的有菌观念，掌握熟练的无菌操作技巧，其中有菌观念是指要明确认识到细菌等微生物广泛的分布于自然界，包括人或动物的皮肤、黏膜、排泄物等，室内外空气、尘埃以及所有未消毒灭菌的物品上都存在各种微生物，在实验过程以及一切医疗环境中都要防止这些微生物的污染；无菌操作则是指在操作中要防止自然界的微生物污染实验材料，防止具有感染性的实验材料传染人或污染环境。在上述基础上，为保证结果的准确性，实验室还需建立各项制度，完善各项操作规程，积极开展人员培训等措施进行保障，保证从样品采集、运输、实验室操作到结果报告全程质量控制。

三、小结

总之，在传染性肠道疾病的检验中，当下已经有很多方式得到了广泛应用，无论何种方式，都存在其优势和缺陷，在临床实施过程中，更多的选择一种或两种检验方法辅助进行，只有不断完善检验方法，才能对各类致病菌进行有效检验，利于疾病的诊断和控制。在实施检验的同时，落实质量控制工作，从人员、仪器、材料、方法、环境几个环节进行控制，保证检测数据的真实性以及完整性。